Fases de Linkam no uso na facilidade de Wolfson Bioimaging na universidade de Bristol como parte da pesquisa de classificação endocytic do Dr. Paul Verkade

Os lideres do mercado na temperatura controlaram a microscopia, os instrumentos científicos de Linkam relatam no uso de suas fases controladas temperatura aplicadas a CLEM e a microscopia de fluorescência à assistência na classificação endocytic na escola da bioquímica na universidade de Bristol.

O CMS196 de Linkam no uso no laboratório de Verkade na universidade de Bristol: A imagem superior mostra um usuário que carrega a fase quando essa na parte inferior mostrar a fase em um fotomicroscópio ereto de Leica.

O Dr. Paul Verkade é um leitor na imagem lactente da pilha na escola da bioquímica na universidade de Bristol onde igualmente dirige a unidade da microscopia de elétron da facilidade de Wolfson Bioimaging. Seu foco actual da pesquisa é desenvolver técnicas e ferramentas para o uso da microscopia de elétron clara correlativa (CLEM) que estuda a classificação endocytic. O Dr. Verkade é actualmente cadeira da secção da microscopia de elétron da sociedade real da microscopia e cadeira do grupo da microscopia de Cryo, afiliado à sociedade real da microscopia. Igualmente organizou e ensinado em diversos cursos e oficinas em assuntos tais como a congelação de alta pressão, a microscopia de elétron clara correlativa (CLEM), e o EM immuno, incluindo cursos práticos da EMBO em CLEM.

Olhando sua pesquisa com maiores detalhes, o Dr. Verkade discute seu trabalho. “A pesquisa em meu grupo centra-se sobre processos intracelulares da segregação, especialmente no sistema endocytic (por exemplo segregação de recicl a carga longe de degradative). A fim estudar estes processos, nós usamos muita fotomicroscopia viva para seguir estes eventos dinâmicos. Contudo a definição do fotomicroscópio é demasiado baixa visualizar determinados aspectos (por exemplo recicl tubules da membrana seja aproximadamente 50 nanômetro no diâmetro). Assim nós queremos capturar fases específicas da imagem lactente viva e analisar com maiores detalhes aqueles no microscópio de elétron em experiências claras correlativas assim chamadas da microscopia de elétron. Há diversas maneiras de executar aquelas experiências e nós usamos fases de Linkam em dois daqueles trabalhos.”

“A fim preservar o ultrastructure em suas condições nativas, nós temos que congelar nossas amostras muito ràpida (por exemplo, a fixação química destrói os tubules da membrana). Nós podemos então verificar o estado e a fluorescência nestas amostras congeladas usando o Linkam CMS196 - fase correlativa da microscopia (imagem da amostra mostrada abaixo). Se a amostra é APROVADA, nós podemos então mais processá-la, usando o cryo TEM ou mais frequentemente executar o encaixotamento da substituição e da resina do gelo. Seria interessante à menção que Linkam é muito cooperativo em fazer adaptações especiais, em nosso caso que altera o suporte de gaveta da grade para acomodar umas amostras mais grossas que nós adquiríssemos usando a congelação de alta pressão, um pouco do que as grades padrão do EM.”

“A segunda fase que de Linkam nós nos usamos é uma fase refrigerando. Este é usado para nosso microscópio da “foto-conversão”, onde iluminando nossa amostra fluorescente muito pesadamente nós criamos os radicais do oxigênio que podem ser transformados em um elétron denso precipitam. Contudo brilhando tanto claro em nossa amostra nós aquecemo-la também. Sem refrigerar eficiente da amostra usando a fase água-de refrigeração de Linkam, nós queimaríamos nossa amostra e literalmente derreteria/explode. Além disso, esta é uma ferramenta essencial em nossos trabalhos de CLEM.”

Para aprender mais sobre Linkam e sua aproximação à revelação das técnicas novas baseadas em fases da temperatura para endereçar desafios das aplicações múltiplas, visite por favor www.linkam.co.uk.

Referências:

  • Olmos, Y.L. Hodgson, J. Mantell, P. Verkade, e J.G. Carlton (2015). ESCRT-III controla a reforma nuclear do envelope. Natureza, 522: 236-239
  • Métodos na biologia celular, volume 124: Luz e microscopia de elétron correlativas II. compartilhado com o Thomas Müller-Reichert.
  • Métodos na biologia celular, volume 111: Luz e microscopia de elétron correlativas. Compartilhado com o Thomas Müller-Reichert.

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