Que é PCR quantitativo do tempo real (qPCR)?

A reacção em cadeia da polimerase (PCR) é um método de uso geral para amplificar o ADN, que pode então ser usado para a clonagem de gene, arranjando em seqüência, e para a manipulação do gene. A técnica foi aplicada igualmente ao diagnóstico da doença.

Crédito: Vit Kovalcik/Shutterstock.com

É importante estudar o ADN para estabelecer a função do gene e o efeito das mutações na doença. A análise do ADN igualmente permite a revelação das curas. No PCR, o ADN é extraído de uma pilha e amplificado, gerando milhares de cópias para a análise.

A amplificação é conseguida com o uso dos nucleotides e dos moldes do RNA conhecidos como primeiras demão. Uma enzima chamada polimerase de Taq estende as primeiras demão usando os nucleotides livres, produzindo cópias idênticas da região de interesse.

Que é PCR quantitativo do tempo real (qPCR)?

O PCR quantitativo do tempo real (igualmente conhecido como o qPCR) é uma maneira de encontrar quanto de uma secção específica do ADN lá está em uma amostra, no tempo real. Isto permite que as secções do ADN (ou, ácidos nucleicos) sejam seleccionadas simultaneamente.

Usa tinturas fluorescentes não específicas, ou as pontas de prova seqüência-específicas do ADN que contêm oligonucleotides do fluorescente-repórter (fragmentos maiores do ADN) para detectar os produtos do PCR enquanto são produzidos. Poder ver directamente a presença de um nucleotide específico pode mostrar mesmo se um organismo específico esta presente e pode destacar anomalias específicas do gene, tais como o gene de CTFR conhecido para causar a fibrose cística.

Determinar o número de ácidos nucleicos específicos actuais pode ser feita em duas maneiras: pela quantificação relativa ou pela quantificação absoluta. A quantificação absoluta dá compara a amostra a um padrão do ADN para medir o número exacto de moléculas do ADN do alvo actuais. Contudo, a quantificação relativa usa os genes internos da referência (genes dentro do ADN da amostra próprios) para determinar a quantidade do presente do gene do alvo.

É o qPCR o melhor método de determinar o ADN?

O PCR quantitativo do tempo real é muito sensível às mudanças na expressão do ADN. Este é vantajoso comparado a outros métodos actuais, tais como os microarrays, como o resultado final pode ser considerado antes do valor-limite, dando mais hora para a análise mais aprofundada. Ao contrário, o qPCR exige muito para entrar o RNA no início da reacção, e é mais sensível jejuar, reacções da alto-produção, que aumenta as possibilidades da falha.

Onde é o qPCR de uso geral?

Na pesquisa e nos laboratórios do hospital, o qPCR é usado principalmente para a pesquisa do ADN e no diagnóstico de doenças virais, bacterianas, e genéticas tais como o cancro e doenças congenitais.

O PCR quantitativo do tempo real é usado igualmente na indústria. Por exemplo, pode ser usado para analisar o bioburden dos produtos ou das matérias primas tais como o alimento e as medicamentações. O método pode igualmente ser usado para encontrar mesmo se um alimento contem GMO (organismo Genetically alterado), procurando a presença de um transgene dentro do ADN de produto de planta.

Fontes:

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Last Updated: Aug 23, 2018

Written by

Phoebe Hinton-Sheley

Phoebe Hinton-Sheley has a B.Sc. (Class I Hons) in Microbiology from the University of Wolverhampton. Due to her background and interests, Phoebe mostly writes for the Life Sciences side of News-Medical, focussing on Microbiology and related techniques and diseases. However, she also enjoys writing about topics along the lines of Genetics, Molecular Biology, and Biochemistry.

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