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¿Cuál es polimerización en cadena cuantitativa en tiempo real (qPCR)?

La reacción en cadena de polimerasa (PCR) es un método de uso general para amplificar la DNA, que se puede entonces utilizar para la clonación de genes, ordenando, y para la manipulación del gen. La técnica también se ha aplicado a la diagnosis de la enfermedad.

Haber: Vit Kovalcik/Shutterstock.com

Es importante estudiar la DNA para establecer la función del gen y el efecto de mutaciones sobre enfermedad. El análisis de la DNA también permite el revelado de vulcanizaciones. En la polimerización en cadena, la DNA se extrae de una célula y se amplifica, generando millares de copias para el análisis.

La amplificación se logra con el uso de los nucleótidos y de los patrones del ARN conocidos como pinturas de fondo. Una enzima llamada polimerasa de Taq amplía las pinturas de fondo usando los nucleótidos libres, produciendo las copias idénticas de la región de interés.

¿Cuál es polimerización en cadena cuantitativa en tiempo real (qPCR)?

La polimerización en cadena cuantitativa en tiempo real (también conocida como qPCR) es una manera de descubrir cuánto de una sección específica de la DNA allí está en una muestra, en tiempo real. Esto permite que las secciones de la DNA (o, ácidos nucléicos) sean revisadas simultáneamente.

Utiliza los tintes fluorescentes no específicos, o las antenas serie-específicas de la DNA que contienen los oligonucleótidos del fluorescente-reportero (fragmentos más grandes de la DNA) para descubrir los productos de la polimerización en cadena mientras que se producen. El poder ver directamente la presencia de un nucleótido específico puede mostrar independientemente de si un organismo específico es presente y puede destacar anormalidades específicas del gen, tales como el gen de CTFR sabido para causar fibrosis quística.

La cuantificación del número de ácidos nucléicos específicos presentes se puede hacer de dos maneras: por la cuantificación relativa o la cuantificación absoluta. La cuantificación absoluta da compara la muestra a un patrón de la DNA para medir el número exacto de moléculas de la DNA del objetivo presentes. Sin embargo, la cuantificación relativa utiliza los genes internos de la referencia (genes dentro de la DNA de la muestra sí mismo) para determinar la cantidad del presente del gen del objetivo.

¿Es el qPCR el mejor método de cuantificar la DNA?

La polimerización en cadena cuantitativa en tiempo real es muy sensible a los cambios en la expresión de la DNA. Esto es ventajoso comparada a otros métodos actuales, tales como microarrays, como el resultado final se puede considerar antes de la punto final, dando más hora para el análisis adicional. En cambio, el qPCR requiere mucho para entrar el ARN al inicio de la reacción, y es más sensible ayunar, las reacciones de la alto-producción, que aumenta las ocasiones de la falla.

¿Dónde es el qPCR de uso general?

En la investigación y laboratorios del hospital, el qPCR se utiliza principal para la investigación de la DNA y en la diagnosis de enfermedades virales, bacterianas, y genéticas tales como cáncer y enfermedades congénitas.

La polimerización en cadena cuantitativa en tiempo real también se utiliza en industria. Por ejemplo, puede ser utilizada para analizar el bioburden de productos o de materias primas tales como comida y medicaciones. El método se puede también utilizar para descubrir independientemente de si un alimento contiene GMO (organismo genético modificado), buscando la presencia de un transgén dentro de la DNA del producto vegetal.

Fuentes:

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Last Updated: Aug 23, 2018

Written by

Phoebe Hinton-Sheley

Phoebe Hinton-Sheley has a B.Sc. (Class I Hons) in Microbiology from the University of Wolverhampton. Due to her background and interests, Phoebe mostly writes for the Life Sciences side of News-Medical, focussing on Microbiology and related techniques and diseases. However, she also enjoys writing about topics along the lines of Genetics, Molecular Biology, and Biochemistry.

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