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Que TUNEL souille-t-il ?

Dépistage d'apoptose

Apoptose

Crédit d'image : Kateryna Kon/Shutterstock.com

Marquage terminal de fin d'entaille de dUTP de transférase de deoxynucleotidyl, également connu sous le nom de la souillure de TUNEL ou l'analyse de TUNEL, est une technique robuste pour le dépistage de l'apoptose.

Ce genre de mort cellulaire est connu pour être caractérisé par fragmentation nucléaire d'ADN aux nucleases. La souillure de TUNEL a été développée pour trouver l'apoptose en recensant ces interruptions d'ADN.

L'apoptose est un type génétiquement réglé de mort cellulaire qui est indispensable à de nombreux procédés biologiques, de l'embryogenèse au vieillissement, et il est même impliqué dans beaucoup de maladies.

L'apoptose est visé dans plusieurs demandes de règlement pour la maladie, telle que les anti-inflammatoires non-stéroïdiens et les demandes de règlement anticancéreuses. La recherche continue à développer les traitements neufs qui sont visés modifiant l'apoptose pour traiter un certain nombre de maladies.

Pour cette raison, la souillure de TUNEL est devenue un outil indispensable pendant qu'elle permet à des scientifiques de gagner une compréhension plus profonde du rôle de l'apoptose dans la maladie, les aidant pour développer des demandes de règlement basées sur apoptose neuves.

Tandis que l'évaluation morphologique a apparu comme méthode normale pour l'identification et la quantification de l'apoptose, la souillure de TUNEL demeure une alternative de confiance et fiable qui a beaucoup d'avantages.

Par exemple, la méthode de TUNEL peut être plus rapide que des solutions de rechange, et peut parfois être plus sensible, selon le protocole utilisé. De plus, parce que la souillure de TUNEL vérifie les interruptions d'ADN qui se produisent dès l'abord dans l'apoptose, elle peut trouver des cellules d'apoptotique avant quand l'évaluation morphologique pourrait les recenser.

Les éléments de la souillure de TUNEL

La technique de TUNEL souillant des exploits l'activité de l'enzyme terminale de transférase (TdT) de deoxynucleotide. Pour conduire le protocole du début à la fin cela prend environ une à deux heures, cependant, ceci ne comprend pas le moment nécessaire pour la préparation ou la culture cellulaire de tissu.

Le procédé voit TdT ajouter des deoxynucleotides au 3' - terminus d'hydroxyle des fragments d'ADN qui interrompent à la phase finale d'apoptose. Certaines cellules du système immunitaire expriment TdT, qui est en activité pendant la recombinaison de V (D) J.

TUNEL souillant des utilisations une marque et des attaches fluorescents ou chimiques aux nucléotides qui ont été ajoutés au 3' - terminus d'hydroxyle d'ADN se brise par TdT. Les études ont conclu que la méthode de TUNEL est plus sensible que l'analyse in situ alternative de translation de coupure (N'EST PAS) parce qu'elle produit d'une intensité plus grande de marque des cellules d'apoptotique.

Types de souillure de TUNEL

La photomicroscopie est la plus employée souvent pour analyser les caractéristiques produites par TUNEL souillant, bien que la cytométrie de flux puisse également être employée pour analyser la souillure fluorescente de TUNEL.

Il y a trois techniques principales utilisées dans des techniques de coloration de TUNEL, la première conjugue un nucléotide à une teinture fluorescente, le plus couramment ceci est FITC. La deuxième méthode est où des nucléotides biotine-étiquetés sont liés par le streptavidin-HRP et trouvés avec une forme d'un substrat chromogène de HRP, habituellement la LIMANDE, qui convertit les nucléotides attachés en couleur brune ainsi ils sont facilement visibles.

La technique finale voit les nucléotides de digoxygenin-, de bromo-, de digoxygenin-, ou FITC-étiqueté grippant avec des anticorps spécifiques, qu'une teinture fluorescente ou une enzyme a étiquetés pour le dépistage chromogène.

Applications de la souillure de TUNEL

La découverte de plus au sujet de la façon dont l'apoptose fonctionne, sont devenues indispensable à la recherche et développement des approches cliniques neuves pour les nombreuses maladies et des troubles dus à son rôle fondamental dans la maladie.

Les conditions comprenant les maladies neurodegenerative, telles que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la sclérose latérale amyotrophique, les blessures ischémiques après rappe, la ré-perfusion, et l'infarctus du myocarde, ainsi que les maladies auto-immune telles que l'hépatite, la greffe contre la maladie d'hôte, et le SIDA tout le présent ont augmenté les niveaux de l'apoptose qui sont considérés une caractéristique de la maladie. De plus, l'apoptose diminué s'est avéré caractéristique des affections auto-immune telles que des lupus érythémateux disséminés, et de quelques viraux infection.

La souillure de TUNEL a été principale à augmenter la connaissance autour de l'apoptose dans ces maladies. Par exemple, elle a été principale pour rechercher qui s'est mise à explorer la nature de l'apoptose dans la maladie d'Alzheimer.

TUNEL souillant les scientifiques aidés pour confirmer que la perte neuronale primaire de cellules et dans la réaction glial qui est caractéristique de l'AD est liée à l'apoptose.

La souillure de TUNEL a été employée comme méthode fiable d'identification d'apoptose dans de nombreuses études d'AD, permettant à des chercheurs de comparer efficacement les cerveaux des populations en bonne santé contre ceux à l'AD afin d'élucider les différences important dans le comportement d'apoptose entre les deux.

De même, la souillure de TUNEL a la connaissance de base prouvée à l'avancement de notre compréhension de la façon dont l'apoptose se manifeste dans la maladie de Parkinson (PD). Elle a été employée dans les études qui ont découvert cet apoptose sont susceptibles un mécanisme de mort cellulaire indispensable en palladium, mettant en valeur que c'est une cause sous-jacente importante de la mort neuronale nigral, qui est caractéristique du palladium.

Suite à ceci, la souillure de TUNEL a découvert l'activité influente de l'apoptose dans les infections telles que la rage et l'herpès, ainsi qu'étant principale en expliquant la valeur thérapeutique des demandes de règlement exploratoires neuves.

La souillure de TUNEL a joué un rôle important dans les études examinant la relation entre l'apoptose et toutes les maladies relatives mises en valeur ci-dessus. Il est susceptible de continuer à être employé pour explorer la pathologie et pour aider à l'innovation plus de traitements efficaces qui visent l'apoptose anormal.

À l'avenir, nous pouvons compter voir des options neuves de demande de règlement apparaître pour des maladies liées à l'apoptose en raison de la recherche qui s'est fondée sur le TUNEL souillant la méthode.

Sources

·         Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M. et Kioussi, C. (2012). Dépistage d'apoptose par analyse de TUNEL. Méthodes en biologie moléculaire, pp.41-47. https://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-61779-860-3_5

·         Mochizuki, H., Goto, K., Mori, H. et Mizuno, Y. (1996). Dépistage histochimique d'apoptose dans la maladie de Parkinson. Tourillon des sciences neurologiques, 137(2), pp.120-123. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0022510X9500336Z

·         Renehan, A. (2001). Ce qui est apoptose, et pourquoi est lui important ?. BMJ, 322(7301), pp.1536-1538. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1120576/

·         Perng, G. (2000). Apoptose neuronal viro-induit bloqué par la transcription latence-associée de virus herpès simplex. La Science, 287(5457), pp.1500-1503. https://science.sciencemag.org/content/287/5457/1500

·         Smale, G., Nichols, N., Brady, D., Finch, C. et Horton, W. (1995). Preuve pour la mort cellulaire d'apoptotique dans la maladie d'Alzheimer. Neurologie expérimentale, 133(2), pp.225-230. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0014488685710254

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Last Updated: Feb 7, 2020

Sarah Moore

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Sarah Moore

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