Technologie à cellule T d'extension : une entrevue avec Alexandre Malykhin, CVPF, Université de Pennsylvanie

Alexander Malykhin
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Comment le traitement à cellule T fonctionne-t-il ?

Des cellules de T sont prises du sang du patient et puis modifiées utilisant le lentivirus, l'adénovirus ou l'électroperméabilisation d'ARN. Les modifications nous permettent de reprogrammer des cellules de T pour identifier des cellules cancéreuses.

Quand elles sont introduites au fuselage du patient, les cellules de T se multiplient rapidement, cherchant et détruisant des cellules cancéreuses. Les cellules de T demeurent également habituellement dans le fuselage longtemps après l'infusion et continuent de combattre toutes les cellules cancéreuses neuves.

Le Multisizer est l'un des dispositifs le plus intensivement utilisés pendant les méthodes de fabrication de cellules. C'est notre cheval de travail.

 

Multisizer 4

Pour plus d'informations sur le Multisizer, visitez s'il vous plaît le coutre de Beckman

Pouvez-vous veuillez donner une introduction à la technologie à cellule T d'extension de faisceau utilisée aux installations productives cliniques de cellules et de vaccin (CVPF) ?

La technologie de plate-forme de faisceau au CVPF est l'utilisation de l'antigène artificiel présentant des cellules (aAPCs) pour l'extension des lymphocytes T. Ceci comprend des technologies cellulaires talon talon et modifiées de propriété industrielle de CD3/CD28 de l'aAPC K562 pour stimuler et augmenter des cellules de T.

Chacun des deux modifications - les talons et les cellules solides de auto-reproduire - fournissent un signe stimulatoire et Co-stimulatoire aux lymphocytes T, qui divisent alors des périodes multiples. Suivre ces méthodes, nous pouvons réaliser une extension significative et une grande pureté des cellules de T.

Actuel, la technologie que nous employons est longue et de main-d'oeuvre et exige du personnel fortement qualifié de mettre à jour un environnement contrôlé. Un des objectifs de CVPF est de transformer ces méthodes de boutique aux technologies de courant principal qui peuvent être employées pour soigner des milliers de patients.

Comment l'antigène K562 artificiel cellulaire talon talon et modifié présentant des technologies (aAPC) de cellules diffèrent-ils ?

En technologie talon talon, des talons sont enduits des anticorps qui grippent à la cellule T et l'activent. Ces talons sont disponibles dans le commerce, mais le choix de l'antigène est tout à fait limité.

L'objectif est d'employer les signes stimulatoires et Co-stimulatoires. Particulièrement, le signe stimulatoire est fourni par un anticorps contre une protéine sur le CD3 appelé à cellule T (l'anticorps anti-CD3) et le signe Co-stimulatoire est un anticorps contre la protéine CD28 (anticorps anti-CD28). L'extension de cellules est beaucoup plus grande si vous stimulez chacun des deux signes, par opposition juste à CD3.

Cet exposé de l'antigène talon talon à une culture à cellule T épurée est comment le procédé est commencé. Puis, ces talons sont retirés utilisant des aimants (les talons ont un faisceau de fer). Ces talons doivent être retirés avant que les cellules de T soient infusées et c'est l'un des inconvénients de cette technologie, car c'est bien une procédure à forte intensité de main d'oeuvre pour les retirer.

Quand nous employons un K562 ou l'autre lignée cellulaire, qui peut exprimer le même genre de molécules que CD3 et CD28, les cellules K562 ont réalisé leur fonction et éliminé dans une question des jours après qu'elles fournissent la stimulation.

Un autre avantage est qu'elles sont comparées plus personnalisable aux talons, qui peuvent les rendre moins chers d'employer parce que nous pouvons produire l'antigène d'intérêt intérieurement. Il y a des avantages et des désavantages liés aux deux technologies.

Pourquoi une modification pour la stimulation de cellules est-elle si importante ?

Une modification est importante pour la stimulation de cellules parce qu'elle induit l'édition absolue extérieure de récepteur, qui est critique pour l'activation fonctionnelle. Ceux-ci peuvent avoir comme conséquence un niveau très élevé de l'extension à cellule T, parfois jusqu'à 100 fois. Quelques études ont également prouvé que la stimulation d'anticorps des cellules de T sans transporteurs (sous une forme liquide) est moins efficace qu'avec la version conjuguée.

La stimulation des cellules utilisant les talons peut fournir un effet plus durable, bien que, comme j'ai mentionné avant, il y ait quelques inconvénients liés aux deux méthodes. Il y a également préoccupation au-dessus d'accessibilité parce que les talons sont tout à fait chers.

Comme conséquence quel niveau d'extension des cellules de T ces technologies peuvent-elles avoir ?

Pendant le processus de fabrication, nous voyons régulièrement 10 à 40 extensions de fois des cellules de T. Dans certains cas, il peut être jusqu'à a 100 fois.

Il varie du patient au patient et dépend de l'état des cellules, le stade de la maladie et si le patient a récent eu la chimiothérapie ou d'autres traitements.

Cependant, dans de nombreux cas, nous voulons augmenter des cellules de T relativement d'un petit nombre à plusieurs milliards, en particulier dans des malignités hématologiques telles que CLL et TOUS, où les cellules de T représentent souvent un pourcentage très petit de tout le nombre de cellules nucléées. Nous pouvons réaliser la dose nécessaire suivre l'un ou l'autre de méthode.

Comment déterminez-vous la viabilité des cellules ?

Actuel, nous employons le bleu trypan souillant avec le hémocytomètre et le microscope ou la cytométrie de flux. C'est la méthode longue qui a plusieurs inconvénients tels qu'un manque de robustesse statistique et de subjectivité des comptes parmi des usagers.

Nous évaluons actuel plusieurs modèles des ripostes automatiques de cellules pour la détermination de la viabilité et nous comptons introduire ces derniers dans la pratique clinique sous peu.

Combien importante est la mesure de volume de cellules dans votre protocole ?

Dans notre cas, le Multisizer est l'un des dispositifs le plus intensivement utilisés pendant les méthodes de fabrication de cellules. C'est notre cheval de travail.

Nous employons le Multisizer pour obtenir des informations sur le volume de cellules et la taille de cellules, alors que le cytometer de flux nous fournit des informations sur les sous-ensembles particuliers de cellules telles que des cellules de T et des cellules de B. Notre stratégie concernant la façon effectuer dans chaque cas, est basée sur l'information obtenue à partir des deux méthodes.

Le volume est tout à fait important pour nous fournir des informations sur l'état d'activation des cellules parce qu'une fois qu'une cellule est stimulée, il augmente dans la taille.

pendant 6-7 jours après stimulation, les cellules deviennent plus petites et moins actives une fois qu'elles sont dans la condition posée. Nous devons pour cette raison savoir pendant les dix jours de la culture, si des cellules ont été activées correctement et sont dans la condition posée vers la fin de la culture.

Ceci signifie surveiller le volume de cellules et le numéro de cellules quotidiennement au cours de cette période. Vu le nombre de cultures que nous effectuons simultanément, le Multisizer est très utile et critique pour nos besoins.

Quel niveau d'exactitude est exigé ?

Notre dextérité est le GMP conforme, qui représente la « bonne pratique en matière de fabrication ». Pour réaliser cette conformité, un haut niveau d'exactitude dans les méthodes analytiques il est essentiel.

Nous devons également pouvoir discerner des sous-ensembles de cellules de différents volumes, en travers des diamètres de entre au moins quatre et 25 microns. Cette gamme est tout à fait en conformité avec les capacités du Multisizer que nous employons.

Pouvez-vous veuillez expliquer pourquoi vous avez décidé d'utiliser le compteur Coulter de Multisizer du coutre de Beckman ?

Nous avions déjà employé Multisizer 3 pendant plus de 10 années et avons su fiable et précis il est. C'est également contrôle qualité amical et GMP conforme, ainsi qu'a une bonne sensibilité et une surface adjacente facile à utiliser. Récent des fonctionnements augmentés par CVPF et maintenant nous avons plusieurs Multisizer 4.

Comment le compteur Coulter de Multisizer emploie-t-il le principe de coutre ?

Il nous permet de trouver le numéro de cellules et volume de cellules simultanément, très rapidement et très à un de haute résolution, il beaucoup adapte à nos buts de surveiller des cellules utilisant un principe d'une riposte de cellules.

Principe de coutre

Le compteur Coulter de Multisizer emploie-t-vous également un compilateur de pouls de Digitals (DPP), s'il vous plaît pouvez-vous expliquer comment ceci influence l'exactitude de la technologie ?

Cette technologie de DPP nous permet d'exécuter l'analyse multivoie à une haute résolution et avec réellement de grande précision. La numérisation ultra-rapide du signe nous permet d'employer des paramètres multiples pour une caractérisation plus précise de particules.

Combien facile à utiliser est le compteur Coulter de Multisizer et y a-t-il une courbe d'apprentissage escarpée ?

Elle est relativement facile à utiliser et notre formation pour utiliser le matériel prend seulement une question des heures. Nous avons un niveau de détail de la pratique (SOP) pour l'usage de Multisizer dans notre dextérité.

En outre, de Multisizer de changement 3 à Multisizer 4 ont offert plusieurs avantages, comme non seulement pouvons nous maintenant déterminer le nombre de cellules, mais nous pouvons voir le volume de cellules en même temps, qui est quelque chose que le Multisizer 3 ne pourrait pas offrir.

Le Multisizer est tout à fait convivial et a le logiciel personnalisable que nous pouvons employer pour produire d'une CONCESSION particulière qui peut fournir les paramètres et les statistiques à peu près immédiatement. Nous sommes pour cette raison tout à fait satisfaisants avec lui.

De quelles voies le compteur Coulter de Multisizer a-t-il pu être aller amélioré vers l'avant ?

Nous avons les salles multiples où différentes cultures cellulaires sont exécutées, mais il serait tout à fait coûteux pour monter Multisizer dans chacun d'eux. Nous voudrions avoir quelque chose un peu plus portable monté dans chacune de notre chambre de culture.

Un débit élevé serait également désirable. Pouvoir analyser les échantillons multiples simultanément dans une courte période serait utile parce que parfois nous devons compter des centaines d'échantillons chaque jour.

Que pensez-vous les futures prises pour des technologies à cellule T d'extension ?

Ce qui serait utile est quelque chose désignée sous le nom « d'un système fermé. » Actuel, nous avons besoin d'un conducteur fortement qualifié pour assurer un environnement contrôlé dans la chambre, mais si nous pouvions produire un système fermé qui n'exige pas la manipulation par un conducteur, l'erreur humaine serait réduite à un minimum et beaucoup de compagnies travaillent actuel vers ceci.

De plus, les systèmes robotisés signifieraient la diminution du coût de fabrication, rendant la technologie plus abordable et procurable sur une échelle mondiale.

Quels sont les régimes de CVPF à l'avenir ?

Après notre progrès récent dans des méthodes de thérapie cellulaire et les découvertes d'inauguration effectuées par professeur Karl juin à l'Université de Pennsylvanie, CVPF avait rapidement augmenté au cours des deux dernières années afin de fournir des demandes de règlement pour plus de patients.

CVPF continue à être le moyeu de la science fondamentale et de la recherche clinique. Nous développons des demandes de règlement neuves pour différents genres de cancer, y compris des tumeurs solides.

Beaucoup d'autres laboratoires suivent-ils la même technologie au niveau de recherches ?

CVPF en ce moment fonctionnant très attentivement avec Novartis sur l'extension mondiale de cette technologie. Ainsi ils investissent non seulement dans l'Université de Pennsylvanie, mais ils ont établi une installation dans le New Jersey où ils travaillent à la production à grande échelle.

D'autres centres réputés fonctionnant dans le domaine de thérapie cellulaire sont Sloan commémoratif Kettering à New York et centre de lutte contre le cancer de DM Anderson, le Texas.

Où peuvent les lecteurs trouver plus d'informations ?

Plus d'information peut également être trouvée sur le site Web de coutre de Beckman :

Le Multisizer du coutre de Beckman a été mentionné dans plus de 50 publications d'analyse de cellules, traitant des cellules mammifères, des cellules bactériennes, et de l'analyse de nanoparticle.

Au sujet d'Alexandre Malykhin, M.Sc.

Alexandre MalykhinDepuis 2012, Alexandre Malykhin a été un superviseur de laboratoire de contrôle qualité, une cellule clinique et des installations productives de vaccin, Université de Pennsylvanie, Philadelphie, la PA, Etats-Unis.

Avant ceci il a travaillé en tant que scientifique de validation, centre de cancérologie ovarien, Université de Pennsylvanie, Philadelphie, la PA, Etats-Unis.

À partir de 2001 à 2008, Alexandre était un gestionnaire de laboratoire, immunobiologie et le programme de cancérologie, fondation de recherches médicales de l'Oklahoma, Ville d'Oklahoma, l'OK, Etats-Unis et avant ceci qu'il a travaillé en tant qu'analyste légal, service d'analyse de l'ADN légale, indiquent le centre légal, Minsk, Belarus.

Alexandre retient un degré de maîtrise scientifique (M.Sc.) en biochimies/biologie moléculaire d'université de l'Etat biélorusse, Minsk, Belarus.

Citations

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    Beckman Coulter Life Sciences - Flow Cytometry. (2020, January 30). Technologie à cellule T d'extension : une entrevue avec Alexandre Malykhin, CVPF, Université de Pennsylvanie. News-Medical. Retrieved on February 27, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20150505/T-cell-expansion-technology-an-interview-with-Alexander-Malykhin-CVPF-University-of-Pennsylvania.aspx.

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