despliegue del mRNA: Usos en la investigación

el despliegue del mRNA es una técnica que puede determinar las proteínas que atan a las regiones específicas en la DNA. Este método tiene varias ventajas sobre otros métodos, tales como levadura-a-híbrido, inmunoprecipitación, despliegue bacteriófago y otros.

Ácido ribonucleico del único cabo, ejemplo de la investigación 3d del ARN. Haber de imagen: nobeastsofierce/Shutterstock
Ácido ribonucleico del único cabo, ejemplo de la investigación 3d del ARN. Haber de imagen: nobeastsofierce/Shutterstock

Evolución in vitro de proteínas y de enzimas artificiales

Los métodos para diseñar las proteínas artificiales in vitro incluyen diseño y la selección racionales de novo. Para que estos métodos tengan éxito, un conocimiento detallado de los dominios de una proteína y la manera esta doblez es necesarios. Sin embargo, los métodos de la evolución del laboratorio implican el aislar de las proteínas y de las enzimas artificiales de las bibliotecas de variantes establecidas.

el método del despliegue del mRNA puede ser selecto usado y desarrollar las nuevas proteínas y enzimas de una biblioteca grande de series potenciales. Un método que se ha propuesto recientemente es utilizar método del despliegue del mRNA para seleccionar para las enzimas de Diels-Alderase. Otro método también ha sido propuesto para emplear este método para seleccionar para los pares nuevos del proteína-ligand por la transcripción reversa acción-relacionada. También, generar las enzimas específicas para las diversas reacciones es otra área potencial del uso para el despliegue del mRNA.

Microarrays de Uno mismo-Montaje de la proteína

la técnica del despliegue del mRNA genera las series de la fusión de la mRNA-proteína, que se pueden utilizar para la alta investigación de la producción. Estas series de la fusión pueden cifrar para MYC, HA11, o los epitopos de la BANDERA y la incubación subsiguiente con las virutas de la DNA pueden llevar al hibridación a las regiones complementarias. Esto puede llevar al montaje uno mismo-dirigido de la viruta de la proteína. Éstos uno mismo-dirigieron matrices de la proteína pueden tener las funciones de las proteínas se visualizan que. También, están presentes en una orientación uniforme y su límite de detección es resolución sub-attomole.

Generar bibliotecas No-Naturales

Los métodos convencionales para determinar las proteínas son dos-híbrido de la levadura y despliegue bacteriófago. Estos dos métodos tienen un paso de la obligación in vivo y pueden visualizar solamente el aminoácido natural, cuyo hay 20. Incluyendo el aminoácido los alfabetos pueden aumentar la diversidad química y también perfeccionar la diversidad del ligand. La partícula extraña de aminoácidos artificiales se puede hacer durante la traslación o después de la traslación para aumentar la diversidad más lejos.

Durante la traslación

Un método reciente ha mostrado que una estrategia del tRNA del supresor se puede utilizar para incluir los aminoácidos artificiales, incluyendo el biocytin (un residuo de la lisina que biotinylated), para el despliegue del mRNA. Después del proceso de la selección, la biblioteca se puede aumentar para el codón de parada ambarino que contiene series. Usando estos métodos puede aumentar y enriquecer la diversidad de la proteína visualizada, y esto puede perfeccionar más lejos las ocasiones de descubrir las moléculas nuevas que tienen una mejor especificidad, estabilidad o reactividad.

Métodos de translación del poste

En pocos estudios recientes, asiente los métodos de translación para el despliegue del mRNA también se han diseñado. En un tal estudio, las moléculas que aumentaron la actividad inhibitoria de la penicilina hacia la proteína obligatoria 2a de la penicilina fueron seleccionadas de una biblioteca que contuvo cadenas laterales pendientes de la penicilina. Esta estrategia se puede ampliar a otras pequeñas composiciones de la molécula y ésta puede aumentar la diversidad de las bibliotecas del despliegue de la técnica del despliegue del mRNA.

Descubrimiento del Ligand

Tener una biblioteca más grande de series potenciales tiene varias ventajas: una biblioteca más grande puede facilitar el descubrimiento para moléculas más altas de la afinidad, actual mayor diversidad de las moléculas que tienen función similar, el gran número de series que se puedan recuperar se puedan analizar más a fondo usando otros métodos tales como método de la covariación de la serie. Este método se puede utilizar para descubrir los péptidos ARN-obligatorios, los aptamers del ATP, los aptamers del streptavidin, y los aptamers de TNF-α entre otros.

Usando despliegue del mRNA, se han descubierto más de 100 péptidos obligatorios del ARN, y éste representa uno de la prueba funcional importante del método del despliegue del mRNA. Los aptamers del ATP eran posiblemente las primeras proteínas que limitan al ATP. En un estudio, fue determinado que en 1012 las moléculas una en biblioteca del mRNA tienen capacidad ATP-obligatoria.

Fuentes

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Last Updated: Nov 27, 2018

Dr. Surat P

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Dr. Surat P

Dr. Surat graduated with a Ph.D. in Cell Biology and Mechanobiology from the Tata Institute of Fundamental Research (Mumbai, India) in 2016. Prior to her Ph.D., Surat studied for a Bachelor of Science (B.Sc.) degree in Zoology, during which she was the recipient of an Indian Academy of Sciences Summer Fellowship to study the proteins involved in AIDs. She produces feature articles on a wide range of topics, such as medical ethics, data manipulation, pseudoscience and superstition, education, and human evolution. She is passionate about science communication and writes articles covering all areas of the life sciences.  

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