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La combinación de NASBA y del qPCR en tiempo real descubre aspergilosis con la exactitud 100%

La aspergilosis invasor de la infección por hongos (IA) puede ser peligrosa para la vida, especialmente en los pacientes cuyos sistemas inmunes son debilitados por la quimioterapia o drogas inmunosupresivas. A pesar de la necesidad crítica de la detección temprana, IA sigue siendo difícil de diagnosticar. Un estudio en el gorrón de diagnósticos moleculares comparó tres pruebas diagnósticas y encontró que la combinación del ácido nucléico serie-basó la amplificación (NASBA) y la polimerización en cadena cuantitativa en tiempo real (qPCR) descubre aspergilosis con la exactitud 100%.

IA es causado por el fumigatus fungoso del aspergillus, que es considerado por muchos patólogos ser el molde más dañino del mundo. Los “métodos diagnósticos tradicionales, tales como cultura e histopatología de tejidos infectados, no pueden a menudo descubrir el aspergillus,” YUN Xia, doctorado del principal investigador de los comentarios, del primer hospital afiliado de la universidad médica de Chongqing, Chongqing, China.

En este estudio retrospectivo, los científicos evaluaron el funcionamiento diagnóstico de dos análisis de la amplificación del ácido nucléico (qPCR y NASBA) y de un método de detección del antígeno (análisis enzima-conectado galactomanano del inmunosorbente [GM-ELISA]) usando las muestras de sangre cerco a partir de 80 pacientes en de alto riesgo de IA. De los 80 pacientes, 42,5% habían probado o IA probable. Los pacientes vinieron de cuidados intensivos, de hematología, de neurología, de nefrología, de geriatría, y de otros departamentos del hospital.

Las pruebas fueron evaluadas único y en la combinación. Individualmente, NASBA tenía la sensibilidad más alta (76,47%) mientras que el qPCR ofreció la especificidad más alta (89,13%). NASBA también era la prueba que ese mejor indicó que un paciente no tenía la infección (valor profético negativo). NASBA y el qPCR cada uno tenían un alto índice de Youden, una dimensión de la eficacia de un marcador diagnóstico.

Combinar las pruebas perfeccionó los resultados. La combinación de NASBA y del qPCR llevó a la especificidad 100% y al valor profético positivo del 100% (la probabilidad que los temas verdad tienen la infección).

“Porque cada prueba tiene ventajas y desventajas, una combinación de diversas pruebas puede poder ofrecer un mejor valor diagnóstico que es ofrecido por una única prueba, “dice al Dr. Xia. La combinación de NASBA y del qPCR debe ser útil en la exclusión de IA en los casos sospechados, así reduciendo el sufrimiento y el costo para los pacientes immunocompromised. Por otra parte, la combinación de NASBA y del qPCR podría ser más conveniente para revisar a los pacientes sospechosos de la infección, porque este análisis tenía la sensibilidad más alta.”

Los autores observan que NASBA ofrece las ventajas de la amplificación rápida (90 minutos) y de la operación simple con el costo inferior del instrumento comparado con el qPCR y GM-ELISA. Advierten que aunque GM-ELISA se utilice extensamente y rutinario para la diagnosis de la aspergilosis, este estudio indica que tenía sensibilidad inferior (52,94%) con la especificidad razonable (80,43%), haciéndole el “inferior a NASBA y al qPCR.”

El molde del fumigatus del A. es ubicuo en el ambiente y se encuentra en materia de decaimiento de la instalación. Para la exposición sana de los individuos al hongo puede ser inconsecuente, pero puede causar morbosidad y la mortalidad importantes para ésos con los sistemas inmunes comprometidos, incluyendo los pacientes que han experimentado trasplantes de órgano o han avance el SIDA. Incluso los pacientes con debilitaciones inmunes más modestas, tales como diabetes, nutrición pobre, uso esteroide, o enfermedad pulmonar, pueden infectarse seriamente. Los síntomas pueden incluir fiebre, tos, la respiración de la dificultad, el dolor de pecho, capturas, y problemas neurológicos focales.

Las consideraciones para de alto riesgo para los niveles incluidos IA del β-D-glucano del alto (1,3) - (>60 pg/mL), el estado immunocompromised, y una de seis condiciones (el beneficiario de un trasplante allogeneic de la célula madre, de una enfermedad hematológica, de una inmunodeficiencia severa, de un uso prolongado de corticosteroides, de una fiebre o de un pecho infiltra la indicación insensible a los antibióticos rutinarios, o radiológica de la enfermedad fungicida). Los pacientes no recibieron ninguna terapia antihongos hasta después de que las muestras de sangre cerco.

La primera prueba era la medición del GM, un componente del polisacárido de la pared celular fungicida, que se puede liberar en el suero y el líquido de lavado broncoalveolar durante la infección. El GM fue medido usando un estuche disponible en el comercio de ELISA (aspergillus de Platelia; Bio-Rad laboratorios, Avión c-130, CA). En este estudio, un índice del GM (GMI) de 0,5 fue utilizado.

La segunda prueba era una extracción de la DNA del aspergillus y un análisis en tiempo real del qPCR. La DNA fue extraída de plasma usando estuche de la sangre de QIAamp un mini (Qiagen, Hilden, Alemania). La DNA purificada entonces fue amplificada por un análisis género-específico del qPCR del aspergillus usando química del verde de SYBR y las pinturas de fondo que apuntaban el gen del rRNA 28S. El límite de detección más inferior empírico fue determinado para ser 10 unidades de la formación de colonias de los conidios del aspergillus por la reacción.

La tercera prueba era una extracción del ARN del aspergillus y análisis de NASBA. El ARN total fue extraído de plasma usando un estuche rápido de la sangre/de la extracción de la muestra del ARN líquido del total (BioTeke, Pekín, China). Un específico altamente conservado de la región del rRNA 18S para el género del aspergillus fue elegido como el objetivo de la detección. Entonces fue amplificado usando un par de pinturas de fondo. El mando en blanco, el mando negativo (ARN extraído de pacientes sin la infección del aspergillus) y el mando positivo (ARN extraído de aspergillus en cultura pura) fueron incluidos en cada uno ejecutada.