étalage d'ARNm : Applications dans la recherche

l'étalage d'ARNm est une technique qui peut recenser les protéines qui grippent aux régions spécifiques dans l'ADN. Cette méthode a plusieurs avantages par rapport à d'autres méthodes, telles que le levure-à-hybride, l'immunoprécipitation, l'étalage bactériophage et d'autres.

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Acide ribonucléique de monocaténaire, illustration des recherches 3d d'ARN. Crédit d'image : nobeastsofierce/Shutterstock

Évolution in vitro des protéines artificielles et des enzymes

Les méthodes pour concevoir les protéines artificielles comprennent in vitro le modèle rationnel et le choix de novo. Pour que ces méthodes réussissent, une connaissance détaillée des domaines d'une protéine et la voie ces pli est nécessaire. Cependant, les méthodes d'évolution de laboratoire concernent isoler les protéines artificielles et les enzymes des bibliothèques des variantes déterminées.

la méthode d'étalage d'ARNm peut être choisie utilisé et évoluer les protéines et les enzymes neuves d'une grande bibliothèque des séquences potentielles. Une méthode qui a été récent proposée est d'employer la méthode d'étalage d'ARNm pour sélecter pour des enzymes de Diels-Alderase. Une autre méthode a également été proposée pour utiliser cette méthode pour sélecter pour des paires nouvelles de protéine-ligand par la transcription inverse interaction-dépendante. En outre, produire des enzymes sur mesure pour différentes réactions est une autre zone d'application potentielle pour l'étalage d'ARNm.

Puces ADN de Auto-Montage de protéine

la technique d'étalage d'ARNm produit des séquences de fusion d'ARNm-protéine, qui peuvent être employées pour l'examen critique élevé de débit. Ces séquences de fusion peuvent coder pour MYC, HA11, ou les épitopes d'INDICATEUR et l'incubation suivante avec des frites d'ADN peuvent mener à l'hybridation aux régions complémentaires. Ceci peut mener à l'ensemble auto-dirigé de la frite de protéine. Ceux-ci auto-ont dirigé des choix de protéine peuvent avoir la fonctionnalité des protéines qui sont manifestées. En outre, ils sont présents dans une orientation uniforme et leur limite de détection est sous-attomole définition.

Produire des bibliothèques Non-Naturelles

Les méthodes conventionnelles pour recenser des protéines sont deux-hybride de levure et étalage bactériophage. Ces deux méthodes ont une opération d'obligation in vivo et elles peuvent seulement manifester l'acide aminé naturel, dont il y a de 20. Y compris l'acide aminé les alphabets peuvent augmenter la diversité chimique et également améliorer la diversité de ligand. L'inclusion des acides aminés artificiels peut être faite pendant la traduction ou après traduction pour augmenter la diversité davantage.

Pendant la traduction

Une méthode récente a prouvé qu'une stratégie de l'éliminateur ARNt peut être employée pour comprendre les acides aminés artificiels, y compris le biocytin (un résidu de lysine qui biotinylated), pour l'étalage d'ARNm. Après le procédé du choix, la bibliothèque peut être améliorée pour le codon non-sens ambre contenant des séquences. Suivre ces méthodes peut augmenter et enrichir la diversité de la protéine manifestée, et ceci peut davantage améliorer les possibilités de découvrir les molécules nouvelles qui ont une meilleure spécificité, stabilité ou réactivité.

Méthodes de translation de goujon

Dans peu d'études récentes, inscrivez les méthodes de translation pour l'étalage d'ARNm ont été également conçus. Dans une telle étude, des molécules qui ont augmenté l'activité inhibitrice de la pénicilline vers la protéine obligatoire 2a de pénicilline ont été choisies parmi une bibliothèque qui a contenu les chaînes latérales pendantes de pénicilline. Cette stratégie peut être étendue à d'autres composés de petite molécule et ceci peut augmenter la diversité des bibliothèques d'étalage de technique d'étalage d'ARNm.

Découverte de Ligand

Avoir une plus grande bibliothèque des séquences potentielles a plusieurs avantages : une plus grande bibliothèque peut soulager la découverte pour des molécules plus élevées d'affinité, diversité plus grande actuelle des molécules qui ont la fonction similaire, le grand nombre de séquences qui peuvent être récupérées peuvent encore s'analyser suivre d'autres méthodes telles que la méthode de covariation de séquence. Cette méthode peut être employée pour découvrir les peptides ARN-grippants, les aptamers d'ATP, les aptamers de streptavidin, et les aptamers TNF-α notamment.

Utilisant l'étalage d'ARNm, plus de 100 ARNs grippant des peptides ont été découverts, et ceci représente un du test fonctionnel important de la méthode d'étalage d'ARNm. Les aptamers d'ATP étaient probablement les premières protéines qui bondissent à l'ATP. Dans une étude, on l'a déterminé qu'en 1012 les molécules une dans la bibliothèque d'ARNm ont la capacité d'ATP-binding.

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Last Updated: Nov 27, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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