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Os Cientistas desenvolvem uma maneira nova de gerar linha celular pluripotent induzidas da haste dos fibroblasto humanos

Uma equipe dos cientistas do Instituto de Investigação da Fundação (NYSCF) da Célula Estaminal de New York conduzidos por David Kahler, PhD, Director de NYSCF da Automatização de Laboratório, desenvolveu uma maneira nova de gerar linha celular pluripotent induzidas (iPS) da haste dos fibroblasto humanos, adquiridos dos doadores saudáveis e doentes. Relatado em PLOS UM, este método declassificação selecciona consistentemente as pilhas as mais de alta qualidade, estandardizadas do iPS, representando uma etapa principal para a frente para a descoberta da droga e a revelação de terapias de pilha.

Empregando um Prémio Nobel desenvolvido método Shinya Yamanaka da descoberta em 2012, DM, PhD, as pilhas adultas “reprogrammed” ou são revertidas ao embrionário-como o estado, geralmente com a infecção viral. Reprogramming é um processo dinâmico, tendo por resultado uma mistura de pilhas inteiramente reprogrammed do iPS, de pilhas parcialmente reprogrammed, e de pilhas adultas residuais. Os protocolos Precedentes para seleccionar a promessa de pilhas inteiramente reprogrammed confiam primeiramente em julgar colônias de célula estaminal pelo olho através de um microscópio.

As colônias de Pilha selecionadas por medidas qualitativas poderiam incluir as pilhas parcialmente reprogrammed, um interesse principal para aplicações clínicas de terapias de pilha porque estas pilhas poderiam se transformar toda a outra pilha dactilografam dentro um paciente depois da transplantação. Adicionalmente para ensaios da eficácia da droga e investigações da toxicidade em pilhas do iPS, as populações heterogêneas da pilha podem estragar a resposta de linha celular representativas do iPS.

Os cientistas de NYSCF desenvolveram um protocolo quantitativo, aperfeiçoado sobre três e uma metade dos anos, a fim colher consistentemente pilhas cedo-reprogrammed. Usar a fluorescência activou a pilha que classifica (FACS), as pilhas inteiramente reprogrammed foram identificadas por duas proteínas específicas, ou por marcadores do pluripotency. O grupo olhou então o terceiro marcador que é expressado por pilhas parcialmente reprogrammed ou adultas, e então seleccionaram negativamente contra estas pilhas para obter somente pilhas inteiramente reprogrammed.

“Até agora, este protocolo permitiu nosso grupo de derivar (e para caracterizar sobre) 228 linha celular individuais do iPS, representando uma das coleções as maiores derivadas em um único laboratório,” disse o Dr. Kahler. “Este método estandardizado significa que estas pilhas do iPS podem ser comparadas a uma outra, uma etapa essencial para o uso em telas da droga e a revelação de terapias de pilha.”

Este processo de selecionar colônias de célula estaminal fornece a base para uma nova tecnologia desenvolvida por NYSCF, A Disposição de Célula Estaminal Global de NYSCF (Disposição), uma plataforma inteiramente automatizada, robótico para gerar paralelamente linha celular. Actualmente em curso no Laboratório de NYSCF, a Disposição reprograms milhares das amostras saudáveis dos doadores e da pele e/ou de sangue dos pacientes doentes em linha celular do iPS. Classificar e caracterizar pilhas em uma fase inicial de reprogramming permitem a revelação eficiente de clone da pilha do iPS e a derivação de tipos adultos da pilha.

“Nós somos entusiásticos sobre a promessa posses deste protocolo ao campo. Porque as células estaminais se movem para a clínica, o trabalho do Dr. Kahler é um passo crítico para assegurar, tratamentos eficazes para todos,” disse Susan L. Solomon, CEO seguro de NYSCF.

Source: Fundação da Célula Estaminal de New York