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Que TUNEL está manchando?

Detecção de apoptosis

Apoptosis

Crédito de imagem: Kateryna Kon/Shutterstock.com

Rotulagem terminal do fim do entalhe do dUTP do transferase do deoxynucleotidyl, igualmente conhecida porque a mancha de TUNEL ou o ensaio de TUNEL, são uma técnica robusta para a detecção de apoptosis.

Este tipo da morte celular é sabido para ser caracterizado pela fragmentação nuclear do ADN aos nucleases. A mancha de TUNEL foi desenvolvida para detectar o apoptosis identificando estas rupturas do ADN.

O Apoptosis é um tipo genetically regulado de morte celular que é vital aos processos biológicos numerosos, da embriogénese ao envelhecimento, e é implicado mesmo em muitas doenças.

O Apoptosis é visado em diversos tratamentos para a doença, tal como anti-inflamatórios não-steroidal e tratamentos anticancerosos. A pesquisa continua a desenvolver as terapias novas que são visadas que alteram o apoptosis para tratar um número de doenças.

Por este motivo, a mancha de TUNEL transformou-se uma ferramenta essencial como permite que os cientistas ganhem uma compreensão mais profunda do papel do apoptosis na doença, ajudando os a desenvolver tratamentos apoptosis-baseados novos.

Quando a avaliação morfológica emergir como o método padrão para a identificação e a quantificação do apoptosis, a mancha de TUNEL permanece uma alternativa confiada e segura que tenha muitos benefícios.

Por exemplo, o método de TUNEL pode ser mais rápido do que alternativas, e pode às vezes ser mais sensível, segundo o protocolo usado. Além, porque a mancha de TUNEL investiga as rupturas do ADN que ocorrem cedo sobre no apoptosis, pode detectar pilhas apoptotic antes de quando a avaliação morfológica poderia as identificar.

Os princípios da mancha de TUNEL

A técnica de TUNEL que mancha façanhas a actividade da enzima terminal do transferase (TdT) do deoxynucleotide. Para conduzir o protocolo do início ao fim toma ao redor uma a dois horas, contudo, esta não inclui o momento necessário para a preparação ou a cultura celular do tecido.

O processo considera TdT adicionar deoxynucleotides ao 3' - término do hidróxilo dos fragmentos do ADN que interrompem no estado final de apoptosis. Determinadas pilhas do sistema imunitário expressam TdT, que é activo durante a recombinação de V (D) J.

TUNEL que mancha usos uma etiqueta e uns diplomatas fluorescentes ou químicos aos nucleotides que foram adicionados ao 3' - término do hidróxilo de rupturas do ADN por TdT. Os estudos concluíram que o método de TUNEL é mais sensível do que o ensaio in situ alternativo da tradução de entalhe (NÃO É) porque gera uma intensidade maior da etiqueta de pilhas apoptotic.

Tipos de mancha de TUNEL

A fotomicroscopia é a mais usada frequentemente analisar os dados gerados por TUNEL que mancha, embora o cytometry de fluxo possa igualmente ser usado para analisar a mancha fluorescente de TUNEL.

Há três técnicas principais usadas em técnicas de mancha de TUNEL, as primeiras está conjugando um nucleotide a uma tintura fluorescente, o mais geralmente esta está FITC. O segundo método é o lugar aonde os nucleotides biotina-etiquetados são limitados pelo streptavidin-HRP e detectados com um formulário de uma carcaça cromogénea de HRP, geralmente a SOLHA, que converte os nucleotides encadernados a uma cor marrom assim que são facilmente visíveis.

A técnica final considera os nucleotides do digoxygenin-, do bromo-, do digoxygenin-, ou FITC-etiquetada que ligam com anticorpos específicos, que uma tintura fluorescente ou uma enzima etiquetaram para a detecção cromogénea.

Aplicações da mancha de TUNEL

Descobrir mais sobre como o apoptosis trabalha, tornou-se vital à investigação e desenvolvimento de aproximações clínicas novas para doenças numerosas e de desordens devido a seu papel subjacente na doença.

Condiciona incluir doenças neurodegenerative, tais como a doença de Parkinson, a doença de Alzheimer, a esclerose de lateral amyotrophic, ferimento isquêmico após o curso, reperfusion, e enfarte do miocárdio, assim como doenças auto-imunes tais como a hepatite, o enxerto contra a doença do anfitrião, e os AIDS todos os níveis aumentados presente de apoptosis que são considerados uma característica da doença. Além, o apoptosis diminuído foi encontrado para ser característico de desordens auto-imunes tais como infecções erythematosus de lúpus sistemático, e algumas virais.

A mancha de TUNEL foi fundamental a aumentar o conhecimento em torno do apoptosis nestas doenças. Por exemplo, foi chave pesquisar que exps para explorar a natureza do apoptosis na doença de Alzheimer.

TUNEL que mancha cientistas ajudados para confirmar que a perda neuronal preliminar da pilha e na resposta glial que é característica do ANÚNCIO está relacionada ao apoptosis.

A mancha de TUNEL foi usada como um método seguro da identificação do apoptosis em estudos numerosos do ANÚNCIO, permitindo que os pesquisadores comparem eficientemente os cérebros de populações saudáveis contra aqueles com o ANÚNCIO a fim explicar as diferenças significativas no comportamento do apoptosis entre os dois.

Similarmente, a mancha de TUNEL provou o fundamento ao avanço de nossa compreensão de como o apoptosis manifesta na doença de Parkinson (PD). Foi usada nos estudos que descobriram esse apoptosis são prováveis um mecanismo vital da morte celular no paládio, destacando que é uma causa subjacente principal da morte neuronal nigral, que é característica do paládio.

Mais a esta, a mancha de TUNEL descobriu a actividade influente do apoptosis nas infecções tais como a palavra simples da raiva e de herpes, assim como sendo fundamental em demonstrar o valor terapêutico de tratamentos exploratórios novos.

A mancha de TUNEL jogou um maior protagonismo nos estudos que olham no relacionamento entre o apoptosis e todas as doenças relacionadas destacadas acima. É provável continuar a ser usado para explorar a patologia e para ajudá-la na inovação uns tratamentos mais eficazes que visem o apoptosis anormal.

No futuro, nós podemos esperar ver opções novas do tratamento emergir para doenças apoptosis-relacionadas em conseqüência da pesquisa que confiou no TUNEL que mancha o método.

Fontes

·         Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M. e Kioussi, C. (2012). Detecção de Apoptosis pelo ensaio de TUNEL. Métodos na biologia molecular, pp.41-47. https://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-61779-860-3_5

·         Mochizuki, H., Empreendedores, K., Mori, H. e Mizuno, Y. (1996). Detecção Histochemical de apoptosis na doença de Parkinson. Jornal das ciências neurológicas, 137(2), pp.120-123. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0022510X9500336Z

·         Renehan, A. (2001). O que são apoptosis, e porque é ele importante?. BMJ, 322(7301), pp.1536-1538. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1120576/

·         Perng, G. (2000). Apoptosis Neuronal Vírus-Induzido obstruído pelo transcrito latência-associado do vírus de palavra simples de herpes. Ciência, 287(5457), pp.1500-1503. https://science.sciencemag.org/content/287/5457/1500

·         Smale, G., Nichols, N., Brady, D., Passarinho, C. e Horton, W. (1995). Evidência para a morte celular Apoptotic na doença de Alzheimer. Neurologia experimental, 133(2), pp.225-230. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0014488685710254

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Last Updated: Feb 7, 2020

Sarah Moore

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Sarah Moore

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