Linkam mette in scena in uso nella funzione di Wolfson Bioimaging all'università di Bristol come componente della ricerca d'ordinamento endocytic del Dott. Paul Verkade

I leader di mercato nella microscopia a temperatura controllata, strumenti scientifici di Linkam riferiscono sull'uso delle loro fasi a temperatura controllata applicate a CLEM ed a microscopia di fluorescenza ad aiuto nell'ordinamento endocytic nel banco della biochimica all'università di Bristol.

Il CMS196 di Linkam in uso nel laboratorio di Verkade all'università di Bristol: L'immagine superiore mostra un utente che carica la fase mentre quella sul fondo mostra la fase su un microscopio ottico dritto di Leica.

Il Dott. Paul Verkade è un lettore nella rappresentazione delle cellule nel banco della biochimica all'università di Bristol in cui egualmente dirige l'unità di microscopia elettronica della funzione di Wolfson Bioimaging. Il suo fuoco corrente della ricerca è di sviluppare le tecniche e gli strumenti per l'uso di microscopia elettronica leggera correlativa (CLEM) che studia l'ordinamento endocytic. Il Dott. Verkade è corrente presidenza della sezione di microscopia elettronica della società reale di microscopia e presidenza del gruppo di microscopia di Cryo, affiliata alla società reale di microscopia. Egualmente ha organizzato ed insegnato a su parecchi corsi e laboratori sugli oggetti quali il congelamento ad alta pressione, la microscopia elettronica leggera correlativa (CLEM) e l'immuno EM, compreso i corsi pratici dell'EMBO su CLEM.

Esaminando la sua ricerca più dettagliatamente, il Dott. Verkade discute il suo lavoro. “La ricerca nel mio gruppo mette a fuoco sui trattamenti intracellulari di segregazione, particolarmente nel sistema endocytic (per esempio segregazione di riciclaggio del carico a partire da degradante). Per studiare questi trattamenti, usiamo molta microscopia leggera in tensione per seguire questi eventi dinamici. Tuttavia la risoluzione del microscopio ottico è troppo bassa per prevedere determinati aspetti (per esempio riciclando i tubuli della membrana sia circa 50 nanometro di diametro). Così vogliamo catturare le fasi specifiche della rappresentazione in tensione ed analizzare più dettagliatamente quelli nel microscopio elettronico nei cosiddetti esperimenti leggeri correlativi di microscopia elettronica. Ci sono parecchi modi eseguire quegli esperimenti ed utilizziamo le fasi di Linkam in due di quei flussi di lavoro.„

“per conservare l'ultrastruttura nel suo stato indigeno, dobbiamo congelare molto rapido i nostri campioni (per esempio, la fissazione chimica distrugge i tubuli della membrana). Possiamo poi controllare lo stato e la fluorescenza su questi campioni congelati facendo uso del Linkam CMS196 - fase correlativa di microscopia (immagine del campione indicata sotto). Se il campione è GIUSTO, possiamo poi più ulteriormente elaborarlo, usando il cryo TEM o realizzare più spesso l'incassassatura della sostituzione e della resina della gelata. Sarebbe interessante a menzione che Linkam è molto cooperativo nella fabbricazione degli adattamenti speciali, nel nostro caso che modifica il supporto di caricatore 35mm di griglia per accomodare i campioni più spessi che abbiamo acquistato facendo uso del congelamento ad alta pressione, piuttosto che le griglie standard di EM.„

“La seconda fase che di Linkam usiamo è una fase di raffreddamento. Questo è usato per il nostro microscopio “di foto-conversione„, in cui illuminando il nostro campione fluorescente criamo molto molto i radicali dell'ossigeno che possono trasformarsi in un precipitato denso dell'elettrone. Tuttavia splendendo così tanto leggero sul nostro campione lo riscaldiamo pure. Senza il raffreddamento efficiente del campione facendo uso della fase raffreddata ad acqua di Linkam, bruceremmo il nostro campione e letteralmente si fonderebbe/esplode. Di nuovo, questo è uno strumento essenziale nel nostro flusso di lavoro di CLEM.„

Per imparare più circa Linkam ed il loro approccio allo sviluppo di nuove tecniche basate sulle fasi della temperatura per indirizzare le sfide delle applicazioni multiple, visualizzi prego www.linkam.co.uk.

Riferimenti:

  • Olmos, Y.L. Hodgson, J. Mantell, P. Verkade e J.G. Carlton (2015). ESCRT-III gestisce la riforma nucleare della busta. Natura, 522: 236-239
  • Metodi in biologia cellulare, volume 124: Indicatore luminoso e microscopia elettronica correlativi II. compartecipe con Thomas Müller-Reichert.
  • Metodi in biologia cellulare, volume 111: Indicatore luminoso e microscopia elettronica correlativi. Compartecipe con Thomas Müller-Reichert.

Citations

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    Linkam Scientific Instruments. (2019, June 18). Linkam mette in scena in uso nella funzione di Wolfson Bioimaging all'università di Bristol come componente della ricerca d'ordinamento endocytic del Dott. Paul Verkade. News-Medical. Retrieved on April 06, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20151104/Linkam-stages-in-use-in-the-Wolfson-Bioimaging-Facility-at-the-University-of-Bristol-as-part-of-the-endocytic-sorting-research-of-Dr-Paul-Verkade.aspx.

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