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¿Qué TUNEL está manchando?

Detección del apoptosis

Apoptosis

Haber de imagen: Kateryna Kon/Shutterstock.com

Etiqueta terminal del final de la mella del dUTP de la transferasa del deoxynucleotidyl, también sabida pues la coloración de TUNEL o el análisis de TUNEL, es una técnica robusta para la detección del apoptosis.

Esta clase de muerte celular se sabe para ser caracterizada por la fragmentación nuclear de la DNA a los nucleases. La coloración de TUNEL fue desarrollada para descubrir apoptosis determinando estos interruptores de la DNA.

El Apoptosis es un tipo genético regulado de muerte celular que sea vital a los procesos biológicos numerosos, de la embriogénesis al envejecimiento, e incluso se implica en muchas enfermedades.

El Apoptosis se apunta en varios tratamientos para la enfermedad, tal como antiinflamatorios no-esteroidales y tratamientos anticáncer. La investigación continúa desarrollar las nuevas terapias que se dirigen que modifican apoptosis para tratar varias enfermedades.

Por este motivo, la coloración de TUNEL se ha convertido en una herramienta esencial como permite que los científicos ganen una comprensión más profunda del papel del apoptosis en enfermedad, ayudándoles para desarrollar nuevos tratamientos apoptosis-basados.

Mientras que la evaluación morfológica ha emergido como el método estándar para la identificación y la cuantificación del apoptosis, la coloración de TUNEL sigue siendo una opción de confianza y segura que tiene muchas ventajas.

Por ejemplo, el método de TUNEL puede ser más rápido que opciones, y puede a veces ser más sensible, dependiendo del protocolo usado. Además, porque la coloración de TUNEL investiga los interruptores de la DNA que ocurren a principios de en apoptosis, puede descubrir las células apoptotic antes de cuando la evaluación morfológica podría determinarlas.

Los fundamentos de la coloración de TUNEL

La técnica de TUNEL que mancha hazañas la actividad de la enzima terminal de la transferasa (TdT) del deoxynucleotide. Para conducto el protocolo de principio a fin tarda alrededor una a dos horas, sin embargo, ésta no incluye la época necesaria para la preparación del tejido o el cultivo celular.

El proceso considera a TdT agregar deoxynucleotides al 3' - término del oxhidrilo de los fragmentos de la DNA que interrumpen en el estadio final del apoptosis. Ciertas células del sistema inmune expresan TdT, que es activo durante la recombinación de V (D) J.

TUNEL que mancha aplicaciones una escritura de la etiqueta y attaches fluorescentes o químicos a los nucleótidos que se han agregado al 3' - término del oxhidrilo de los interruptores de la DNA por TdT. Los estudios han concluido que el método de TUNEL es más sensible que el análisis in situ alternativo de la traslación de mella (NO ES) porque genera una mayor intensidad de la escritura de la etiqueta de células apoptotic.

Tipos de coloración de TUNEL

La microscopia liviana es la más de uso frecuente analizar los datos generados por TUNEL que mancha, aunque el cytometry de flujo se pueda también utilizar para analizar la coloración fluorescente de TUNEL.

Hay tres técnicas principales usadas en técnicas de coloración de TUNEL, las primeras está conjugando un nucleótido a un tinte fluorescente, éste es lo más común posible FITC. El segundo método es adonde los nucleótidos biotina-marcados con etiqueta son limitados por el streptavidin-HRP y descubiertos con una forma de un substrato cromogénico de HRP, generalmente el LENGUADO, que convierte los nucleótidos encuadernados a un color marrón así que son fácilmente visibles.

La técnica final considera los nucleótidos del digoxygenin-, del bromo-, del digoxygenin-, o FITC-marcado con etiqueta que atan con los anticuerpos específicos, que con etiqueta un tinte fluorescente o una enzima ha marcado para la detección cromogénica.

Usos de la coloración de TUNEL

El descubrimiento más sobre cómo el apoptosis trabaja, ha llegado a ser vital a la investigación y desarrollo de las nuevas aproximaciones clínicas para las enfermedades numerosas y de los desordenes debido a su papel subyacente en enfermedad.

Las condiciones incluyendo enfermedades neurodegenerative, tales como enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer, esclerosis lateral amiotrófica, daño isquémico después del recorrido, reperfusión, e infarto del miocardio, así como las enfermedades autoinmunes tales como hepatitis, injerto comparado con enfermedad del ordenador principal, y SIDA todo el presente aumentaron los niveles de apoptosis que se consideran una característica de la enfermedad. Además, el apoptosis disminuido se ha encontrado para ser característico de desordenes autoinmunes tales como infecciones eritematosas de lupus sistémico, y algunas virales.

La coloración de TUNEL ha sido fundamental a aumentar el conocimiento alrededor de apoptosis en estas enfermedades. Por ejemplo, ha sido dominante investigar que se ha establecido para explorar la naturaleza del apoptosis en enfermedad de Alzheimer.

TUNEL que mancha a científicos ayudados para confirmar que la baja neuronal primaria de la célula y en la reacción glial que es característica de ANUNCIO está relacionada con el apoptosis.

La coloración de TUNEL se ha utilizado como método de confianza de la identificación del apoptosis en estudios numerosos del ANUNCIO, permitiendo que los investigadores comparen eficientemente los cerebros de poblaciones sanas contra ésos con el ANUNCIO para aclarar las diferencias importantes en comportamiento del apoptosis entre los dos.

Semejantemente, la coloración de TUNEL ha probado fundamental al adelanto de nuestra comprensión de cómo el apoptosis manifiesta en la enfermedad de Parkinson (PD). Se ha utilizado en los estudios que han destapado ese apoptosis son probables un mecanismo vital de la muerte celular en el paladio, destacando que es una causa subyacente importante de la muerte neuronal nigral, que es característica del paladio.

Siguiendo esto, la coloración de TUNEL ha destapado la actividad influyente del apoptosis en infecciones tales como rabia y herpes simple, así como siendo fundamental en la demostración del valor terapéutico de nuevos tratamientos exploratorios.

La coloración de TUNEL ha desempeñado un papel principal en los estudios que observaban en el lazo entre el apoptosis y todas las enfermedades relacionadas destacadas arriba. Es probable continuar ser utilizado para explorar la patología y para ayudar a la innovación tratamientos más efectivos que apunten apoptosis anormal.

En el futuro, podemos preveer ver nuevas opciones del tratamiento emerger para las enfermedades apoptosis-relacionadas como resultado de la investigación que ha confiado en el TUNEL que manchaba método.

Fuentes

·         Kyrylkova, K., Kyryachenko, S., Leid, M. y Kioussi, C. (2012). Detección del Apoptosis por análisis de TUNEL. Métodos en la biología molecular, pp.41-47. https://link.springer.com/protocol/10.1007%2F978-1-61779-860-3_5

·         Mochizuki, H., Goto, K., Mori, H. y Mizuno, Y. (1996). Detección histoquímica del apoptosis en la enfermedad de Parkinson. Gorrón de las ciencias neurológicas, 137(2), pp.120-123. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/0022510X9500336Z

·         Renehan, A. (2001). Cuál es apoptosis, y porqué es él importante?. BMJ, 322(7301), pp.1536-1538. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1120576/

·         Perng, G. (2000). Apoptosis neuronal inducido por virus cegado por la transcripción tiempo de espera-asociada del virus del herpes simple. Ciencia, 287(5457), pp.1500-1503. https://science.sciencemag.org/content/287/5457/1500

·         Smale, G., Nichols, N., Brady, D., Finch, C. y Horton, W. (1995). Pruebas de la muerte celular Apoptotic en enfermedad de Alzheimer. Neurología experimental, 133(2), pp.225-230. https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0014488685710254

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Last Updated: Feb 7, 2020

Sarah Moore

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