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¿Cuál es el borrar meridional?

El borrar es el proceso por el cual la DNA, el ARN o las proteínas se transfieren sobre una membrana para ser visualizados.

Haber: Paul Cowan/Shutterstock.com

El primer de estos métodos era el borrar meridional, se convirtió en 1975 por Edward meridional, y se utiliza para descubrir la serie de los fragmentos de la DNA. Desde entonces, se han desarrollado dos otros métodos, llamado Northern y el borrar occidental. Éstos son los procesos que se utilizan para determinar series del ARN y de la proteína, respectivamente.

Metodología de borrar meridional

Los fragmentos de la DNA se generan con las enzimas de la restricción y son separados inicialmente por talla en un proceso llamado electroforesis del gel. Alcalino entonces se utiliza para desnaturalizar la DNA duplicar-trenzada, formando únicos cabos. La DNA entonces es transferida sobre una nitrocelulosa o una hoja del nylon colocando una membrana sobre el gel y usando el flujo del almacenador intermedio para animar el movimiento de la DNA del gel a la membrana.

El flujo capilar y la transferencia del vacío son los dos métodos mas comunes usados para transferir los fragmentos de la DNA. En el flujo capilar, el gel se coloca encima del nivel de almacenador intermedio en una cuadra que soporta con una membrana colocada en capota. Una pila de toallas absorbentes después se coloca sobre la membrana y se utiliza para absorber el almacenador intermedio debajo del gel, levantando los fragmentos de la DNA hacia arriba sobre la membrana.

Usando transferencia del vacío, la membrana se coloca debajo del gel y ambos se sumergen en almacenador intermedio. Un vacío entonces se utiliza para crear un flujo que tiran de los fragmentos de la DNA hacia abajo sobre la membrana.

La calefacción o la radiación ULTRAVIOLETA entonces se utiliza para asegurarse de que los fragmentos de la DNA siguen sujetados a la membrana permanente, mientras que mantiene la ordenación específica de la DNA. Las antenas etiqueta de una sola fila entonces se utilizan para atar para apuntar series.

La hoja se incuba con estas antenas y solamente las antenas complementarias atan. Las antenas no-complementarias entonces se lavan de la membrana, asegurándose de que solamente sigue habiendo las antenas encuadernadas. Estas antenas se pueden entonces descubrir por la autoradiografía para revelar la configuración del hibridación en una película de radiografía.

Usos de borrar meridional

El borrar meridional tiene muchas diversas aplicaciones. En primer lugar, los cambios de gen pueden ser analizados. Por ejemplo, en inmunología este método se puede utilizar para determinar los cambios clónicos de los genes del receptor del linfocito T. En segundo lugar, los fragmentos específicos de la DNA se pueden determinar dentro de una mezcla de muchos otros fragmentos.

Otros ejemplos de aplicaciones incluyen polimorfismo de largo de fragmento de restricción (RFLP) y análisis variable de la repetición en tándem (VNTR) del número. El PTFR utiliza las diferencias de largo en series homólogas de la DNA para correlacionar los genomas, y se puede utilizar en pruebas forenses y de paternidad.

El análisis de VNTR utiliza las diferencias de largo de las series de nucleótido relanzadas para formar una huella dactilar de la DNA, un método que sea de uso general en paternidad y la prueba forense.

Estos métodos se pueden también utilizar en la diagnosis de la enfermedad causada por la mutación, por ejemplo anemia de la célula falciforme. Esta condición genética es debido a un único polimorfismo del nucleótido (A a T) en el gen de la beta-globina, dando por resultado la hemoglobina anormal.

El borrar meridional para el síndrome frágil de X

Las manchas blancas /negras meridionales se han utilizado extensivamente para ayudar a determinar genes con regiones amplificadas de la repetición. Éstas son las series cortas, repetidores en la DNA que no codifican productos del gen. Un ejemplo donde el borrar meridional puede ser útil está en la diagnosis del síndrome frágil de X. Esta condición genética es debido al aumento en la región de la repetición de CGG/CCG que está situada dentro del gen FMR1.

Este gen contiene generalmente entre 5-40 regiones de la repetición. Los individuos con 55-200 repeticiones tienen un premutation del gen FMR1, y los individuos con las repeticiones >200 tienen síndrome frágil de X. El aumento en repeticiones lleva a la metilación del gen, que inhibe la transcripción y previene la producción de la proteína de FMRP. Esta proteína se requiere para la función normal del sistema nervioso, por lo tanto la baja de la función de la proteína lleva a los síntomas del síndrome frágil de X.

En diagnosis, la enzima metilación-sensible EclX1 de la restricción y la enzima Metilación-insensible EcoR1 se utilizan para permitir la diferenciación de alelos desnaturalizados y de alelos no-desnaturalizados. Los alelos desnaturalizados se cortan solamente una vez para dar un fragmento singular de la DNA del kb 5,1.

No obstante los alelos no-desnaturalizados se cortan dos veces, produciendo un fragmento del kb 2,8. las repeticiones No-desnaturalizadas del premutation (<200) pueden por lo tanto ser distinguidas de repeticiones desnaturalizadas de la mutación de alrededor 200 repeticiones de largo, como borrar meridional se pueden utilizar para determinar las tallas de los fragmentos de la DNA.

Perspectivas futuras

El borrar total, meridional es un método importante en la diagnosis y el estudio de la enfermedad (tal como síndrome de X y anemia frágiles de la célula falciforme) y del análisis de la DNA por otros motivos (por ejemplo la prueba forense y de la paternidad).

Sin embargo, el borrar meridional es muy técnico complejo, costoso, laborioso y requiere una gran cantidad de muestra de la DNA. Los nuevos métodos por lo tanto están reemplazando despacio borrar meridional, por ejemplo polimerización en cadena en tiempo real. Este proceso es el borrar mucho más fácil y más rápidamente que meridional y requiere solamente un volumen muy pequeño de DNA.

Fuentes:

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Last Updated: Feb 26, 2019

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

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