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Utilisation du système de préparation du Quorum Cryo-SEM en biologie cellulaire microbienne avec le cryotomography d'électron au Laboratoire de Jensen

Technologies de Quorum, amorces du marché et de technologie dans la couche de microscopie électronique et produits cryogéniques de préparation, état sur la façon dont leur système de préparation de PP3010T CRYO-SEM est utilisé dans la préparation des cellules entières hydratées pour être imagé utilisant le cryotomography d'électron dans le Laboratoire de Jensen situé à HHMI Caltech.

Image des cellules de pombe de Schizosaccharomycètes « de levure de fission » préparées pour TEM - par Vitrobot gelant sur des réseaux de Quantifoil et le transfert du Quorum PP3010T pour le fraisage de BOBARD de FEI Versa.

Alasdair McDowall est le Directeur de Centre de FIN DE SUPPORT dans le Laboratoire de Jensen au Howard Hughes Medical Institute situé à Caltech. Dirigé par Professeur Grant Jensen, le Laboratoire emploie l'Électron Cryotomography (ECT) pour étudier l'architecture moléculaire des cellules microbiennes et du VIH dans leur condition indigène. Le foyer est sur les principes de la biologie cellulaire microbienne tels que la division cellulaire, le mouvement et la sécrétion, ainsi que la structure du VIH à tous les stades de son cycle de vie.

Le laboratoire a ouvert ses trappes en 2002 et continue à pousser les bornes de la représentation de haute résolution aujourd'hui. Cependant, l'enquête sur les cellules entières hydratées gelées (les matériaux sensibles de poutre et d'aspirateur) dans la cavité de microscope électronique exige les solutions neuves. Les avances dans les techniques pour la préparation des cellules par Cryo Ont Orienté le Faisceau D'ions Fraisant pour la caractérisation structurelle ont récent fourni une analyse neuve de ces structures cellulaires fragiles.

L'Image des cellules de pombe de Schizosaccharomycètes « de levure de fission » s'est préparée à TEM - par Vitrobot gelant sur des réseaux de Quantifoil et le transfert du Quorum PP3010T pour le fraisage de BOBARD de FEI Versa.

Cryo A Orienté le Faisceau D'ions Fraisant (BOBARD de cryo fraisant) est une méthode tranchante pour amincir les échantillons biologiques vitrifiés qui permet l'accès aux régions intracellulaires des spécimens épais (> 1 um) avec la facilité sans précédent et la conservation structurelle. Il fournit la capacité de déménager au delà de petites cellules bactériennes de représentation seulement avec le cryotomography d'électron (ECT) et permettra l'exploration des cellules eucaryotes, des tissus et des films biologiques microbiens à la même définition moléculaire que le groupe a réalisée avec différentes cellules bactériennes pour la décennie passée.

De plus, la capacité d'amincir différentes cellules bactériennes avant que la représentation, sans perturber leur structure, fournisse plus contrasté et la définition si nécessaire, même dans les cellules bactériennes déjà minces. En Outre, l'ajout d'un cryo-stade à la fraise existante de BOBARD chez Caltech tiendra compte de l'élaboration ultérieure des méthodes indispensables pour marquer la microscopie à fluorescence et la tomographie d'électron pour la désignation d'objectifs et l'identification des structures particulières profondément dans des cellules eucaryotes, des bactéries et des tissus.

Image des cellules de pombe de Schizosaccharomycètes « de levure de fission » préparées pour TEM - par Vitrobot gelant sur des réseaux de Quantifoil et le transfert du Quorum PP3010T pour le fraisage de BOBARD de FEI Versa.

M. McDowall utilise le système de préparation des échantillons de cryo du Quorum PP3010T. C'est un système hautement robotisé, facile à utiliser, fixé sur colonnes, refroidi à gaz de la préparation Cryo-SEM adapté pour la plupart des marques et modèle de SEM, le FE-SEM et le FIB/SEM. Le groupe de Jensen utilise leur système de préparation avec un microscope électronique de lecture de FEI Versa.

Le Quorum PP3010T est idéal pour nos transferts vitréens de cellules une fois consacré à mettre à jour la condition amorphe cryogénique pendant la préparation de specimens de SEM et de DualBeam. Le PP3010T permet un fonctionnement plus facile et plus pratique pour les spécimens préservés par cryo de fraisage pour la tomographie d'électron. Son design aide l'enquête sur les cellules et les tissus hydratés figés en fournissant un mécanisme pour le transfert hydraté d'échantillon, le refroidissement et le contrôle de température cryogénique dans le SEM ou la Petite Double Poutre pendant le procédé de fraisage. Dans notre fonctionnement, le Quorum PP3010T a été ajouté à un Microscope Électronique existant de Lecture de Double Poutre de FEI Versa dans un accueil de salle de commande du climat du groupe de Greer, Institut de Technologie de la Californie. »

M. McDowall

Pour obtenir les détails complets des systèmes de la préparation Cryo-SEM et d'autres produits fournis par des Technologies de Quorum, visitez s'il vous plaît www.quorumtech.com.

Remerciements : Les Technologies de Quorum remercie le suivant de partager leur recherche : Professeurs Grant Jensen et Julia Greer et Jeu Rouleau-tambour Matt Swuilius, Shrawan Mageswaran et Wei Zhao.