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I Ricercatori mettono a punto il nuovo metodo elettroforetico per la rilevazione MIRCERA e dell'EPO nel sangue

Il Nuovo Approccio Diminuisce il Numero delle Routine State Necessarie Per Individuare le Eritropoietina

I ricercatori Austriaci hanno messo a punto con successo un nuovo metodo elettroforetico per la rilevazione MIRCERA® e delle altre eritropoietina (EPO) nel sangue. La tecnica, facendo uso di SARCOSYL-PAGE, specificamente ha migliorato la sensibilità per MIRCERA, ma non altera le caratteristiche di prestazione di SDS-PAGE per la rilevazione dell'altro EPOs. I Dettagli di questo studiano, costituito un fondo per da una concessione dall'Agenzia di Antidoping del Mondo (WADA), compaiono nell'ultima emissione della Prova e dell'Analisi della Droga pubblicate da Wiley-Blackwell.

MIRCERA (glicol-epoetina metossilica beta), un EPO del polietilene di PEGylated, è una proteina sintetica che aiuta l'organismo a produrre i globuli rossi ed usare per trattare l'anemia causata dalla malattia renale. La droga è fabbricata da Hoffmann-La Roche e soltanto disponibile fuori degli Stati Uniti dovuto un'infrazione sopra i brevetti di Amgen sui prodotti recombinanti e sui trattamenti di EPO. Nel Passato, EPOs è stato privo di marca usato come verniciatura degli agenti dagli atleti per migliorare la resistenza in tali sport come il riciclaggio, il funzionamento di distanza e la rematura. WADA ha vietato l'uso di EPOs, quale MIRCERA, in tutti gli sport non Xerox.

“La rilevazione della verniciatura con EPOs recombinante è uno degli argomenti più provocatori nel controllo di antidoping,„ ha detto il Dott. Christian Reichel dai Laboratori di Seibersdorf all'Istituto di Tecnologia Austriaco (AIT) ed all'autore principale dello studio. Il Dott. Reichel e colleghi ha ottenuto i campioni di sangue da quattro volontari sani come componente dello studio. Ogni partecipante ha ricevuto un d'una sola dose di ogni droga di EPO (NeoRecormon (66 IU/kg), Dynepo (35 IU/kg) e MIRCERA (@g) 50). I Campioni sono stati raccolti per almeno i 14 giorni (NeoRecormon, Dynepo) o i fino a 42 giorni inviano l'iniezione nel caso di MIRCERA.

I Ricercatori hanno usato una diluizione seriale duplice di Dynepo (0,09 NG - 0,7 pagine), di NESP (0,07 NG - 0,5 pagine) e di MIRCERA (0,4 NG alla pagina 3,0 per confrontare la sensibilità di SDS-PAGE (elettroforesi dodecilica del gel del solfato-poliacrilammide del sodio) per la rilevazione del MIRCERA dal macchiare Occidentale. L'intensità delle bande di NESP e di Dynepo in diminuzione gradualmente secondo la diminuzione nella loro concentrazione, ma un simile comportamento non è stato osservato per le bande di MIRCERA. “Abbiamo presunto dagli esperimenti che la prestazione macchiante Occidentale alterata di MIRCERA fosse dovuto il suo PEGylation (trattamento con il polietilene glicole per ottenere un effetto a lunga azione della proteina),„ il Dott. celebre Reichel.

Le parità delle masse molecolari medie differenti (PARITÀ 1500, 2000, 8000, 20000, 35000) poi sono state separate su SDS-PAGE e sono state visualizzate con un metodo di macchiatura Parità-specifico. dovuto una potenza di solubilizzazione limitata di SDS, Parità - indipendentemente dalla dimensione molecolare - sono stati trovati per migrare come vaste e bande spalmate su SDS-PAGE. Dato ai risultati i ricercatori ha supposto che la sensibilità in diminuzione di MIRCERA sulle macchie Occidentali fosse dovuto un problema SDS basato della solubilità della Parità-parte di MIRCERA.

Per risolvere il problema ricerca in primo luogo ha usato un detersivo con più sulla solubilizzazione della potenza per le Parità che lo SDS che non ha migliorato la forma della banda di MIRCERA. I Ricercatori poi hanno usato SARCOSYL o (SAR) - PAGINA con i risultati eccellenti sulle macchie Occidentali da MIRCERA di risoluzione in una banda marcata e simultaneamente nella conservazione la risoluzione dei rhEPOs e del uhEPO al livello di rendimento di SDS-PAGE. Gli autori hanno trovato che “SARCOSYL non stava legando al polietilene glicole e così stava lasciando le Parità nel loro stato uncharged indigeno.„ SDS-PAGE di Riprogettazione scambiando lo SDS per SARCOSYL nel campione ed i buffer correnti ha risolto il problema.

“Nel Passato, là stato necessario per essere quattro metodi eseguiti per individuare ha vietato le sostanze. Il Nostro metodo permette che i ricercatori individuino MIRCERA e l'altro EPOs facendo uso appena di singolo metodo,„ il Dott. Reichel ha confermato.

Sorgente: Wiley-Blackwell