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Che cosa TUNEL sta macchiando?

Rilevazione del apoptosis

Apoptosis

Credito di immagine: Kateryna Kon/Shutterstock.com

Contrassegno terminale di conclusione della scalfittura del dUTP della transferasi di deoxynucleotidyl, anche conosciuto come la macchiatura di TUNEL o l'analisi di TUNEL, è una tecnica robusta per la rilevazione del apoptosis.

Questo genere di morte delle cellule è conosciuto per essere caratterizzato da frammentazione nucleare del DNA ai nucleases. La macchiatura di TUNEL è stata sviluppata per individuare il apoptosis identificando queste rotture del DNA.

Il Apoptosis è un tipo geneticamente regolamentato di morte delle cellule che è vitale ai numerosi trattamenti biologici, dall'embriogenesi ad invecchiare ed anche è implicato in molte malattie.

Il Apoptosis è mirato a in parecchi trattamenti per la malattia, quali gli anti-infiammatori non steroidali ed i trattamenti anticancro. La ricerca continua a sviluppare le nuove terapie che sono puntate su che modificano il apoptosis per trattare una serie di malattie.

Per questo motivo, la macchiatura di TUNEL si è trasformata in in uno strumento essenziale mentre permette che gli scienziati guadagnino una comprensione più profonda del ruolo del apoptosis nella malattia, aiutante li per sviluppare i nuovi trattamenti apoptosis basati.

Mentre la valutazione morfologica è emerso come il metodo standard per l'identificazione e la quantificazione del apoptosis, la macchiatura di TUNEL rimane un'alternativa di fiducia ed affidabile che ha molti vantaggi.

Per esempio, il metodo di TUNEL può essere più veloce delle alternative e può a volte essere più sensibile, secondo il protocollo usato. Inoltre, perché la macchiatura di TUNEL studia le rotture del DNA che si presentano nella fase iniziale nel apoptosis, può individuare le celle apoptotic prima di quando la valutazione morfologica potrebbe identificarle.

Le basi di macchiatura di TUNEL

La tecnica di TUNEL che macchia le imprese l'attività dell'enzima terminale della transferasi (TdT) di deoxynucleotide. Per condurre il protocollo dall'inizio alla fine richiede intorno un'- due ore, tuttavia, questo non comprende il momento necessario per il preparato o la coltura cellulare del tessuto.

Il trattamento vede TdT aggiungere i deoxynucleotides al 3' - estremità dell'idrossile delle sequenze di DNA che interrompono allo stadio finale del apoptosis. Le celle sicure del sistema immunitario esprimono TdT, che è attivo durante la ricombinazione di V (D) J.

TUNEL che macchia gli usi un contrassegno ed i attaches fluorescenti o chimici ai nucleotidi che si sono aggiunti al 3' - estremità dell'idrossile delle rotture del DNA da TdT. Gli studi hanno concluso che il metodo di TUNEL è più sensibile dell'analisi in situ alternativa di traduzione di scalfittura (NON È) perché genera una maggior intensità del contrassegno delle celle apoptotic.

Tipi di macchiature di TUNEL

La microscopia leggera è più usata spesso analizzare i dati generati da TUNEL che macchia, sebbene la citometria a flusso possa anche essere usata per analizzare la macchiatura fluorescente di TUNEL.

Ci sono tre tecniche principali utilizzate nelle tecniche della coloritura di TUNEL, le prime stanno coniugando un nucleotide ad una tintura fluorescente, il più comunemente questa sono FITC. Il secondo metodo è dove i nucleotidi biotina-etichettati sono limitati da streptavidin-HRP e sono individuati con un modulo di un substrato cromogeno di HRP, solitamente LIMANDA, che converte i nucleotidi rilegati in colore marrone in modo da sono facilmente visibili.

La tecnica definitiva vede i nucleotidi FITC-etichettata del digoxygenin-, del bromo-, del digoxygenin-, o che legano con gli anticorpi specifici, che una tintura fluorescente o un enzima ha etichettato per rilevazione cromogena.

Applicazioni di macchiatura di TUNEL

La scoperta dei più circa come il apoptosis funziona, è diventato vitale a ricerca e sviluppo di nuovi approcci clinici per le numerose malattie e di disordini dovuto il suo ruolo di fondo nella malattia.

I termini compreso le malattie neurodegenerative, quali la malattia del Parkinson, morbo di Alzheimer, sclerosi laterale amiotrofica, ferita ischemica dopo il colpo, reperfusion ed infarto miocardico come pure malattie autoimmuni quali epatite, la malattia del trapianto contro l'ospite e l'AIDS tutto il presente hanno aumentato i livelli di apoptosis che sono considerati una funzionalità della malattia. Inoltre, il apoptosis in diminuzione è stato trovato per essere caratteristico dei disordini autoimmuni quale i lupus eritematosi sistemici e di alcune infezioni virali.

La macchiatura di TUNEL è stata fondamentale ad aumentare la conoscenza intorno al apoptosis in queste malattie. Per esempio, è stata chiave ricercare che ha precisato per esplorare la natura del apoptosis nel morbo di Alzheimer.

TUNEL che macchia gli scienziati aiutati per confermare che la perdita di un neurone primaria delle cellule e nella risposta glial che è caratteristica dell'ANNUNCIO è collegata con il apoptosis.

La macchiatura di TUNEL è stata utilizzata come metodo attendibile dell'identificazione di apoptosis nei numerosi studi dell'ANNUNCIO, permettendo che i ricercatori comparino efficientemente i cervelli delle popolazioni in buona salute a quelli all'ANNUNCIO per delucidare le differenze significative nel comportamento di apoptosis fra i due.

Similmente, la macchiatura di TUNEL ha provato il fondamento all'avanzamento della nostra comprensione di come il apoptosis si manifesta nella malattia del Parkinson (PD). È stata utilizzata negli studi che hanno scoperto quel apoptosis sono probabili un meccanismo vitale della morte delle cellule in palladio, evidenziante che è una causa fondamentale importante della morte di un neurone nigral, che è caratteristica di palladio.

Più ulteriormente a questa, la macchiatura di TUNEL ha scoperto l'attività influente del apoptosis nelle infezioni quali la rabbia ed il herpes simplex come pure essendo fondamentale nella dimostrazione del valore terapeutico di nuovi trattamenti esplorativi.

La macchiatura di TUNEL ha svolto un ruolo principale negli studi che esaminano la relazione fra il apoptosis e tutte le malattie relative evidenziate sopra. È probabile continuare ad essere usato per esplorare la patologia e per assistere nell'innovare i trattamenti più efficaci che mirano al apoptosis anormale.

In futuro, possiamo pensare vedere le nuove opzioni del trattamento emergere per le malattie apoptosis in relazione con come conseguenza della ricerca che ha contato sul TUNEL che macchia il metodo.

Sorgenti

·         Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M. e Kioussi, C. (2012). Rilevazione del Apoptosis dall'analisi di TUNEL. Metodi nella biologia molecolare, pp.41-47. https://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-61779-860-3_5

·         Mochizuki, H., Goto, K., Mori, H. e Mizuno, Y. (1996). Rilevazione istochimica del apoptosis nella malattia del Parkinson. Giornale delle scienze neurologiche, 137(2), pp.120-123. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0022510X9500336Z

·         Renehan, A. (2001). Che cosa è apoptosis e perché è importante?. BMJ, 322(7301), pp.1536-1538. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1120576/

·         Perng, G. (2000). Da Apoptosis di un neurone Indotto da virus bloccato dalla trascrizione latenza-associata del virus Herpes simplex. Scienza, 287(5457), pp.1500-1503. https://science.sciencemag.org/content/287/5457/1500

·         Smale, G., Nichols, N., Brady, D., Finch, C. e Horton, W. (1995). Prova per la morte Apoptotic delle cellule nel morbo di Alzheimer. Neurologia sperimentale, 133(2), pp.225-230. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0014488685710254

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Last Updated: Feb 7, 2020

Sarah Moore

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Sarah Moore

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