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La combinaison de NASBA et de qPCR en temps réel trouve l'aspergillose avec l'exactitude 100%

L'aspergillose invasive d'infection fongique (IA) peut être potentiellement mortelle, particulièrement dans les patients dont les systèmes immunitaires sont affaiblis par chimiothérapie ou médicaments immunodépresseurs. En dépit du besoin critique de dépistage précoce, il reste difficile diagnostiquer IA. Une étude dans le tourillon tests diagnostique comparés de diagnose moléculaire des trois et constaté que la combinaison de l'amplification séquence séquence d'acide nucléique (NASBA) et de l'ACP quantitatif en temps réel (qPCR) trouve l'aspergillose avec l'exactitude 100%.

IA est provoqué par le fumigatus cryptogamique d'aspergillus, qui est considéré comme étant par beaucoup de pathologistes le moulage le plus nuisible du monde. « Les méthodes diagnostiques traditionnelles, telles que la culture et l'histopathologie des tissus infectés, souvent ne trouvent pas l'aspergillus, » YUN Xia, PhD de principal enquêteur de commentaires, du premier hôpital affilié de l'université médicale de Chongqing, Chongqing, Chine.

Dans cette étude rétrospective, les scientifiques ont évalué le rendement diagnostique de deux analyses d'amplification d'acide nucléique (qPCR et NASBA) et d'une méthode de détection de l'antigène (méthode ELISA de galactomannane [GM-ELISA]) utilisant des prises de sang rassemblées de 80 patients au haut risque d'IA. Des 80 patients, 42,5% ont eu IA prouvé ou probable. Les patients sont venus des soins intensifs, de l'hématologie, de la neurologie, de la néphrologie, de la gériatrie, et d'autres services d'hôpital.

Les tests ont été évalués unique et en association. Individuellement, NASBA a eu la sensibilité la plus élevée (76,47%) alors que le qPCR a offert la spécificité la plus élevée (89,13%). NASBA était également le test que ce meilleur a indiqué qu'un patient n'a pas eu l'infection (valeur prévisionnelle négative). NASBA et qPCR chacun ont eu un index élevé de Youden, une mesure de l'efficacité d'une borne diagnostique.

La combinaison des tests a amélioré les résultats. La combinaison de NASBA et de qPCR a mené à la spécificité 100% et à la valeur prévisionnelle positive de 100% (la probabilité que les sujets ont vraiment l'infection).

« Puisque chaque test a des avantages et des désavantages, une combinaison de différents tests peut pouvoir fournir une meilleure valeur diagnostique qu'est fourni par un test unique, « dit M. Xia. La combinaison de NASBA et de qPCR devrait être utile en excluant IA dans les cas étranges, de ce fait réduisant la souffrance et les frais pour des patients immunodéprimés. D'autre part, la combinaison de NASBA et de qPCR pourrait être plus adaptée pour interviewer des patients soupçonnés de l'infection, parce que cette analyse a eu la sensibilité la plus élevée. »

Les auteurs notent que NASBA offre les avantages de l'amplification rapide (90 mn) et du fonctionnement simple avec le coût inférieur d'instrument avec le qPCR et le GM-ELISA. Ils avertissent que bien que GM-ELISA largement et par habitude soit répandu pour le diagnostic d'aspergillose, cette étude indique qu'elle a eu la sensibilité inférieure (52,94%) avec la spécificité raisonnable (80,43%), lui effectuant le « inférieur à NASBA et à qPCR. »

Le moulage de fumigatus d'A. est omniprésent dans l'environnement et est trouvé sur la question diminuante de centrale. Pour l'exposition de personnes en bonne santé au champignon peut être sans importance, mais il peut entraîner la morbidité significative et la mortalité pour ceux avec les systèmes immunitaires compromis, y compris les patients qui ont subi des greffes d'organe ou ont le SIDA avancé. Même les patients présentant des handicaps immunisés plus modestes, tels que le diabète, nutrition faible, utilisation stéroïde, ou affection pulmonaire, peuvent devenir sévèrement infectés. Les sympt40mes peuvent comprendre la fièvre, la toux, la difficulté respirant, la douleur thoracique, les grippages, et les problèmes neurologiques focaux.

Les critères pour le haut risque pour les niveaux de β-D-glucane du haut compris par IA (1,3) - (>60 pg/mL), le statut d'immunodéprimé, et une de six conditions (le bénéficiaire d'une greffe de cellule souche d'allogénique, d'une maladie hématologique, d'un déficit immunitaire sévère, d'un usage prolongé des corticoïdes, d'une fièvre ou d'une poitrine infiltrent le signe insensible aux antibiotiques courants et ou radiologique de la maladie fongique). Les patients n'ont reçu aucun traitement antimycosique jusqu'après que des prises de sang ont été rassemblées.

Le premier test était la mesure de la GM, une composante de polysaccharide de la paroi cellulaire fongique, qui peut être déchargée dans le sérum et le liquide de lavage bronchoalvéolaire pendant l'infection. La GM a été mesurée utilisant un nécessaire disponible dans le commerce d'ELISA (aspergillus de Platelia ; Bio-Rad laboratoires, Hercule, CA). Dans cette étude, un index de GM (GMI) de 0,5 a été employé.

Le deuxième test était une analyse de qPCR d'extraction et de temps réel de l'aspergillus ADN. L'ADN a été extrait du plasma utilisant nécessaire de sang de QIAamp un mini (Qiagen, Hilden, Allemagne). L'ADN épuré a été alors amplifié par une analyse de qPCR de genre-détail d'aspergillus utilisant la chimie de vert de SYBR et des amorces visant le gène de 28S ARNr. La limite du dépistage inférieure a été empiriquement déterminée pour être 10 éléments de formation de colonies des conidium d'aspergillus selon la réaction.

Le troisième test était une extraction d'ARN d'aspergillus et analyse de NASBA. L'ARN total a été extrait du plasma utilisant un nécessaire rapide de sang/d'extraction d'échantillon ARN liquide de total (BioTeke, Pékin, Chine). Un détail fortement économisé de région de 18S ARNr pour le genre d'aspergillus a été choisi comme objectif de dépistage. Il a été alors amplifié utilisant une paire d'amorces. Le contrôle neutre, le contrôle négatif (ARN extrait des patients sans infection d'aspergillus) et le contrôle positif (ARN extrait de l'aspergillus dans la culture pure) ont été compris dans chacun fait fonctionner.