Aviso: Esta página é uma tradução automática da página original em inglês. Por favor note uma vez que as traduções são geradas por máquinas, não tradução tudo será perfeita. Este site e suas páginas da Web destinam-se a ler em inglês. Qualquer tradução deste site e suas páginas da Web pode ser imprecisas e imprecisos no todo ou em parte. Esta tradução é fornecida como uma conveniência.

Usando o cytometry da decantação centrífuga e de fluxo para responder a perguntas biológicas: uma entrevista com Peter López

Prof. Peter LopezTHOUGHT LEADERS SERIES...insight from the world’s leading experts

Que são as perguntas biológicas principais que você pôde responder com o uso do cytometry de fluxo?

O Cytometry de fluxo, a medida de várias características celulares como correm através de um instrumento de medição, tem tão muitas aplicações que é duro saber onde começar.

Eu fui envolvido com a aplicação de técnicas cytometric do fluxo à pre-selecção do cancro do colo do útero, a purificação de cromossomas individuais do rato, a identificação das pilhas que submetem-se ao apoptosis, a purificação da célula estaminal, o estudo da função do receptor e da biologia de célula T do t-cell, o HIV/AIDS, e as várias aplicações relativas à biologia do cancro.

Como o uso do cytometry de fluxo mudou desde que você começou a trabalhar no campo em 1977?

Os cytometers do fluxo nos anos 70 eram relativamente raros, e exigiam um especialista dedicado operar, manter, e interpretar os dados recolhidos.

O número de medidas que poderiam ser feitas de cada pilha foram limitadas menos do que um punhado. Os instrumentos igualmente analisaram pilhas no que nós consideramos agora ser taxas lentas da produção (por segundo das pilhas <5,000).

Os cytometers do fluxo estabeleceram-se tipicamente em facilidades do recurso compartilhado (núcleos), de modo que muitos laboratórios pudessem tirar proveito da instrumentação e da experiência. Estes instrumentos eram igualmente bastante grandes e caros, assim que o uso do cytometry de fluxo foi limitado a alguns centros académicos.

Hoje nós vemos os cytometers do fluxo que melhoraram vastamente a produção (análise de 70.000 pilhas/em segundo), com a capacidade de recolher mais de 20 parâmetros.

A união do cytometry de fluxo e da espectrometria em massa é uma novidade emocionante permitindo que ainda mais parâmetros sejam analisados do que o cytometry de fluxo tradicional.

A substituição da técnica de rotulagem fluorescente ubíquo usada no cytometry de fluxo com isotipos do metal para etiquetar promessas das pilhas a capacidade para detectar os subconjuntos da pilha resolvidos com 30 ou mais parâmetros, embora esta tecnologia de CyToF impossibilite a classificação da pilha.

Relha de Beckman

Crédito de imagem: Relha de Beckman

Uma outra revelação é a introdução de cytometers menos complexos e fáceis de usar, com o uso considerado agora fora do ajuste académico do núcleo.

Os cytometers do fluxo são vistos agora rotineiramente na indústria farmacêutica, na agricultura e na ciência de planta, na fabricação, na monitoração da qualidade do alimento e de água, na determinação de sexo animal, em monitorar o ambiente marinho, na microbiologia, com uma grande aplicação importante em diagnósticos humanos.

Como a relha de Beckman apoiou seu trabalho?

A instrumentação cytometric do fluxo da relha de Beckman estêve em meu laboratório desde os anos 80 meados de. Tem sido mais recentemente BC muito de suporte de nossos estudos demonstrar os benefícios da integração da decantação centrífuga no laboratório do cytometry de fluxo.

O classificador da pilha de MoFlo CDP em NYULMC flui facilidade do Cytometry. Classificador de alta velocidade da pilha para a coleção de maioria ou a única clonagem da pilha de populações refinadas da pilha.

O classificador da pilha de MoFlo CDP em NYULMC flui facilidade do Cytometry. Classificador de alta velocidade da pilha para a coleção de maioria ou a única clonagem da pilha de populações refinadas da pilha. Crédito de imagem: Relha de Beckman

Que são decantação centrífuga e que são os benefícios comparados a outras técnicas da purificação da pilha?

A decantação centrífuga é uma tecnologia inventada por Charles Lindberg (piloto famoso) nos anos 30, e permite a separação de pilhas de acordo com sua velocidade da sedimentação em uma forma contínua usando um rotor especializado do centrifugador.

Este rotor permite o carregamento das pilhas na câmara de giro do purificador, e permite então a introdução de um amortecedor que opor o sentido da força centrífuga, fraccionando desse modo pilhas.

Isto tem o benefício importante de produzir populações refinadas das pilhas sem a necessidade para quimicamente tratar ou etiquetar pilhas, e pode produzir um grande número pilhas refinadas mais rápidas do que o cytometry de fluxo. A decantação centrífuga é igualmente um procedimento delicado.

Podem os sistemas do purificador ser mantidos estéreis? Por que é esta importante para responder determinadas perguntas biológicas?

Sim, o sistema inteiro da decantação pode ser esterilizado in situ. As amostras da pilha podem ser preparadas, introduzido e recolhido do purificador em um gabinete estéril da seguridade biológica, mantendo a esterilidade da pilha. Isto é importante desde que a purificação das pilhas é frequentemente a primeira etapa em uma série de ensaios biológicos que envolvem a cultura celular.

Um uso bem conhecido da decantação é sincronizar pilhas na mesma fase de ciclo da pilha, e estas pilhas são postas então na cultura celular ou nos outros sistemas onde os efeitos de droga podem ser testados, e a esterilidade é crucial nestes sistemas.

Onde as amostras preprocessed para a eliminação de restos pequenos antes da classificação, todos os procedimentos devem manter a esterilidade da pilha, incluindo a decantação e a classificação da pilha.

Que instrumentos da relha de Beckman você usa em seu laboratório e porque?

Todos os sistemas da relha de Beckman no uso em meu laboratório são os sistemas contínuos do laborioso que nós contamos sobre para a saída consistente diária.

Nós naturalmente usamos centrifugadores da relha de Beckman, a unidade do benchtop de Allegra X-12R e a unidade assoalho-estando de Avanti J-20 que conduz nosso sistema da decantação do contracorrente JE-5.0. Todos estes centrifugadores bem-são construídos, instrumentos estáveis.

Para a viabilidade da pilha e a determinação do tamanho de pilha, nós temos uma relha ViCell de Beckman. O tamanho da viabilidade e de pilha é determinações cruciais antes da decantação e também útil no cytometry de fluxo.

Para a pilha que classifica um de nossos sistemas do laborioso no classificador de alta velocidade da pilha de MoFlo XDP da relha de Beckman. Nós somos em processo de colocar o cytometer do fluxo da cor de CytoFLEX 13 da relha de Beckman nos trabalhos do nosso laboratório.

Como a classificação da pilha do cytometry de fluxo compara à separação magnética do grânulo e à decantação centrífuga?

Cada técnica tem seus pontos fortes e fracos. A purificação da pilha pelo cytometry de fluxo é ímpar em sua capacidade para refinar simultaneamente muitas populações (até 6 populações que usam a relha MoFlo Astrios de Beckman), com a capacidade para caracterizar estas subpopulações para a purificação usando 20 parâmetros ou mais.

Desde que cada pilha individual precisa de ser caracterizada para a análise e a classificação, o cytometry de fluxo tem actualmente de “um limite velocidade”, de modo a um resultado o número de pilhas que podem ser refinadas não estão no mesmo nível que a decantação ou o desespero magnético do grânulo. O nível da pureza alta de pilhas classificadas usando o cytometry de fluxo-- pureza de até 99%-- é igualmente ímpar por outras técnicas.

A separação magnética do grânulo é uma técnica fácil de usar, e é usada em muitos casos antes da pilha cytometric do fluxo que classifica pre-para enriquecer amostras para um tipo desejado da pilha. Quando usado para preprocess amostras antes da pilha que classifica, há um momento - economia, especialmente ao processar um grande número pilhas.

As forças de ambas as tecnologias podem ser fundidas. Pode igualmente ser usada como uma técnica autônoma da purificação, mas pode somente separar as pilhas baseadas em uma característica -- não é um sistema multiparametric.

A decantação centrífuga compartilha de algumas dos mesmos benefícios e fraquezas da separação magnética do grânulo, mas desde a velocidade da sedimentação, que é dominada pelo tamanho de pilha, é o factor discriminador na purificação, ele pode fornecer o enriquecimento das pilhas em várias fases do ciclo de pilha, que não é realizado facilmente usando a separação magnética. Este tipo de aplicação pode ser executado usando a pilha cytometric do fluxo que classifica, embora em uma produção mais lenta.

Uma vantagem muito significativa da decantação centrífuga quando comparada aos métodos cytometric ou magnéticos do fluxo da purificação é que as pilhas para a decantação centrífuga não exigem nenhum tratamento químico ou a etapa de rotulagem. Esta é uma vantagem enorme para sincronizar as populações da pilha onde a inanição do soro ou a obstrução do pilha-ciclo do produto químico não são desejável.

Que limitações ainda precisam de ser superadas?

A decantação centrífuga é uma técnica onde a experiência jogue um papel importante, que faça similar ao cytometry de fluxo no que respeita. Como visto nas tendências actuais para fabricantes do cytometer do fluxo, produzir os sistemas que podem ser usados por indivíduos menos experientes seria benéfica.

Uma outra limitação é a capacidade para processar números pequenos da pilha de menos do que milhão pilhas. Ter especializado sistemas menores da decantação ajudaria a resolver esta limitação.

Que você pensa as posses futuras para o uso do cytometry da decantação centrífuga e de fluxo no contexto de responder perguntas biológicas?

Muito do trabalho publicado com decantação centrífuga mostra que tem a utilização no syncronization das pilhas assim como na purificação de determinadas populações da pilha de uma população começando heterogênea.

Nós demonstramos a capacidade da decantação para reduzir a quantidade de restos pequenos actual em muitas preparações da pilha destinadas para a classificação da pilha. Isto adicionará uma nova aplicação ao repertório da decantação, ser usado como uma etapa do preprocessing antes de classificar da pilha.

As preparações feitas do material preliminar como os tumores separados, usados no estudo de linfócitos da infiltração do tumor podem conter as grandes quantidades de restos pequenos que podem o fazer duro identificar pilhas do interesse e alongar o tempo necessário ao tipo da pilha. Acoplando uma limpeza do preprocessing de amostras resto-carregado san melhore a eficiência a jusante do classificador da pilha.

A remoção de restos pequenos ou do outro material indesejável tem o potencial de fornecer instrumentos de CyTOF uma amostra mais limpa e de melhorar a eficiência nesses trabalhos igualmente. Nós estaremos investigando este nos estudos colaboradores futuros.

Aplicações potenciais do Cytometry de fluxo

Crédito de imagem: Relha de Beckman

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

A melhor única fonte de relativo à informação ao cytometry de fluxo é “Cytometry de fluxo prático”, pelo Dr. Howard Shapiro, agora em sua 4o edição. A relha de Beckman fornece uma relação a esta referência para a visão em linha em seu Web site. http://www.coulterflow.com/bciflow/practical/book/index.html

Sobre Peter López

Peter López foi envolvido no campo do cytometry de fluxo desde 1977 e tem a experiência na gestão do laboratório do recurso compartilhado, na operação do cytometer, na revelação do instrumento, no projecto experimental, e em uma grande variedade de aplicações cytometric.

Peter controlou alto-bem sucedido e o fluxo respeitado cytometric e as facilidades do núcleo da imagem lactente no Fox perseguem o instituto do cancro, Dana-Farber Cancer Institute, o centro de pesquisa do AIDS do diamante de Aaron, e actualmente no centro médico de NYU Langone.

Peter tem a experiência prática com a operação e a pesquisa de defeitos da instrumentação de todos os fabricantes principais do cytometer, assim como a instrumentação experimental do protótipo.

Peter é experimentado com configuração, validação e melhores práticas do laboratório para classificar o material infeccioso. É envolvido na revelação de programa educativo que cobre a teoria e a aplicação cytometric.

Peter foi o presidente de sociedades profissionais regionais tais em MetroFlow (grupo de utilizadores do Cytometry de New York/New-jersey), nos directores regionais do nordeste do núcleo das ciências da vida (NERLSCD), e actualmente está servindo termos como um conselheiro de ISAC assim como está sendo um membro de quadro executivo de ABRF. Peter desempenha serviços nos conselhos consultivos académicos e industriais numerosos.

Os interesses actuais de Peter incluem a redefinição do papel do núcleo do cytometry de fluxo em um modelo distribuído do lugar, adicionando novas tecnologias tais como a decantação centrífuga no catálogo do serviço do núcleo do cytometry de fluxo, assim como em métodos para verificar a reprodutibilidade dos dados e reforçando a posição de laboratórios do núcleo como o centro para a aderência da melhor prática no centro académico.

Ciências da vida da relha de Beckman - Auto-Celulares e ProteomicsSobre a relha de Beckman

Para lugar do escritório da relha de Beckman e números de telefone mundiais, visite por favor “contactam-nos” em www.beckmancoulter.com.

Em meados de 1950 s introduzido, o princípio da relha transformou-se a fundação de uma indústria que responde à necessidade para instrumentos automatizados da contagem de células. A indústria desenvolvida em três actos, como Wallace H. Relha e seu irmão Joseph R. Relha, Jr., desenvolveu a ideia simples de passar pilhas através de uma abertura de detecção.

No acto eu, o desejo de Wallace automatizar a contagem rotineira do eritrócite conduzi a uma ideia simples, à definição do princípio da relha, à sua patente, à sua aceitação pelos institutos de saúde nacionais, e à sua descrição em uma conferência nacional.

No acto II, os irmãos da relha endereçaram as praticabilidade de um instrumento comercial e de uma organização de negócios para apoiar suas fabricação e venda.

No acto III, um esforço de pesquisa largo desenvolvido em relação aos erros volumétricos que originam em características funcionais da abertura de detecção, e a organização crescente dos irmãos' encontraram soluções permitindo a introdução de analisadores cada vez mais automatizados da hematologia. Hoje a indústria prospera, com diversos participantes.

A relha de Beckman oferece uma escala de incluir das ferramentas da caracterização da partícula:

  • Analisadores do tamanho de partícula da difracção do laser
  • RELHA COUNTER® de Multisizer™
  • Analisador do tamanho do potencial do Zeta e de partícula submicrónica
  • Área de superfície e analisador do tamanho do poro

Política satisfeita patrocinada: News-Medical.net publica os artigos e o índice relacionado que podem ser derivados das fontes onde nós temos relacionamentos comerciais existentes, desde que tal índice adiciona o valor aos etos editoriais do núcleo de News-Medical.Net que é educar e informar os visitantes do local interessados na investigação médica, na ciência, em dispositivos médicos e em tratamentos.

Citations

Please use one of the following formats to cite this article in your essay, paper or report:

  • APA

    Beckman Coulter Life Sciences - Centrifugation. (2020, May 14). Usando o cytometry da decantação centrífuga e de fluxo para responder a perguntas biológicas: uma entrevista com Peter López. News-Medical. Retrieved on June 05, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20160127/Using-centrifugal-elutriation-and-flow-cytometry-to-answer-biological-questions-an-interview-with-Peter-Lopez.aspx.

  • MLA

    Beckman Coulter Life Sciences - Centrifugation. "Usando o cytometry da decantação centrífuga e de fluxo para responder a perguntas biológicas: uma entrevista com Peter López". News-Medical. 05 June 2020. <https://www.news-medical.net/news/20160127/Using-centrifugal-elutriation-and-flow-cytometry-to-answer-biological-questions-an-interview-with-Peter-Lopez.aspx>.

  • Chicago

    Beckman Coulter Life Sciences - Centrifugation. "Usando o cytometry da decantação centrífuga e de fluxo para responder a perguntas biológicas: uma entrevista com Peter López". News-Medical. https://www.news-medical.net/news/20160127/Using-centrifugal-elutriation-and-flow-cytometry-to-answer-biological-questions-an-interview-with-Peter-Lopez.aspx. (accessed June 05, 2020).

  • Harvard

    Beckman Coulter Life Sciences - Centrifugation. 2020. Usando o cytometry da decantação centrífuga e de fluxo para responder a perguntas biológicas: uma entrevista com Peter López. News-Medical, viewed 05 June 2020, https://www.news-medical.net/news/20160127/Using-centrifugal-elutriation-and-flow-cytometry-to-answer-biological-questions-an-interview-with-Peter-Lopez.aspx.