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Uso do sistema da preparação de Cryo-SEM do Quorum na biologia celular microbiana com o cryotomography do elétron no Laboratório de Jensen

Tecnologias do Quorum, líderes do mercado e da tecnologia no revestimento da microscopia de elétron e produtos criogênicos da preparação, relatório em como seu sistema da preparação de PP3010T CRYO-SEM está sendo usado na preparação de pilhas inteiras hidratadas para ser imaged usando o cryotomography do elétron no Laboratório de Jensen situado em HHMI Caltech.

A Imagem da “de pilhas do pombe de Schizosaccharomyces do fermento fissão” preparou-se para TEM - por Vitrobot que congela-se em grades de Quantifoil e em transferência do Quorum PP3010T para a trituração de FEI Versa FIB.

Alasdair McDowall é o Director do Centro do EM no Laboratório de Jensen no Howard Hughes Medical Institute situado em Caltech. Dirigido pelo Professor Grant Jensen, o Laboratório usa o Elétron Cryotomography (ECT) para estudar a arquitetura molecular de pilhas microbianas e de VIH em seu estado nativo. O foco está nos fundamentos da biologia celular microbiana tais como a divisão de pilha, o movimento e a secreção, assim como a estrutura do VIH em todas as fases de seu ciclo de vida.

O laboratório abriu suas portas em 2002 e continua a empurrar hoje os limites da imagem lactente de alta resolução. Contudo, a investigação de pilhas inteiras hidratadas congeladas (materiais sensíveis do feixe e do vácuo) na câmara do microscópio de elétron exige soluções novas. Os avanços nas técnicas para a preparação das pilhas por Cryo Focalizaram o Feixe de Íon que Mmói para a caracterização estrutural têm fornecido recentemente uma introspecção nova destas arquiteturas celulares delicadas.

A Imagem da “de pilhas do pombe de Schizosaccharomyces do fermento fissão” preparou-se para TEM - por Vitrobot que congela-se em grades de Quantifoil e em transferência do Quorum PP3010T para a trituração de FEI Versa FIB.

Cryo Focalizou o Feixe de Íon que mmói (cryo FIB que mmói) é um método pioneiro para diluir amostras biológicas vitrified que permite o acesso às regiões intracelulares de espécimes grossos (> 1 um) com facilidade inaudita e preservação estrutural. Fornece a capacidade para mover-se além das pilhas bacterianas pequenas da imagem lactente somente com cryotomography do elétron (ECT) e permitirá a exploração de pilhas eucarióticas, de tecidos e de biofilms microbianos à mesma definição molecular que o grupo conseguiu com pilhas bacterianas individuais para a década passada.

Além, a capacidade para diluir pilhas bacterianas individuais antes que a imagem lactente, sem molestar sua estrutura, fornecer um contraste mais alto e uma definição quando necessário, mesmo dentro das pilhas bacterianas já finas. Além Disso, a adição de uma cryo-fase à existência MENTE o moinho em Caltech permitirá uma revelação mais adicional de métodos tão necessários para correlacionar a microscopia de fluorescência e o tomografia do elétron para a escolha de objectivos e a identificação de estruturas específicas profundamente dentro das pilhas eucarióticas, das bactérias e dos tecidos.

Imagem da “das pilhas do pombe de Schizosaccharomyces do fermento fissão” preparadas para TEM - por Vitrobot que congela-se em grades de Quantifoil e em transferência do Quorum PP3010T para a trituração de FEI Versa FIB.

O Dr. McDowall usa o sistema da preparação da amostra do cryo do Quorum PP3010T. Este é um sistema altamente automatizado, fácil de usar, coluna-montado, gás-de refrigeração da preparação de Cryo-SEM apropriado para a maioria faz e modela de SEM, de FE-SEM e de FIB/SEM. O grupo de Jensen usa seu sistema da preparação com um microscópio de elétron da exploração de FEI Versa.

O Quorum PP3010T é ideal para nossas transferências vítreos da pilha quando dedicado a manter o estado amorfo criogênico durante SEM e a preparação de espécime de DualBeam. O PP3010T permite uma operação mais fácil e mais prática para espécimes preservados cryo de trituração para o tomografia do elétron. Seu projecto ajuda à investigação de pilhas e de tecidos hidratados congelados fornecendo um mecanismo para transferência hidratada da amostra, o controle criogênico refrigerar e de temperatura dentro de SEM ou o Feixe Duplo Pequeno durante o processo de trituração. Em nossa operação, o Quorum PP3010T foi adicionado a um Microscópio de Elétron existente da Exploração do Feixe Duplo de FEI Versa em uma cortesia da sala de comando do clima do grupo de Greer, Instituto de Tecnologia de Califórnia.”

Dr. McDowall

Para obter detalhes completos de sistemas da preparação de Cryo-SEM e outros produtos disponíveis das Tecnologias do Quorum, visite por favor www.quorumtech.com.

Reconhecimentos: As Tecnologias do Quorum agradecem ao seguinte compartilhando de sua pesquisa: Professores Grant Jensen & Julia Greer e Afastamento Cilindro/rolo Matt Swuilius, Shrawan Mageswaran & Wei Zhao.