Systèmes du deux-hybride de levure (Y2H)

Le système du deux-hybride de levure (Y2H) est une technique génétique employée pour déterminer des interactions protéine-protéine. L'approche est rapide, rentable, et facile à utiliser.

Crédit : Kateryna Kon/Shutterstock

Le mappage d'interaction donne des explications claires au sujet de l'organisme du protéome (les organismes, les tissus, et les cellules expriment l'armement complet des protéines) dans les éléments fonctionnels. Cette caractéristique est critique pour l'élucidation des mécanismes biologiques.

Les outils de Y2H servent d'accès au protéome cellulaire entier pour examiner l'interaction protéine-protéine, y compris des protéines de membrane, des protéines localisées dans différents compartiments sous-cellulaires, et des protéines qui sont transcriptionally en activité.

Y2H peut être automatisé pour le débit élevé recherche de l'interaction protéine-protéine sur une échelle de la taille du génome.

Principe du système de Y2H

Interaction protéine-protéine qui a lieu entre l'amorce et les aides de protéines de proie dans l'activation des gènes de journaliste qui permettent l'accroissement sur une coloration ou des medias de détail.

Le terme « deux-hybride » est inventé des deux classes des protéines hybrides ou chimériques. Protéine d'intérêt « x » et d'un détonateur obligatoire de domaine d'ADN (DBD-x) de former la « amorce. » Fusion résultats transcriptionnels de domaine d'activation (AD-y) et de bibliothèque des un « y » d'ADNc dans la « proie. » Ces deux types forment la base du système de dépistage d'interaction protéine-protéine.

Sans interaction d'amorce-proie, le domaine d'activation ne peut pas limiter à l'entraînement d'expression de gène-à-gène de journaliste.

Variations de Y2H

Les variations du système de Y2H dépendent de l'interaction des protéines. Les systèmes procurables de courant sont :

Système réprimé de transactivateur

Le système réprimé (RTA) du transactivateur Y2H a été produit pour recenser les interactions qui concernent les protéines transcriptionnelles d'activateur génétiquement.

Des modifications dans ce système lui permettent d'être employé pour surveiller des inhibiteurs des interactions protéine-protéine qui concernent des bibliothèques des composés de petite molécule.

L'inhibition des interactions qui concernent des protéines peut être évaluée en examinant l'accroissement du support sélecteur qui contient l'aminotriazole 3 (3-AT).

Cette méthode a été également utilisée pour recenser des inhibitions de quatre interactions protéine-protéine indépendantes dans des écrans qui ont contenu une bibliothèque composée de 23.000 petites molécules. Les composés qu'empêché du FKBP12-TGFbeta-R (bêta de facteur de croissance transformant) ont été également empêchés.

Système de transcription de la polymérase III

La polymérase III (système de transcription de Pol III) permet l'interaction des facteurs de transcription avec des protéines par la commande de la transcription qui est basée sur la polymérase ARN II. La protéine X est protégée par fusible pour amorcer (Gal4-DBD) dans le système traditionnel de Y2H. L'amorçage de la séquence obligatoire de Gal4p dans SNR6 (gène de journaliste) a comme conséquence la capacité de l'amorce de fixer l'ADN.

Cependant, l'élément de proie est modifié pendant que la deuxième protéine Y obtient protégée par fusible au composé de τ138p.TFIIC contient cette protéine comme sous-unité.

τ138p existe pendant qu'un des deux facteurs de transcription qui subit (transcription III-assistée de polymérase ARN III) Pol. L'interaction qui se produit entre l'amorce et les résultats de proie (contenant τ138p) en grippant du composé de TFIIIC à l'ADN et le recrutement de TFIIIB (un deuxième facteur de transcription) et de Pol III.

Ceci a comme conséquence l'activation de la transcription des gènes du journaliste SNR6 pour développer le snRNA U6.

Examen critique pour des interactions entre le système extracellulaire de protéines

L'examen critique pour des interactions entre le système extracellulaire de protéines (système de SCINEX-P) permet l'analyse des interactions de protéines qui ont lieu dans l'environnement de oxydation du réticulum endoplasmique.

Dans ce système, la fusion a lieu entre les protéines mutées d'Ire1p et les protéines d'intérêt, où les protéines mutées d'Ire1p manquent de leur domaine luminal.

L'interaction qui se produit entre les deux résultats hybrides de protéines dans la reconstitution de la dimérisation d'Ire1p et l'activation de la signalisation en aval dévoilée (UPR) de réaction de protéine. Le Hac1p a dévoilé l'élément de réponse de protéine qui a été introduit dans les aides de promoteur de gène de journaliste dans l'interaction protéine-protéine d'examen critique.

Ce système de Y2H a été avec succès mis en application pour l'analyse de l'interaction entre Calnexin et isomérase ERp57 du bisulfure de protéine, et les interactions entre les anticorps et les antigènes.

SOS et les systèmes de recrutement de RAS (SRS et RRS)

Le système de recrutement de SOS concerne la fusion d'une protéine soluble X dans le SOS mammifère. Interaction entre la fusion de SOS-X et une proie qui est localisée dans des résultats d'une membrane dans la promotion de la signalisation en aval et la stimulation de l'échange de guanyl sur le yRAS.

Le système de recrutement de RAS concerne la fusion de RAS mammifère actif et de la protéine soluble X. Le système exige seulement l'emplacement de membrane et activité ne concerne pas de Ras de guanyl d'échange facteurs'.

RRS et SRS aident en analysant les interactions qui se produisent entre les proies de membrane ou de soluble et les amorces solubles. Le système inverse de recrutement de RAS a été en particulier développé pour l'utilisation des amorces qui sont membrane localisée.

Le système de fusion de G-protéine

Ce système permet l'interaction entre l'amorce et la proie de soluble, qui concerne la protéine de fusion de la sous-unité gamma de la G-protéine heterotrimeric.

L'interaction de la proie avec l'amorce qui est située sur la membrane a comme conséquence la séquestration des résultats de β-sous-unités de G-protéine dans la perturbation de la formation complexe de G-protéine heterotrimeric et de la signalisation en aval successive.

Cette approche est la plus utilisée généralement dans l'identification des mutants Sec1 neuronaux qui sont incapables de gripper syntaxin1 (un membre complexe de PIÈGE).

En plus de RTA Y2H, la G-protéine Y2H recense les médicaments qui perturbent des interactions protéine-protéine.

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Last Updated: Feb 26, 2019

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