Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Que é espectroscopia Tempo-Resolved da fluorescência?

a espectroscopia Tempo-resolved da fluorescência é uma técnica da espectroscopia usada para monitorar interacções entre as moléculas e os movimentos que ocorrem nos curtos períodos. A capacidade para medir mudanças na escala de tempo do picosegundo ou do nanossegundo faz-lhe uma técnica útil na análise e na dinâmica biomoleculares de estrutura.

Neurônios identificados por meio de fluorescência

Crédito de imagem: Juan Gaertner/Shutterstock.com

Os princípios de espectroscopia tempo-resolved da fluorescência

a espectroscopia Tempo-resolved da fluorescência pode detectar eventos dentro de um ambiente fluoróforo. Os eventos que podem ser medidos são deterioração, indicada por uma diminuição na fluorescência após a excitação, e deterioração da anisotropia da polarização, onde a reorientação do dipolo da emissão durante a excitação é medida.

Trabalhos tempo-resolved medidos da espectroscopia da fluorescência da deterioração baseados na duração do estado entusiasmado, que pode ser encurtado por determinados eventos dinâmicos que incluem mudanças macromoleculares da conformação, o abrandamento solvente, a rotação da lado-corrente, as interacções entre resíduos vizinhos, e as outras mudanças no ambiente local. A variação realiza-se somente de alguns picosegundos ou os dez dos nanossegundos, significando mudanças mensuráveis devem ocorrer dentro desta escala de tempo. As revelações neste tipo de medida estão tornando possível compreender a informação estrutural, por exemplo distinguindo distâncias entre pontas de prova.

A espectroscopia tempo-resolved da fluorescência da deterioração da anisotropia da polarização pode ser usada para compreender o movimento da mobilidade fluorófora, segmental, ou a rotação de uma macromolécula inteira. Isto permite o método de medir dados na hidrodinâmica, que é a difusão rotatória das proteínas ou de ácidos nucleicos. Devido à escala da detecção do picosegundo de espectroscopia tempo-resolved da fluorescência, pode igualmente ser usado para medir a dinâmica interna das macromoléculas que podem potencial confirmar previsões teóricas da dinâmica molecular.

Aplicações da proteína de espectroscopia tempo-resolved da fluorescência

Segundo a macromolécula no foco, o método e a aplicação mudam ligeira. Ao estudar proteínas, a deterioração de fluorescência que é medida é o mais frequentemente dos resíduos do triptofano. Os dados mostraram que a deterioração de fluorescência do triptofano é sensível ao ambiente local, que lhe faz uma ponta de prova muito útil para estudos na estrutura e na dinâmica da proteína. Além disso, dado que muitas proteínas têm somente um resíduo do triptofano, a desvantagem de interpretação complicada dos dados pode ser contornada.

Quando o triptofano for a ponta de prova favorecida para estudos na estrutura da proteína e dinâmica, não é muito útil para os estudos da interacção da proteína-proteína devido aos sinais complicados da fluorescência quando dois ou mais proteínas são misturadas. As alternativas são nesses casos o azatryptophan 5 o hydroxytryptophan (5-OH-Trp) e 7 (7-aza-Trp). Estes são útil devido a sua capacidade para excitar e observar selectivamente seu fluoróforo, mesmo no mesmo ambiente que outras proteínas decontenção. Por exemplo, 5-OH-Trp foi usado para criar um analog da insulina para estudos em interacções do hormona-receptor.

Aplicações do ADN de espectroscopia tempo-resolved da fluorescência

A fluorescência intrínseca do ADN é geralmente muito fraca, que conduziu às tinturas que estão sendo usadas como etiquetas. Os avanços neste campo consideraram as pontas de prova fluorescentes que estão sendo adicionadas, e a espectroscopia tempo-resolved da fluorescência transformou-se um método cada vez mais importante em estudar complexos do ADN e da ADN-proteína. Por exemplo, DAPI, uma pasta do sulco, foi usado enquanto uma ponta de prova para estudar os movimentos do ADN que usam a anisotropia deteriora métodos.

Os métodos intrínsecos da fluorescência foram usados igualmente, como aqueles que utilizam bases do thymine. Os estudos usando bases do thymine em oligonucleotides e em polinucleotido dobro-encalhados indicaram movimentos do ADN com a grande amplitude em tempos da correlação de secundário-nanossegundo.

Os estudos de complexos da ADN-proteína podem usar a emissão do triptofano da proteína ou a vida fluorescente de pontas de prova do ADN. Por exemplo, usando a emissão do triptofano de TBP, mostrou-se que TBP transforma de um multimer a um complexo monomeric em cima do emperramento do ADN. Usar uma ponta de prova da fluoresceína adicionou a ADN, os pontos do contacto entre a proteína reguladora de TyrR e o ADN poderia ser encontrado.

Vantagens e desvantagens

a espectroscopia Tempo-resolved da fluorescência tem diversas vantagens relativas a seus métodos. Os métodos da medida dependem da vida da fluorescência, e porque tal não está afectado geralmente por diferenças na concentração de fluorophores, intensidade da iluminação, o pathlength da luz, ou de photobleaching, que pode afectar outros tipos de espectroscopia da fluorescência.

Além disso, os dados adquiridos significam que o ambiente local do fluoróforo pode directamente quantitativa ser medido. Isto significa que os dados na viscosidade do ambiente, no R.I., no pH, e nos outros parâmetros podem ser medidos sem a necessidade para os ensaios bioquímicos que comprometem a pilha.

As desvantagens de espectroscopia tempo-resolved da fluorescência são relacionadas frequentemente à análise dos dados. Para um, as proteínas fluorescentes frequentemente complicaram fluorescente deterioram, que necessita determinada experiência para a interpretação dos dados. Similarmente, se a vida da fluorescência se submete a mudanças específicas, as razões bioquímicas não podem ser facilmente discerníveis sem aconselhamento especializado. Última, o equipamento necessário para espectroscopia tempo-resolved da fluorescência é complexo e caro.

Fontes

  1. Suhling, K. e outros (2005). microscopia de fluorescência Tempo-resolved. Ciências fotoquímicas e fotobiológicas. https://doi.org/10.1039/B412924P
  2. Millar, D.P. (1996). espectroscopia Tempo-resolved da fluorescência. Opinião actual na biologia estrutural. https://doi.org/10.1016/S0959-440X(96)80030-3

Last Updated: Jan 17, 2020

Sara Ryding

Written by

Sara Ryding

Sara is a passionate life sciences writer who specializes in zoology and ornithology. She is currently completing a Ph.D. at Deakin University in Australia which focuses on how the beaks of birds change with global warming.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Ryding, Sara. (2020, January 17). Que é espectroscopia Tempo-Resolved da fluorescência?. News-Medical. Retrieved on July 13, 2020 from https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Time-Resolved-Fluorescence-Spectroscopy.aspx.

  • MLA

    Ryding, Sara. "Que é espectroscopia Tempo-Resolved da fluorescência?". News-Medical. 13 July 2020. <https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Time-Resolved-Fluorescence-Spectroscopy.aspx>.

  • Chicago

    Ryding, Sara. "Que é espectroscopia Tempo-Resolved da fluorescência?". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Time-Resolved-Fluorescence-Spectroscopy.aspx. (accessed July 13, 2020).

  • Harvard

    Ryding, Sara. 2020. Que é espectroscopia Tempo-Resolved da fluorescência?. News-Medical, viewed 13 July 2020, https://www.news-medical.net/life-sciences/What-is-Time-Resolved-Fluorescence-Spectroscopy.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.