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Les Chercheurs développent la méthode électrophorétique neuve pour trouver MIRCERA et EPO dans le sang

L'Élan Neuf Réduit le Numéro des Sous-programmes Requis Pour Trouver des Érythropoïétines

Les chercheurs Autrichiens ont avec succès développé une méthode électrophorétique neuve pour trouver MIRCERA® et d'autres érythropoïétines (EPO) dans le sang. La technique, utilisant SARCOSYL-PAGE, a la sensibilité particulièrement améliorée pour MIRCERA, mais ne modifie pas les caractéristiques du fonctionnement de SDS-PAGE pour trouver l'autre EPOs. Les Détails de ceci étudient, financé par une concession de l'Agence de Anti-Dopage du Monde (WADA), apparaissent dans la dernière question du Test et de l'Analyse de Médicament publiés par Wiley-Blackwell.

MIRCERA (bêta méthoxy de glycol-epoetin de polyéthylène), un EPO de PEGylated, est une protéine de synthèse qui aide le fuselage à produire des hématies et utilisé pour traiter l'anémie provoquée par maladie rénale. Le médicament est fabriqué par la Hoffmann-La Roche et seulement disponible en dehors des États-Unis dus à une infraction sur les brevets d'Amgen sur les produits recombinés et les procédés d'EPO. Dans le passé, EPOs ont été de dégriffés utilisé en tant que dopage des agents par des athlètes pour augmenter la résistance dans des sports tels que faisant un cycle, le fonctionnement de distance, et ramant. WADA a interdit l'utilisation d'EPOs, tel que MIRCERA, dans tous les sports compétitifs.

« Le dépistage d'enduire d'EPOs recombiné est l'un des sujets les plus provocants dans le contrôle de anti-dopage, » a dit M. Christian Reichel des Laboratoires de Seibersdorf à l'Institut de Technologie Autrichien (AIT) et à l'auteur important de l'étude. Le M. Reichel et collègues a obtenu des prises de sang de quatre volontaires en bonne santé en tant qu'élément de l'étude. Chaque participant a reçu une dose unique de chaque médicament d'EPO (NeoRecormon (66 IU/kg), Dynepo (35 IU/kg), et MIRCERA (@g) 50). Des Échantillons ont été rassemblés pendant au moins 14 jours (NeoRecormon, Dynepo) ou jusqu'à 42 jours inscrivent l'injection dans le cas de MIRCERA.

Les Chercheurs ont utilisé une dilution séquentielle double de Dynepo (0,09 NG à 0,7 pages), de NESP (0,07 NG à 0,5 pages), et de MIRCERA (0,4 NG à page 3,0 pour comparer la sensibilité de SDS-PAGE (électrophorèse en gel dodécylique de sulfate-polyacrylamide de sodium) pour trouver MIRCERA par Western blotting. On n'a pas observé l'intensité des bandes de Dynepo et de NESP graduellement baissées selon la diminution de leur concentration, mais un comportement assimilé pour les bandes de MIRCERA. « Nous avons présumé des expériences que la performance modifiée de Western blotting de MIRCERA était due à son PEGylation (demande de règlement avec du polyéthylène glycol pour obtenir un effet de long-action de la protéine), » M. remarquable Reichel.

Des ancrages des différentes masses moléculaires moyennes (ANCRAGE 1500, 2000, 8000, 20000, 35000) ont été alors séparés sur SDS-PAGE et conçus avec une méthode de souillure Ancrage-particulière. En Raison d'une alimentation électrique de solubilisation limitée de SDS, Ancrages - indépendamment de la taille moléculaire - se sont avérés migrer en tant que bandes grandes et enduites sur SDS-PAGE. Vu les chercheurs de résultats ont présumé que la sensibilité diminuée de MIRCERA sur les taches Occidentales était due à un problème SDS-basé de solubilité de l'Ancrage-partie de MIRCERA.

Pour résoudre le problème recherche a utilisé la première fois un détergent avec une alimentation électrique de solubilisation plus élevée pour des Ancrages que le SDS qui n'a pas amélioré la forme de bande de MIRCERA. Les Chercheurs ont alors utilisé SARCOSYL ou (RADAR À OUVERTURE SYNTHÉTIQUE) - PAGE avec des excellents résultats sur les taches Occidentales par MIRCERA de résolution une bande tranchante et en maintenant simultanément la définition des rhEPOs et l'uhEPO au niveau de performance de SDS-PAGE. Les auteurs ont constaté que « SARCOSYL ne grippait pas au polyéthylène glycol et laissait de ce fait des Ancrages dans leur condition uncharged indigène. » SDS-PAGE de Remodelage en permutant le SDS pour SARCOSYL dans l'échantillon et tampons en marche a résolu le problème.

« Dans le passé, il fallu quatre méthodes exécutées pour trouver a interdit des substances. Notre méthode permet à des chercheurs de trouver MIRCERA et l'autre EPOs suivre juste une méthode unique, » M. Reichel a confirmé.

Source : Wiley-Blackwell