Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

microscopia de fluorescência do Largo-campo

a microscopia de fluorescência do Largo-campo é uma técnica de imagem lactente extensamente aplicada usada para examinar pilhas e investigar suas estruturas internas, incluindo proteínas e outros componentes celulares.

Por VshivkovaCrédito de imagem: Vshivkova/Shutterstock

Nesta técnica, a amostra inteira é iluminada e uma 2D imagem de proteínas múltiplas pode ser identificada imediatamente.

Que são fluorophores?

Fluorophores é entusiasmado em cima da absorção de um comprimento de onda específico da luz, tendo por resultado o movimento dos elétrons a um nível de energia mais alta. Estes elétrons caem então a seu estado original, conduzindo à produção de um comprimento de onda mais longo. O comprimento de onda absorvido é chamado o comprimento de onda da excitação, visto que o comprimento de onda emissor é chamado o comprimento de onda da emissão.

Aviva a SHIFT define a diferença entre estes valores. Cada um fluoróforo pode emitir-se e absorver os comprimentos de onda diferentes, que são sabidos como seus espectros da excitação e de emissão. Estas escalas enlatam usado para definir tipos diferentes de fluoróforo.

Preparação da amostra

Algumas amostras biológicas contêm naturalmente fluorophores (por exemplo clorofila). Alternativamente, as amostras biológicas podem ser etiquetadas usando os métodos diferentes, incluindo a imunofluorescência, a manipulação do ADN, ou manchas fluorescentes. A imunofluorescência usa os anticorpos fluoróforo-conectados, que reconhecem um antígeno específico e etiquetam conseqüentemente a proteína do interesse.

A manipulação do ADN, contudo, altera genetically a proteína do interesse fazê-la fluorescente. As manchas podem igualmente ser adicionadas a uma amostra que ligue especificamente à proteína do interesse. Por exemplo, DAPI é uma mancha do ácido nucleico que identifique núcleos ligando ao ADN.

Metodologia

Uma lâmpada emite-se a luz da excitação que passa através de um filtro óptico que se assegure de que somente os comprimentos de onda específicos da excitação caiam na amostra. A luz é visada então a amostra através da reflexão fora de um espelho dichroic.

Os fluorophores entusiasmado dentro da amostra emitem-se um comprimento de onda de uma emissão mais alta que seja detectado por uma câmera. Estes dados então são determinados e usados para identificar o lugar específico das proteínas dentro da amostra.

A fonte luminosa

Mercury ou as arco-lâmpadas do xénon são as fontes luminosas tradicionais usadas para esta técnica; contudo, produzem os comprimentos de onda muito intensos que conduzem ao descoramento e à toxicidade. Os diodos luminescentes (LEDs) são usados tipicamente como são baratos e compactos, não conduzem ao descoramento e os efeitos tóxicos podem exactamente ser programados.

Imagem lactente de alta resolução

A definição de um microscópio determina como bom um microscópio pode se diferenciar entre dois objetos pròxima colocados diferentes. Embora a microscopia de fluorescência do largo-campo tenha a alta resolução, a imagem lactente que 3D grosso prova permanece difícil.

A amostra inteira é examinada imediatamente, e pode ser desafiante identificar a fonte precisa de fluorescência. A fluorescência do fundo pode igualmente aumentar o ruído da imagem.

Em photobleaching, os fluorophores reagem e alteram-se covalently. Isto conduz a uma imagem mais não ofuscante como os fluorophores são incapazes de se emitir a fluorescência, reduzindo a definição da imagem produzida.

Fontes:

Further Reading

Last Updated: Oct 24, 2018

Hannah Simmons

Written by

Hannah Simmons

Hannah is a medical and life sciences writer with a Master of Science (M.Sc.) degree from Lancaster University, UK. Before becoming a writer, Hannah's research focussed on the discovery of biomarkers for Alzheimer's and Parkinson's disease. She also worked to further elucidate the biological pathways involved in these diseases. Outside of her work, Hannah enjoys swimming, taking her dog for a walk and travelling the world.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Simmons, Hannah. (2018, October 24). microscopia de fluorescência do Largo-campo. News-Medical. Retrieved on March 04, 2021 from https://www.news-medical.net/life-sciences/Wide-field-Fluorescence-Microscopy.aspx.

  • MLA

    Simmons, Hannah. "microscopia de fluorescência do Largo-campo". News-Medical. 04 March 2021. <https://www.news-medical.net/life-sciences/Wide-field-Fluorescence-Microscopy.aspx>.

  • Chicago

    Simmons, Hannah. "microscopia de fluorescência do Largo-campo". News-Medical. https://www.news-medical.net/life-sciences/Wide-field-Fluorescence-Microscopy.aspx. (accessed March 04, 2021).

  • Harvard

    Simmons, Hannah. 2018. microscopia de fluorescência do Largo-campo. News-Medical, viewed 04 March 2021, https://www.news-medical.net/life-sciences/Wide-field-Fluorescence-Microscopy.aspx.

Comments

The opinions expressed here are the views of the writer and do not necessarily reflect the views and opinions of News Medical.