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A etiqueta nova podia permitir uns estudos estruturais mais detalhados de proteínas mamíferas

Para dizer nossos genes são inventivos são uma atenuação bruta. Com as combinações engenhosos dos 20 ácidos aminados insignificantes, os blocos de apartamentos básicos de vida, genes projectam todos os tecidos e órgãos que são a maravilha de nossos corpos de trabalho.

Agora os cientistas estão adicionando ao repertório genético parcimonioso ao bom efeito: Com genética de utilização de escolha de objectivos cuidadosa, os ácidos aminados não naturais assim chamados podem eficazmente etiquetar as proteínas que os cientistas querem estudar, porque, como uma baliza do farol em uma névoa soupy, estão para fora de essas o corpo já produz.

No trabalho publicado no mês passado na biologia química da natureza, a pesquisa nova na universidade de Rockefeller revela um método que poderia teòrica ser adaptado para colocar uma ponta de prova fluorescente em toda a posição em qualquer proteína em uma pilha mamífera. A nova tecnologia podia permitir estudos fluorescentes da único-molécula em pilhas vivas, diz Thomas P. Sakmar, cabeça do laboratório da biologia molecular e da bioquímica. “É uma nova ferramenta para estudar a dinâmica da proteína da membrana que deve ser do uso geral. Nós somos tecnologias de construcção para mover para a frente a ciência.”

Sakmar, o investigador associado Thomas Huber e o associado pos-doctoral Shixin YE, trabalhando com um colega em Alemanha, Reiner Vogel, combinaram uma variedade de técnicas da genética para introduzir um ácido aminado, azidoF, um parente do phenylalanine, em três pontos no rhodopsin, o receptor sensível à luz da pilha que é crucial à visão. O três-nitrogênio-átomo azido é uma ponta de prova especialmente boa para três razões: Em contraste com outras etiquetas, azido não existe naturalmente nos mamíferos, que facilita “ver; ” é pequeno bastante não interferir com o funcionamento normal de uma proteína; e tem as propriedades químicas que lhe fazem um bom punho em que para pendurar outras moléculas, como pontas de prova fluorescentes, diz Huber.

As aproximações similares foram usadas com sucesso nas bactérias, mas esta é a primeira vez que foi aplicado às pilhas mamíferas com tais especificidade e eficiência, os cientistas diz. A selecção genética extensiva permitiu que a equipe visasse as pontas de prova azido eficientemente. Confirmaram então a presença de azido com Fourier transformam a espectroscopia (FTIR) infravermelha da diferença, que mede esticar freqüências dos átomos nos ácidos aminados que compo uma proteína. Porque azido tem uma freqüência original da vibração que fosse sensível a seus arredores, a equipe podia usar os dados espectroscópicas para confirmar mudanças que estruturais o rhodopsin se submete na luz contra a obscuridade. “O que você quer é uma ponta de prova que não moleste a proteína e uma que pode lhe dizer algo sobre sua estrutura,” Sakmar diz. “Que é o que nós temos aqui, e em princípio, você pode pô-lo em toda a posição de qualquer proteína do interesse em uma pilha mamífera, que permita que nós estudem todas as proteínas interessantes que não podem ser expressadas nas bactérias.”

Biologia química da natureza em linha: 26 de abril de 2009)
Análise de FTIR da activação de GPCR usando pontas de prova azido
Shixin YE, Thomas Huber, Reiner Vogel e Thomas P. Sakmar