O sistema do CG-MALS da tecnologia de Wyatt permite a caracterização de interacções complexas da proteína-proteína

Wyatt Tecnologia Corporaçõ, líder mundial na instrumentação para a caracterização absoluta macromolecular e do nanoparticle, é satisfeito destacar um estudo novo que descreva o uso da dispersão de luz do multi-ângulo do composição-inclinação (CG-MALS) para a caracterização de interacções complexas da proteína-proteína.

O estudo, autorizado o ` introspecções mecanicistas na máquina de recicl do complexo da CILADA', foi publicado na introdução do 5 de fevereiro de 2015 da natureza. Os autores demonstram os benefícios de CG-MALS para identificar a estequiometria do complexo formado em cima da hetero-associação entre o αSNAP (proteína solúvel do acessório do NSF) e a CILADA (receptors sensíveis solúveis da proteína do acessório do factor de N-ethylmaleimide) que usa o sistema biomolecular da interacção® do calipso da tecnologia de Wyatt.

A fusão da membrana é essencial para muitos processos fisiológicos nas pilhas eucarióticas que incluem o tráfico da proteína e da membrana, a secreção da hormona e a neurotransmissão. As proteínas evolucionárias da CILADA têm um papel chave nestes processos enquanto formam um complexo que conduza a fusão da membrana nos eukaryotes. O NSF da ATPase (factor sensível de N-ethylmaleimide), junto com pressões, desmonta o complexo da CILADA em seus componentes de proteína, permitindo círculos subseqüentes da fusão. Devido aos limites de baixa definição de técnicas usadas para estudos estruturais no supercomplex de NSF/SNAP/SNARE (20S), pouco é sabido sobre a arquitetura molecular detalhada do supercomplex.

CG-MALS determina interacções biomoleculares medindo a massa peso-média do molar da solução da proteína (Mw) sobre uma série de concentrações e de composições. A análise estabelece a afinidade obrigatória e a estequiometria molecular interacções de grandes de uma proteína-proteína da variedade, incluindo o auto e a hetero-associação. As mostras à mão do estudo o uso de CG-MALS ajudar a resolver perguntas críticas, tais como como a PRESSÃO da proteína do adaptador reconhece e interage com os complexos da CILADA, assim como o mecanismo para a desmontagem.

As experiências de CG-MALS são executadas com um sistema de inclinação de composição do calipso II, programado para preparar e entregar automaticamente misturas diferentes da proteína e do amortecedor a um detector® da dispersão® de luz do multi-ângulo do ALVORECER HELEOS II e a um detector em linha da concentração de UV/Vis. Os dados são adquiridos e analisados no software original do CALIPSO para determinar as constantes da dissociação do esquema e do equilíbrio da associação. Determinando toda a auto-associação e avaliando a hetero-interacção entre o αSNAP e o cada complexo da CILADA, era possível confirmar as estruturas cryo-EM que forneceram um modelo de funcionamento da desmontagem NSF-negociada do complexo da CILADA.

O Dr. Daniel Algum, director de marketing e cientista principal na tecnologia de Wyatt explica:

A caracterização absoluta de interacções complexas da proteína-proteína tais como o sistema de SNAP-SNARE demonstrado neste estudo pode provar o desafio. As técnicas tradicionais não fornecem o nível de detalhe exigido na afinidade e na estequiometria molecular absoluta destes complexos, assim que significa que as perguntas científicas críticas permanecem não respondidas. O calipso II permite a quantificação rápida e a caracterização detalhada das interacções biomoleculares, etiqueta-livre e imobilização-livre, complementando outras técnicas biomoleculares da interacção. Nós somos deleitados que este estudo estêve publicado na natureza para continuar a aumentar a consciência das capacidades versáteis de CG-MALS para a pesquisa da ciência da vida e a revelação biotherapeutic.

Em uma revelação relacionada, Wyatt publicou recentemente um estudo realizado no instituto de investigação de Scripps, detalhando como CG-MALS se opera com a cromatografia da tamanho-exclusão acoplada a MALS (SEC-MALS) para caracterizar inteiramente a interacção de uma glicoproteína viral (vGP) com um anticorpo (Ab). Na nota de aplicação “anticorpo compreensivo e interacções virais da glicoproteína usando CG-MALS,” SEC-MALS estabeleceu o estado e o grau dimeric de glycosylation do vGP, quando CG-MALS determinou a auto-associação do vGP junto com a estequiometria e a afinidade obrigatória do vGP - interacção do Ab. Esta combinação poderosa de técnicas da dispersão de luz tornou possível decifrar a interacção vGP-Ab com maior detalhe do que foi sabido previamente. Este estudo rendeu a informação valiosa em relação ao resumo potencial para o anticorpo, que é essencial para formular tratamentos de pós-exposição ou projetar antígenos para a produção vacinal.

Este estudo está disponível para transferir em www.wyatt.com/AppNotes/CG-MALS.

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Wyatt Technology

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