Tecnología de la extensión del linfocito T: una entrevista con Alexander Malykhin, CVPF, Universidad de Pensilvania

Alexander Malykhin
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¿Cómo la terapia del linfocito T trabaja?

Las células de T se toman de la sangre del paciente y después se modifican usando lentivirus, adenovirus o la electroporación del ARN. Las modificaciones permiten que reprogramemos las células de T para reconocer a las células cancerosas.

Cuando se introducen a la carrocería del paciente, las células de T se multiplican rápidamente, buscando y destruyendo a las células cancerosas. Sigue habiendo en la carrocería de largo después de la infusión y continúa las células de T también generalmente el luchar de cualquier nueva célula cancerosa.

El Multisizer es uno de los dispositivos lo más intensivo posible usados durante procedimientos de fabricación de la célula. Es nuestro caballete del trabajo.

 

Multisizer 4

Para más información sobre el Multisizer, visite por favor la cuchilla de Beckman

¿Puede usted dar por favor una introducción a la tecnología de la extensión del linfocito T de la base usada en la instalación de producción clínica de la célula y de la vacuna (CVPF)?

La tecnología de la plataforma de la base en el CVPF es el uso del antígeno artificial que presenta las células (aAPCs) para la extensión de T-células. Esto incluye tecnologías célula-basadas K562 moldura-basadas y modificadas propietarias de CD3/CD28 del aAPC para estimular y para desplegar las células de T.

Ambas matrices - las molduras y las células sólidas del uno mismo-repliegue - ofrecen una señal estimulante y co-estimulante a las T-células, que entonces dividen épocas múltiples. Usando estos métodos, podemos lograr una extensión importante y una pureza elevada de las células de T.

Actualmente, la tecnología que utilizamos es que toma tiempo y necesitanda mucho trabajo y requiere personales altamente entrenados mantener un ambiente controlado. Una de las metas de CVPF es transformar estos métodos del boutique a las tecnologías de la corriente principal que se pueden utilizar para tratar a millares de pacientes.

(aAPC)¿Cómo hacen el antígeno artificial célula-basado K562 moldura-basado y modificado que presenta tecnologías de la célula difirieron?

En la tecnología moldura-basada, las molduras están recubiertas con los anticuerpos que atan al linfocito T y lo activan. Estas molduras son disponibles en el comercio, pero la selección del antígeno es muy limitada.

La meta es utilizar señales estimulantes y co-estimulantes. Específicamente, la señal estimulante es ofrecida por un anticuerpo contra una proteína en el linfocito T llamado CD3 (anticuerpo anti-CD3) y la señal co-estimulante es un anticuerpo contra la proteína CD28 (anticuerpo anti-CD28). La extensión de la célula es mucho mayor si usted estimula ambas señales, en comparación con apenas CD3.

Esta presentación del antígeno moldura-basado a una cultura purificada del linfocito T es cómo se inicia el proceso. Entonces, estas molduras se quitan usando los imanes (las molduras tienen una base de hierro). Estas molduras deben ser quitadas antes de que se infundan las células de T y éste es una de las desventajas de esta tecnología, pues es muy un procedimiento necesitando mucho trabajo para quitarlas.

Cuando utilizamos un K562 o la otra variedad de células, que puede expresar la misma clase de moléculas que CD3 y CD28, las células K562 han hecho su trabajo y eliminado dentro de una cuestión de días después de que ofrezcan el estímulo.

Otra ventaja es que son más adaptables comparadas a las molduras, que pueden hacerlas menos costosas utilizar porque podemos producir el antígeno del interés interno. Hay ventajas y desventajas asociadas a ambas tecnologías.

¿Por qué es una matriz para el estímulo de la célula tan importante?

Una matriz es importante para el estímulo de la célula porque induce la interconexión superficial del receptor, que es crítica para la activación funcional. Éstos pueden dar lugar a un muy de alto nivel de la extensión del linfocito T, a veces hasta cien veces. Algunos estudios también han mostrado que el estímulo del anticuerpo de las células de T sin las ondas portadoras (en una forma líquida) es menos efectivo que con la versión conjugada.

El estímulo de las células usando las molduras puede ofrecer un efecto más duradero, aunque, como mencioné antes, haya algunas desventajas asociadas a ambos métodos. Hay también preocupación por asequibilidad porque las molduras son muy costosas.

¿Qué nivel de extensión de las células de T pueden estas tecnologías dar lugar?

Durante el proceso de fabricación, vemos regularmente 10 a 40 extensiones del doblez de las células de T. En algunos casos, puede estar hasta a cien veces.

Varía de paciente al paciente y depende de la condición de las células, el escenario de la enfermedad y si el paciente ha tenido recientemente la quimioterapia u otras terapias.

Sin embargo, en muchos casos, queremos desplegar las células de T de un número relativamente pequeño a varios mil millones, determinado en malignidades hematológicas tales como CLL y TODO, donde las células de T representan a menudo un porcentaje muy pequeño del número total de células nucleated. Podemos lograr la dosis necesaria usando cualquier método.

¿Cómo usted determina la viabilidad de las células?

Actualmente, estamos utilizando el azul Trypan que mancha con el hemocitómetro y el microscopio o el cytometry de flujo. Es el método que toma tiempo que tiene varias desventajas tales como una falta de robustez y de subjetividad estadísticas de cuentas entre utilizadores.

Estamos evaluando actualmente varios modelos de los contratirantes de célula automáticos para determinar viabilidad y estamos preveyendo introducir éstos en práctica clínica corto.

¿Cómo importante es la medición del volumen de la célula en su protocolo?

En nuestro caso, el Multisizer es uno de los dispositivos lo más intensivo posible usados durante procedimientos de fabricación de la célula. Es nuestro caballete del trabajo.

Utilizamos el Multisizer para obtener la información sobre volumen de la célula y talla de célula, mientras que el cytometer del flujo provee de nosotros la información sobre subconjuntos determinados de células tales como células de T y células de B. Nuestra estrategia con respecto cómo proceder en cada caso, se basa en la información obtenida de ambos métodos.

El volumen es muy importante para darnos la información sobre estado de la activación de la célula porque una vez que se estimula una célula, aumenta de tamaño.

6-7 días después del estímulo, las células llegan a ser más pequeñas y menos activas una vez que están en el estado descansado. Por lo tanto necesitamos saber durante los diez días de cultura, si las células fueron activadas correctamente y están en el estado descansado para el final de la cultura.

Esto significa vigilar el volumen de la célula y el número de la célula sobre una base diaria durante este período. En vista del número de culturas que realicemos simultáneamente, el Multisizer es muy útil y crítico para nuestras necesidades.

¿Qué nivel de exactitud se requiere?

Nuestra instalación es el GMP obediente, que representa “buena práctica de fabricación”. Para lograr esta concordancia, un de alto nivel de la exactitud en métodos analíticos es esencial.

También necesitamos poder distinguir los subconjuntos de la célula de diversos volúmenes, a través de diámetros entre por lo menos de cuatro y 25 micrones. Este alcance está en conformidad con las capacidades del Multisizer que utilizamos.

¿Puede usted explicar por favor porqué usted decidía utilizar el contratirante de cuchilla de Multisizer de la cuchilla de Beckman?

Habíamos utilizado Multisizer 3 por más de 10 años y sabíamos ya seguro y exacto es. Es también control de calidad cómodo y GMP obediente, así como tiene una buena sensibilidad y un interfaz fácil de usar. Recientemente las operaciones desplegadas CVPF y ahora tenemos vario Multisizer 4.

¿Cómo el contratirante de cuchilla de Multisizer utiliza el principio de la cuchilla?

Permite que descubramos número de la célula y volumen de la célula simultáneamente, muy rápidamente y en un muy de alta resolución, mucho se adapta a nuestros propósitos de vigilar las células usando un principio de un contratirante de célula.

Principio de la cuchilla

(DPP)¿El contratirante de cuchilla de Multisizer también utiliza un procesador del pulso de Digitaces, puede usted explicar por favor cómo éste afecta la exactitud de la tecnología?

Esta tecnología del DPP permite que realicemos el análisis de varios canales en una alta resolución y con exactitud realmente alta. La numeración de alta velocidad de la señal nos permite utilizar los parámetros múltiples para una caracterización más exacta de la partícula.

¿Cómo fácil de utilizar es el contratirante de cuchilla de Multisizer y hay una curva de aprendizaje escarpada?

Es relativamente fácil de utilizar y nuestro entrenamiento para utilizar el equipo toma solamente una cuestión de horas. Tenemos un patrón específico de la práctica (SOP) para usar Multisizer en nuestra instalación.

También, Multisizer que cambiaba 3 a Multisizer 4 ofrecieron varias ventajas, como no sólo podemos ahora determinar el número de células, pero podemos ver el volumen de células al mismo tiempo, que es algo que el Multisizer 3 no podría ofrecer.

El Multisizer es muy convivial y tiene software adaptable que podemos utilizar para generar una COMPENSACIÓN determinada que pueda entregar los parámetros y las estadísticas más o menos inmediatamente. Nos por lo tanto satisfacen muy con él.

¿De qué maneras podía el contratirante de cuchilla de Multisizer ser el ir perfeccionado adelante?

Tenemos cuartos múltiples en donde se realizan diversos cultivos celulares, pero sería muy costoso instalar Multisizer en cada uno de ellos. Quisiéramos tener algo un poco más portable instalado en cada uno de nuestro sitio de la cultura.

Una alta producción también sería deseable. El poder analizar muestras múltiples en un corto período de tiempo sería simultáneamente útil porque tenemos que contar a veces centenares de muestras cada día.

¿Qué usted piensa los asimientos futuros para las tecnologías de la extensión del linfocito T?

Cuál sería útil es algo designado un “sistema cerrado.” Actualmente, necesitamos a un operador altamente entrenado asegurar un ambiente controlado en el cuarto, pero si pudiéramos crear un sistema cerrado que no requiere la manipulación de un operador, el desvío humano sería disminuido y muchas compañías están trabajando actualmente hacia esto.

Además, los sistemas automatizados significarían la disminución del costo de fabricación, haciendo la tecnología más asequible y disponible en una escala mundial.

¿Cuáles son los planes de CVPF para el futuro?

Después de nuestro progreso reciente en métodos de la terapia celular y los descubrimientos innovadores hechos por profesor Carl junio en la Universidad de Pensilvania, CVPF se ha estado desplegando rápidamente durante el último par de años para ofrecer los tratamientos para más pacientes.

CVPF continúa ser el cubo de la ciencia básica y de la investigación clínica. Estamos desarrollando los nuevos tratamientos para diversas clases de cáncer, incluyendo tumores sólidos.

¿Muchos otros laboratorios están siguiendo la misma tecnología en el nivel de la investigación?

CVPF ahora que trabaja muy de cerca con Novartis en la extensión mundial de esta tecnología. No sólo están invirtiendo tan en la Universidad de Pensilvania, pero construyeron una instalación en New Jersey en donde están trabajando en la producción en grande.

Otros centros bien conocidos que trabajan en campo de la terapia celular son Sloan conmemorativo Kettering en Nueva York y Doctor en Medicina centro del cáncer de Anderson, Tejas.

¿Dónde pueden los programas de lectura encontrar más información?

Más información se puede también encontrar en el Web site de la cuchilla de Beckman:

El Multisizer de la cuchilla de Beckman se ha mencionado hacia adentro sobre 50 publicaciones del análisis de la célula, revistiendo las células mamíferas, las células bacterianas, y análisis del nanoparticle.

Sobre Alexander Malykhin, M.Sc.

Alexander MalykhinDesde 2012, Alexander Malykhin ha sido supervisor del laboratorio del control de calidad, una célula clínica y una instalación de producción de la vacuna, Universidad de Pensilvania, Philadelphia, PA, los E.E.U.U.

Antes de esto él trabajó como científico de la validación, centro de investigación de cáncer ovárico, Universidad de Pensilvania, Philadelphia, PA, los E.E.U.U.

A partir de 2001 a 2008, Alexander era gerente del laboratorio, Immunobiology y el programa de investigación de cáncer, asiento de investigación médica de Oklahoma, Oklahoma City, AUTORIZACIÓN, los E.E.U.U. y antes de esto que él trabajó como analista forense, departamento del análisis forense de la DNA, declara el centro forense, Minsk, Bielorrusia.

Alexander lleva a cabo un grado del master en ciencias (M.Sc.) en bioquímica/biología molecular de la universidad de estado Belorussian, Minsk, Bielorrusia.

Citations

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    Beckman Coulter Life Sciences - Flow Cytometry. (2020, January 30). Tecnología de la extensión del linfocito T: una entrevista con Alexander Malykhin, CVPF, Universidad de Pensilvania. News-Medical. Retrieved on February 26, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20150505/T-cell-expansion-technology-an-interview-with-Alexander-Malykhin-CVPF-University-of-Pennsylvania.aspx.

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