Tecnologia de célula T da expansão: uma entrevista com Alexander Malykhin, CVPF, Universidade da Pensilvânia

Alexander Malykhin
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Como a terapia de célula T trabalha?

As pilhas de T são tomadas do sangue do paciente e alteradas então usando o lentivirus, o vírus adenóide ou o electroporation do RNA. As alterações permitem que nós reprogram pilhas de T para reconhecer células cancerosas.

Quando são introduzidos ao corpo do paciente, as pilhas de T multiplicam ràpida, procurando e destruindo células cancerosas. As pilhas de T igualmente permanecem geralmente no corpo por muito tempo após a infusão e continuam a lutar todas as células cancerosas novas.

O Multisizer é um dos dispositivos o mais intensiva usados durante métodos de fabricação da pilha. É nosso cavalo do trabalho.

 

Multisizer 4

Para obter mais informações sobre do Multisizer, visite por favor a relha de Beckman

Por favor pode você dar uma introdução à tecnologia de célula T da expansão do núcleo usada na instalação de produção clínica da pilha e da vacina (CVPF)?

A tecnologia da plataforma do núcleo no CVPF é o uso do antígeno artificial que apresenta pilhas (aAPCs) para a expansão das T-pilhas. Isto inclui tecnologias baseados em celulas grânulo-baseadas e alteradas proprietárias de CD3/CD28 do aAPC K562 para estimular e expandir pilhas de T.

Both of these matrizes - grânulos e pilhas contínuos auto-replicating - fornecem um sinal stimulatory e co-stimulatory às T-pilhas, que dividem então épocas múltiplas. Usando estes métodos, nós podemos conseguir uma expansão significativa e uma pureza alta de pilhas de T.

Actualmente, a tecnologia que nós nos usamos é demorada e labor - intensivo e exige pessoais altamente treinados manter um ambiente controlado. Um dos objetivos de CVPF é transformar estes métodos do boutique às tecnologias do grosso da população que podem ser usadas para tratar milhares de pacientes.

Como fazem o antígeno K562 artificial baseado em celulas grânulo-baseado e alterado que apresenta tecnologias (aAPC) da pilha diferem?

Na tecnologia grânulo-baseada, os grânulos são revestidos com os anticorpos que ligam ao t cell e o activam. Estes grânulos são disponíveis no comércio, mas a selecção do antígeno é bastante limitada.

O objetivo é usar sinais stimulatory e co-stimulatory. Especificamente, o sinal stimulatory é fornecido por um anticorpo contra uma proteína no t cell chamado CD3 (anticorpo anti-CD3) e o sinal co-stimulatory é um anticorpo contra a proteína CD28 (anticorpo anti-CD28). A expansão da pilha é muito maior se você estimula both of these sinais, ao contrário apenas de CD3.

Esta apresentação do antígeno grânulo-baseado a uma cultura de célula T refinada é como o processo é iniciado. Então, estes grânulos são removidos usando ímãs (os grânulos têm um núcleo de ferro). Estes grânulos devem ser removidos antes que as pilhas de T estejam infundidas e este for um dos inconvenientes desta tecnologia, porque é bastante um trabalho - procedimento intensivo para os remover.

Quando nós usamos um K562 ou a outra linha celular, que pode expressar o mesmo tipo das moléculas que CD3 e CD28, as pilhas K562 fizeram seu trabalho e eliminado dentro de uma matéria dos dias depois que fornecem a estimulação.

Uma outra vantagem é que são mais customizáveis comparada aos grânulos, que podem os fazer menos caros se usar porque nós podemos produzir o antígeno da em-casa do interesse. Há umas vantagens e umas desvantagens associadas com ambas as tecnologias.

Por que é uma matriz para a estimulação da pilha tão importante?

Uma matriz é importante para a estimulação da pilha porque induz o receptor de superfície queliga, que é crítico para a activação funcional. Estes podem conduzir a um muito de nível elevado da expansão de célula T, às vezes dobra até 100. Alguns estudos igualmente mostraram que a estimulação do anticorpo de pilhas de T sem portadores (em um formulário líquido) é menos eficaz do que com a versão conjugada.

A estimulação das pilhas que usam os grânulos pode fornecer um efeito durável mais longo, embora, como eu mencionei antes, haja alguns inconvenientes associados com ambos os métodos. Há igualmente um interesse sobre a disponibilidade porque os grânulos são bastante caros.

Que nível de expansão das pilhas de T podem estas tecnologias conduzir?

Durante o processo de manufactura, nós vemos regularmente 10 a 40 expansões da dobra de pilhas de T. Em alguns casos, pode ser até uma dobra 100.

Varia do paciente ao paciente e depende da condição das pilhas, a fase da doença e se o paciente tem tido recentemente a quimioterapia ou as outras terapias.

Contudo, em muitos casos, nós queremos expandir pilhas de T de um número relativamente pequeno a diversos biliões, particularmente em malignidades hematológicas tais como CLL e TUDO, onde as pilhas de T representam frequentemente uma porcentagem muito pequena do número total de pilhas nucleated. Nós podemos conseguir a dose necessária usando um ou outro método.

Como você determina a viabilidade das pilhas?

Actualmente, nós estamos usando o azul Trypan que mancham com o hemocytometer e o microscópio ou o cytometry de fluxo. É o método demorado que tem diversos inconvenientes tais como uma falta do vigor e da subjetividade estatísticos das contagens entre usuários.

Nós estamos avaliando actualmente diversos modelos de contadores de pilha automáticos para determinar a viabilidade e nós estamos esperando introduzir logo estes na prática clínica.

Como importante é a medida do volume da pilha em seu protocolo?

Em nosso caso, o Multisizer é um dos dispositivos o mais intensiva usados durante métodos de fabricação da pilha. É nosso cavalo do trabalho.

Nós usamos o Multisizer para obter a informação sobre o volume da pilha e o tamanho de pilha, quando o cytometer do fluxo nos fornecer a informação sobre subconjuntos particulares das pilhas tais como pilhas de T e pilhas de B. Nossa estratégia em relação a como continuar em cada caso, é baseada na informação obtida de ambos os métodos.

O volume é bastante importante para dar-nos a informação sobre o estado da activação da pilha porque uma vez que uma pilha é estimulada, aumenta em tamanho.

6-7 dias após a estimulação, as pilhas tornam-se menores e menos activas uma vez que estão no estado descansado. Nós precisamos conseqüentemente de saber durante os dez dias da cultura, se as pilhas estiveram activadas correctamente e estão no estado descansado para o fim da cultura.

Isto significa a monitoração do volume da pilha e do número da pilha numa base diária durante este período. Considerando o número de culturas que nós realizamos simultaneamente, o Multisizer é muito útil e crítico para nossas necessidades.

Que nível de precisão é exigido?

Nossa facilidade é o PBF complacente, que representa a “boa prática de fabricação”. Para conseguir esta conformidade, um nível elevado de precisão em métodos analíticos é essencial.

Nós igualmente precisamos de poder distinguir subconjuntos da pilha de volumes diferentes, através dos diâmetros entre de pelo menos quatro e 25 mícrons. Esta escala está bem dentro das capacidades do Multisizer que nós nos usamos.

Por favor pode você explicar porque você decidiu usar o contador de relha de Multisizer da relha de Beckman?

Nós já tínhamos usado Multisizer 3 por mais de 10 anos e soubemos seguro e exacto é. É igualmente controle da qualidade amigável e PBF complacente, assim como tem uma boa sensibilidade e uma relação fácil de usar. Recentemente operações expandidas CVPF e agora nós temos diverso Multisizer 4.

Como o contador de relha de Multisizer usa o princípio da relha?

Permite que nós detectem o número da pilha e volume da pilha simultaneamente, muito rapidamente e em um muito de alta resolução, muito sere nossas finalidades monitorar pilhas usando um princípio de um contador de pilha.

Princípio da relha

O contador de relha de Multisizer igualmente usa um processador do pulso de Digitas (DPP), por favor pode você explicar como este impacta a precisão da tecnologia?

Esta tecnologia do DPP permite que nós executem a análise do multi-canal em uma alta resolução e com a precisão realmente alta. A digitalização de alta velocidade do sinal permite-nos de usar parâmetros múltiplos para uma caracterização mais exacta da partícula.

Como fácil de usar é o contador de relha de Multisizer e há uma curva de aprendizagem íngreme?

É relativamente fácil de usar e nosso treinamento para usar o equipamento toma somente uma matéria das horas. Nós temos um padrão específico da prática (SOP) para usar Multisizer em nossa facilidade.

Também, Multisizer de comutação 3 a Multisizer 4 ofereceram diversas vantagens, como não somente podemos nós agora determinar o número de pilhas, mas nós podemos ver o volume de pilhas ao mesmo tempo, que é algo que o Multisizer 3 não poderia oferecer.

O Multisizer é bastante de fácil utilização e tem o software que customizável nós podemos se usar para gerar uma CONCESSÃO particular que possa entregar os parâmetros e as estatísticas mais ou menos imediatamente. Nós conseqüentemente somos satisfeitos bastante com ele.

Em que maneiras podia o contador de relha de Multisizer ser ir melhorado para a frente?

Nós temos as salas múltiplas onde as culturas celulares diferentes são executadas, mas seria bastante caro instalar Multisizer em cada um delas. Nós gostaríamos de ter algo um pouco mais portable instalado em cada um de nossa sala da cultura.

Uma produção alta igualmente seria desejável. Poder analisar amostras múltiplas simultaneamente em um curto período de tempo seria útil porque às vezes nós temos que contar centenas de amostras cada dia.

Que você pensa as posses futuras para tecnologias de célula T da expansão?

O que seria útil é algo referido como “um sistema fechado.” Actualmente, nós precisamos um operador altamente treinado de assegurar um ambiente controlado na sala, mas se nós podíamos criar um sistema fechado que não exigisse a manipulação por um operador, a falha humana seria minimizada e muitas empresas estão trabalhando actualmente para esta.

Além, os sistemas automatizados significariam a diminuição no custo da fabricação, fazendo a tecnologia mais disponível e disponível em uma escala mundial.

Que são os planos de CVPF para o futuro?

Depois de nosso progresso recente em métodos da terapia de pilha e nas descobertas inovadores feitas pelo professor Carl junho na Universidade da Pensilvânia, CVPF tem expandido ràpida ao longo dos últimos dois anos a fim fornecer tratamentos para mais pacientes.

CVPF continua a ser o cubo da ciência básica e da pesquisa clínica. Nós estamos desenvolvendo tratamentos novos para os tipos diferentes do cancro, incluindo tumores contínuos.

Muitos outros laboratórios estão seguindo a mesma tecnologia a nível da pesquisa?

CVPF agora que trabalha muito pròxima com o Novartis na expansão mundial desta tecnologia. Assim estão investindo não somente na Universidade da Pensilvânia, mas construíram uma facilidade em New-jersey onde estão trabalhando na produção em grande escala.

Outros centros conhecidos que trabalham no campo da terapia de pilha são Sloan memorável centro de Kettering em New York e de cancro da DM Anderson, Texas.

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

Mais informação pode igualmente ser encontrada no Web site da relha de Beckman:

O Multisizer da relha de Beckman foi mencionado dentro sobre 50 publicações da análise da pilha, cobrindo pilhas mamíferas, pilhas bacterianas, e análise do nanoparticle.

Sobre Alexander Malykhin, M.Sc.

Alexander MalykhinDesde 2012, Alexander Malykhin foi um supervisor do laboratório do controle da qualidade, uma pilha clínica e uma instalação de produção da vacina, Universidade da Pensilvânia, Philadelphfia, PA, EUA.

Antes disto trabalhou como um cientista da validação, centro de pesquisa do cancro do ovário, Universidade da Pensilvânia, Philadelphfia, PA, EUA.

Desde 2001 até 2008, Alexander era um gerente do laboratório, Immunobiology e o programa de investigação do cancro, fundação de investigação médica de Oklahoma, Oklahoma City, APROVAÇÃO, EUA e antes desta que trabalhou como um analista judicial, departamento da análise judicial do ADN, indica o centro judicial, Minsk, Bielorrússia.

Alexander guardara um diploma de mestre (M.Sc.) na bioquímica/biologia molecular da universidade estadual Belorussian, Minsk, Bielorrússia.

Citations

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    Beckman Coulter Life Sciences - Flow Cytometry. (2020, January 30). Tecnologia de célula T da expansão: uma entrevista com Alexander Malykhin, CVPF, Universidade da Pensilvânia. News-Medical. Retrieved on April 04, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20150505/T-cell-expansion-technology-an-interview-with-Alexander-Malykhin-CVPF-University-of-Pennsylvania.aspx.

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    Beckman Coulter Life Sciences - Flow Cytometry. 2020. Tecnologia de célula T da expansão: uma entrevista com Alexander Malykhin, CVPF, Universidade da Pensilvânia. News-Medical, viewed 04 April 2020, https://www.news-medical.net/news/20150505/T-cell-expansion-technology-an-interview-with-Alexander-Malykhin-CVPF-University-of-Pennsylvania.aspx.