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Escenario de tensión de Linkam elegido para controlar la tensión en incremento del colágeno humano por la Universidad de Liverpool

La microscopia de temperatura controlada de los Fabricantes, Instrumentos Científicos de Linkam, ha sido elegida por el Departamento de la Física de la Universidad de Liverpool para estudiar los efectos de controlar las tensiones aplicadas durante el incremento del colágeno secretado de las células humanas del fibroblasto. La meta de la investigación del Asistente de Investigación Mayor, del Dr. Caroline Smith, y de sus colegas en la Universidad de Liverpool es avance el tratamiento de los daños del tendón desarrollando un método de crecer el colágeno humano orientado.

Para lograr esto y ganar una comprensión fundamental del proceso, el Dr. Smith está utilizando la técnica óptica de la espectroscopia de la anisotropía de la reflexión para vigilar el fragmento al cual el colágeno, crecido por las células del fibroblasto del ratón en los substratos elastoméricos, se orienta cuando está sujetado a una tensión uniaxial regular montada en un escenario de tensión de Linkam TST350.

Para el experimento, los pequeños receptores de papel capaces de sujetar el líquido fueron fabricados del polydimethylsiloxane (PDMS) para ajustar en el Probador de la Tensión De Tensión. El efecto de estirar el PDMS en función de la tensión aplicada fue investigado inicialmente para determinar el efecto de la tensión sobre el substrato. (J. Phys. D: Appl. Phys. 43, 245301 (2010)). Los fibroblastos murine L929 que las células fueron cultivadas en 37˚C en una atmósfera del CO2 del 5% en Dulbeccos Modificaron el Media de Eagles (DMEM) (Sigma) suplementado con los antibióticos Fetales del Suero Vacuno del 5% (Invitrogen) y de la Penicilina/de la Estreptomicina del 1% (Sigma). El medio de cultivo fue llenado diariamente durante el período de ciclaje. Las células estaban entonces conforme a la tensión cíclica por 7 días. Después de 7 días, los receptores de papel fueron quitados de la incubadora y lavado con el Fosfato de Dulbecco Protegió Salino (DPBS, Sigma). La capa de la célula fue dispersada en el 0.05% Trypsin/EDTA (Sigma) incubado para 3 mínimos y sujetado a la agitación apacible para quitar las células sin el daño de la capa del colágeno. Después del retiro de las células el colágeno secretado de las células se podía investigar por microscopia y espectroscopia ópticas de la anisotropía de la reflexión.

La capacidad de elegir una amplia gama de velocidades del cíclico para relacionarse de nuevo al incremento del colágeno es muy útil. Inicialmente, el Dr. Smith pensado en la fabricación de su propia PRUEBA pero tener una pequeña unidad que podría controlar la tensión cíclica y también medir curvas de la tensión/de la deformación en lo mismo sería muy difícil fabricar interno. Por Lo Tanto, la unidad de Linkam fue comprada.

El escenario TST350 se construye con dos tornillos de posicionamiento de tierra del acero inoxidable de la precisión para mantener la alineación vertical y horizontal uniforme perfecta. Las bocas de la muestra se mueven en direcciones opuestas para mantener la muestra en campos visuales reflejados y transmitidos del microscopio. El control y la exactitud de la Temperatura es excelentes con un rango de -196°C a 350°C con el mando 0.01°C y hasta los tipos 30°C/min, con virtualmente ningún feedback de la temperatura a la medición de la fuerza. Las Muestras se pueden cargar rápidamente en las bocas y una prueba se puede realizar en segundos. El feedback de datos de interno diseñado y construido del transductor de la fuerza, se puede utilizar para visualizar un gráfico en línea de la fuerza/de la distancia cuando las bocas se están moviendo a la velocidad constante o cuando la velocidad se varía para mantener una fuerza constante. La velocidad de las bocas, fuerza aplicado y la distancia movida se puede todos variar en relación con la temperatura de la célula. El compartimiento de la muestra se tapa y se puede controlar con los diversos gases inertes vía las válvulas aptas del tecleo de la precisión construidas sobre las caras del escenario.

Fuente: www.linkam.co.uk

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