Le système du CG-MALS de la technologie de Wyatt active la caractérisation des interactions protéine-protéine complexes

Wyatt Technology Corporation, le leader mondial dans l'instrumentation pour la caractérisation absolue macromoléculaire et de nanoparticle, est heureux de mettre en valeur une étude neuve qui décrit l'utilisation de la dispersion de la lumière de multi-cornière de composition-gradient (CG-MALS) pour la caractérisation des interactions protéine-protéine complexes.

L'étude, autorisée le ` des analyses mécanistes dans la machine de réutilisation du composé de PIÈGE', était publiée dans la question du 5 février 2015 de la nature. Les auteurs expliquent les avantages de CG-MALS pour recenser la stoechiométrie du composé formé sur la hétéro-association entre le αSNAP (protéine soluble de pièce d'assemblage de NSF) et le PIÈGE (récepteurs sensibles solubles de protéine de pièce d'assemblage de facteur de N-ethylmaleimide) utilisant le système biomoléculaire d'interaction® de la calypso de la technologie de Wyatt.

La fusion de membrane est essentielle pour beaucoup de procédés physiologiques en cellules eucaryotes comprenant le trafic de protéine et de membrane, la sécrétion hormonale et la neurotransmission. Les protéines évolutionnaires de PIÈGE ont une fonction clé dans ces procédés pendant qu'elles forment un composé qui pilote la fusion de membrane dans les eucaryotes. Le NSF d'atpase (facteur sensible de N-ethylmaleimide), avec des ruptures, désassemble le composé de PIÈGE dans ses éléments protéiques, tenant compte des ronds suivants de la fusion. En raison des limites à basse résolution des techniques utilisées pour des études structurelles dans le supercomplex de NSF/SNAP/SNARE (20S), peu est connu au sujet de l'architecture moléculaire détaillée du supercomplex.

CG-MALS mesure des interactions biomoléculaires en mesurant la masse molaire grammage-moyenne de la solution de protéine (Mw) au-dessus d'une suite de concentrations et de compositions. L'analyse détermine l'affinité obligatoire et la stoechiométrie moléculaire de grandes interactions protéine-protéine d'une variété, y compris de soi-même et de hétéro-association. Les étalages actuels d'étude l'utilisation de CG-MALS d'aider à résoudre des questions critiques, telles que la façon dont la RUPTURE de protéine d'adaptateur décèle et agit l'un sur l'autre avec des composés de PIÈGE, ainsi que le mécanisme pour le démontage.

Des expériences de CG-MALS sont effectuées avec un système de gradient de composition de la calypso II, programmé automatiquement pour préparer et livrer différents mélanges de protéine et de tampon à un détecteur® de dispersion® de la lumière de multi-cornière de l'AUBE HELEOS II et à un détecteur en ligne de concentration d'UV/Vis. Des caractéristiques sont acquises et analysées en seul logiciel de CALYPSO pour déterminer les constantes de dissociation de plan et d'équilibre d'association. En mesurant n'importe quelle auto-association et en évaluant la hétéro-interaction entre le αSNAP et chaque composé de PIÈGE, il était possible de confirmer les structures cryo-FIN DE SUPPORT qui ont fourni un modèle de fonctionnement du démontage NSF-assisté de composé de PIÈGE.

M. Daniel Some, Directeur du Marketing et scientifique principal à la technologie de Wyatt explique :

La caractérisation absolue des interactions protéine-protéine complexes telles que le système de SNAP-SNARE expliqué dans cette étude peut prouver la remise en question. Les techniques traditionnelles ne fournissent pas le niveau requis du petit groupe sur l'affinité et la stoechiométrie moléculaire absolue de ces composés, ainsi il signifie que les questions scientifiques critiques demeurent sans réponse. La calypso II active la quantification rapide et la caractérisation en profondeur des interactions biomoléculaires, marque marque et sans immobilisation, complétant d'autres techniques biomoléculaires d'interaction. Nous sommes avec plaisir que cette étude ait été publiée en nature pour continuer à soulever la conscience des capacités polyvalentes de CG-MALS pour la recherche en matière des sciences de la vie et le développement biotherapeutic.

Dans un développement relatif, Wyatt récent publié une étude effectuée à l'institut de recherches de Scripps, détaillant comment CG-MALS fonctionne en tandem avec la chromatographie de taille-exclusion accouplée à MALS (SEC-MALS) pour caractériser entièrement l'interaction d'une glycoprotéine virale (vGP) avec de l'anticorps (Ab). Dans la note d'application « anticorps de compréhension et interactions virales de glycoprotéine utilisant CG-MALS, » SEC-MALS a déterminé la condition et le degré dimères de glycosylation de vGP, alors que CG-MALS mesurait l'auto-association de vGP avec la stoechiométrie et l'affinité obligatoire du vGP - interaction d'ab. Cette puissante combinaison de techniques de dispersion de la lumière a permis pour déchiffrer l'interaction vGP-Ab avec un petit groupe plus grand qu'a été précédemment connu. Cette étude a fourni des données de valeur concernant l'épitope potentiel pour l'anticorps, qui est essentiel pour préparer des demandes de règlement post-exposition ou concevoir des antigènes pour la production vaccinique.

Cette étude est procurable pour la télécharger chez www.wyatt.com/AppNotes/CG-MALS.

Source:

Wyatt Technology

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