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Os Pesquisadores desenvolvem o método electrophoretic novo para detectar MIRCERA e EPO no sangue

A Aproximação Nova Reduz o Número de Rotinas Necessários Para Detectar Erythropoietins

Os pesquisadores Austríacos desenvolveram com sucesso um método electrophoretic novo para detectar MIRCERA® e outros erythropoietins (EPO) no sangue. A técnica, usando SARCOSYL-PAGE, aumentou especificamente a sensibilidade para MIRCERA, mas não altera as características de desempenho de SDS-PAGE para detectar o outro EPOs. Os Detalhes deste estudam, financiado por uma concessão da Agência do Anti-doping do Mundo (WADA), aparecem na introdução a mais atrasada do Teste e da Análise da Droga publicados por Wiley-Blackwell.

MIRCERA (glicol-epoetin methoxy beta), um EPO do polietileno de PEGylated, é uma proteína sintética que ajude o corpo a produzir glóbulos vermelhos e usado para tratar a anemia causada pela doença renal. A droga é manufacturado pelo Hoffmann-La Roche e somente disponível fora dos E.U. devido a uma infracção em cima das patentes de Amgen em produtos de recombinação e em processos do EPO. No passado, EPOs foi fora-etiqueta usada como a lubrificação de agentes por atletas para aumentar a resistência em esportes como o ciclismo, corredor da distância, e enfileiramento. WADA proibiu o uso de EPOs, tal como MIRCERA, em todos os esportes competitivos.

“A detecção de lubrificação com EPOs de recombinação é um dos assuntos os mais desafiantes no controle do anti-doping,” disse o Dr. Cristão Reichel dos Laboratórios de Seibersdorf no Instituto de Tecnologia Austríaco (AIT) e no autor principal do estudo. O Dr. Reichel e colegas obteve amostras de sangue de quatro voluntários saudáveis como parte do estudo. Cada participante recebeu uma única dose de cada droga do EPO (NeoRecormon (66 IU/kg), Dynepo (35 IU/kg), e MIRCERA (@g) 50). As Amostras foram recolhidas no mínimo 14 dias (NeoRecormon, Dynepo) ou até 42 dias afixam a injecção no caso de MIRCERA.

Os Pesquisadores usaram uma diluição de série dupla de Dynepo (0,09 ng a 0,7 páginas), de NESP (0,07 ng a 0,5 páginas), e de MIRCERA (0,4 ng à página 3,0 para comparar a sensibilidade de SDS-PAGE (electroforese dodecyl do gel do sulfato-polyacrylamide do sódio) para detectar MIRCERA pela mancha Ocidental. A intensidade das faixas de Dynepo e de NESP diminuídas gradualmente de acordo com a diminuição em sua concentração, mas um comportamento similar não foi observada para as faixas de MIRCERA. “Nós presumimos das experiências que o desempenho de mancha Ocidental alterado de MIRCERA era devido a seu PEGylation (tratamento com o glicol de polietileno para obter um efeito deactuação da proteína),” Dr. notável Reichel.

Os Pegs de massas moleculars médias diferentes (PEG 1500, 2000, 8000, 20000, 35000) então foram separados em SDS-PAGE e visualizados com um método de mancha Peg-específico. Devido a uma potência solubilizing limitada de SDS, Pegs - apesar do tamanho molecular - foram encontrados para migrar como faixas largas e manchadas em SDS-PAGE. Dado os resultados pesquisadores sups que a sensibilidade diminuída de MIRCERA em manchas Ocidentais era devido a um problema SDS-baseado da solubilidade da Peg-parte de MIRCERA.

Para resolver a edição pesquisa usou primeiramente um detergente com potência solubilizing mais alta para Pegs do que o SDS que não melhorou a forma da faixa de MIRCERA. Os Pesquisadores usaram então SARCOSYL ou (SAR) - PÁGINA com resultados excelentes em manchas Ocidentais por MIRCERA de resolução em uma faixa afiada e simultaneamente em manter a definição dos rhEPOs e o uhEPO no nível de desempenho de SDS-PAGE. Os autores encontraram que “SARCOSYL não estava ligando ao glicol de polietileno e estava deixando assim Pegs em seu estado uncharged nativo.” SDS-PAGE de Remodelação trocando o SDS por SARCOSYL na amostra e por amortecedores running resolveu o problema.

“No passado, lá necessário para ser quatro métodos executados para detectar proibiu substâncias. Nosso método permite que os investigador detectem MIRCERA e o outro EPOs usando apenas um único método,” Dr. Reichel confirmou.

Source: Wiley-Blackwell