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Comptage de cellules bactérien et calibrage utilisant le Multisizer

Dans cette entrevue, M. Rich Jones introduit le comptage de cellules bactérien et un exemple de quand le Multisizer 4e du coutre de Beckman a été employé pour cette application.

Quelles sont les applications principales du comptage de cellules bactérien et du calibrage ?

Deux domaines d'application voyant un saut de pression important pour le multisizer sont dans la recherche environnementale et pour l'optimisation de l'expression de la protéine recombinée dans le laboratoire.

Un exemple de l'ancien est l'année dernière publiée de travail par des chercheurs à l'université d'Aalborg au Danemark. Ils ont utilisé l'instrument de Multisizer 4e pour compter et classer Escherichia coli pathogène et pour étudier la capacité d'une autre Magna environnementale de l'organisme D. de réduire cette tension pathogène d'Escherichia coli dans l'environnement.

Coutre de beckman d

Crédit d'image : Coutre de Beckman

De même, les chercheurs à l'université de Groningue avaient l'habitude le Multisizer pour compter le huxleyi océanique du microbe E. Le huxleyi d'E est un producteur important de dimethylsulfide et l'équipe a employé le MS4e aux titres microbiens normalisés et vérifier par la suite l'influence des niveaux de CO2 sur le gaz (DMS) de dimethylsulfide.

Plus près de la maison, les chercheurs aux études côtières centrent dans Brunswick, J'ont employé le Multisizer pour surveiller l'accroissement de laboratoire du cylindrus de F. Dans ce cas le groupe étudiait l'influence du sel sur la production une SGD (précurseur).

Desserrez auparavant, des concentrations bactériennes ont été type évalués en mesurant la densité optique qui a fourni bien une évaluation brute de concentration. Alternativement, les microbiologistes pourraient avoir exécuté une dilution séquentielle des cultures bactériennes et avoir puis transféré ces derniers aux boîtes de Pétri Afin d'avoir une détermination plus précise des comptages cellulaires. Malheureusement, beaucoup de types microbiens ne sont pas facilement cultivés dans le laboratoire dans des plaques. Les microbes environnementaux souvent vivent dans les communautés et ne peuvent pas être cultivés seuls. En pareil cas, le Multisizer est un sauveteur. Puisqu'il simultanément compte et classe chaque microbe individuel, d'un par un, le chercheur peut suivre l'influence des perturbations environnementales telles que le pH, les gaz, échantillonnant la source, etc. sur le régime de taille et de prolifération des bactéries et avoir une meilleure compréhension de la façon dont ces variables peuvent influencer les communautés microbiennes et l'environnement dans son ensemble.

À cause de la capacité exquise du Multisizer 4e de classer et compter des cellules, elle a été employée par beaucoup de groupes pour optimiser des conditions pour produire les protéines recombinées. Pour que mammifère, l'insecte, ou les cellules de bactéries expriment des montants élevés de protéine qu'ils doivent proliférer, mais ils doivent également se développer et être mis à jour à une taille optimale. Les chercheurs à l'université de Brisbane avaient l'habitude le MS4e pour étudier la relation de la taille de cellules, et la densité avec la production de baculovirus nivelle en cellules d'insecte.

Comment les avances dans la technologie de compteur Coulter ont-elles influencé ces applications ?

Plusieurs tubes d'ouverture de différentes classes de grandeur sont procurables pour l'instrument. Chaque tube d'ouverture peut mesurer des dimensions des particules s'échelonnant de 2 à 80% du diamètre de tube d'ouverture. Par exemple le tube d'ouverture le plus neuf avec un diamètre de 10 microns peut mesurer des particules de .2 micron à 8 microns ; sur l'autre extrémité de la classe de grandeur, les 2000 ouvertures de micron peuvent classer des particules de 40 à 1600 microns.

Pouvez-vous s'il vous plaît donner une synthèse du Multisizer 4e du coutre de Beckman ?

Le Multisizer 4e représente le plus tardif dans une longue suite d'analyseurs de cellules et de particules initialement développés par le coutre de Wallace pendant les années 1940. De même comme dans l'analyseur originel, le MS4e compte des particules utilisant un tube en verre de « ouverture » qui contient un petit orifice par lequel les particules réussissent, nommé une ouverture. De chaque côté de l'orifice sont les électrodes qui appliquent un potentiel électrique. Faute de particules, une impédance inférieure est mesurée en travers de l'orifice. Sur l'application d'un aspirateur, des particules sont tirées par l'orifice d'ouverture qui a comme conséquence les pouls électriques qui sont proportionnels au volume de l'électrolyte déplacé.

L'instrument mesure le volume de particules qui est un fonctionnement cubé du radius. Les petits changements du volume de cellules ont pour cette raison comme conséquence de grands changements de la conductivité électrique. Le MS4e est pour cette raison beaucoup plus sensible que les instruments basés sur image à la taille de cellules de surveillance. Puisqu'il traite le mandant du déplacement de volume, il n'exige pas la souillure des particules. Elles peuvent être invisibles pour s'allumer mais avoir toujours comme conséquence un signe mesurable par l'instrument.

Comment le Multisizer 4e diffère-t-il des versions préalables et est-ce que quel choc ceci a eu sur les applications dans la recherche ?

Le Multisizer 4e offre un grand choix d'améliorations au-dessus de la version préalable connue sous le nom de Multisizer 4. premièrement, le Multisizer 4e a une gamme plus grande, est maintenant offert avec un tube d'ouverture de 10 microns développant la gamme inférieure vers le bas à .2 micron. Ceci a eu comme conséquence une spectaculaire progression dans des applications titering microbiennes et de virus dans le laboratoire de recherche fondamentale ainsi que dans des laboratoires de contrôle qualité.

Pouvez-vous s'il vous plaît expliquer comment le Multisizer était utilisé récemment par Kirkitadze et autres dans un environnement de contrôle de la qualité de biopharma ?

Marina Kirkitadze et ses collègues à Sanofi Pasteur utilisé récemment l'instrument de Mutisizer pour évaluer la régularité de fabrication du bacille de Calmette et de Guerrin (BCG) immunotherapeutic.

Bien qu'ils aient précédemment utilisé un instrument de diffraction de laser pour le contrôle qualité, ils ont constaté que le Multisizer a eu plusieurs avantages importants pour eux.

Sécurité biologique

Le modèle de Multisizer a permis à des échantillons d'être mesurés dans une chambre logée qui a évité le desserrage biohasardeux d'aérosol. Ce contrastait avec leur instrument de diffraction de laser qui ne pouvait pas éviter la production des aérosols et l'exposition potentielle du personnel de qualité au matériau biohasardeux.

Fréquence d'usage et de nettoyage de diluant

Le diluant beaucoup inférieur exigé par Multisizer que leur instrument précédemment utilisé de diffraction de laser et lui ont constaté que moins opérations de nettoyage ont été exigées avec le Multisizer à cause de son utilisation de solution d'électrolyte d'IsotonII qui a évité l'adsorption de leur matériau.

Mesure de comptage de particules et de taille

Contrairement à leur instrument précédemment utilisé de diffraction de laser, le Multisizer pouvait mesurer la dimension particulaire et le compte. Utilisant les 280 et les ouvertures de 1000 microns, l'équipe pouvait surveiller la classe de grandeur appropriée de leurs particules. Utilisant le Multisizer le groupe pouvait évaluer la distribution de grandeurs de BCG de plusieurs sorts de production (exprimés comme d10, d50, et d90) ainsi que la concentration.  La multidispersion s'est analysée en travers de 20 un bon nombre de matériau. Le groupe a qualifié l'instrument pour supporter des études de comparabilité. Elles ont des régimes pour utiliser l'instrument pour évaluer le choc de la modification de processus sur des attributs de qualité des produits.

En résumé, c'était un signaler élégant que sécurité améliorée décrite, plus grande productivité, et contrôle plus grand du procédé de production qui a été eu les moyens par les avantages de l'instrument de Multisizer.

Quel contrôle par retour de l'information avez-vous reçu des usagers de Multisizer ?

Au cours des derniers mois, j'ai parlé avec des douzaines d'usagers de Multisizer. Plusieurs thèmes courants ont apparu des conversations. Le Multisizer est dans une ligue de ses propres moyens quand il s'agit d'applications qui exigent le compte ou le calibrage de haute résolution des particules dans les 200 nanomètre - classe de grandeur de 1600 microns. Le Multisizer est employé souvent pour étalonner ou vérifier la taille et/ou la particule comptant l'exactitude d'autres instruments tels que le cytometery de flux, la diffraction de laser, la dispersion de la lumière ou l'exclusion HPLCs de taille.

À une de mes visites récentes à un constructeur des nécessaires diagnostiques employant la résine de gel, le directeur de qualité a indiqué que le multisizer avait enrégistré à sa compagnie environ 10 millions de dollars. Une vérification de qualité avec le multisizer a indiqué les changements subtile de la distribution de grandeurs des talons de gel d'un fournisseur. Ce changement de distribution a déclenché une enquête qui a indiqué un changement de procédé par leur fournisseur. A eu l'usager vérifiant la distribution de grandeurs de leurs talons avec le multisizer, la qualité de leurs nécessaires aurait été dans le péril et dépister la source des changements du rendement de nécessaire aurait été beaucoup plus pénible, et coûteux.

De quelles voies le Multisizer diffère-t-il d'autres produits sur le marché ?

Puisque les instruments de Multisizer utilisent le principe de coutre (également connu sous le nom de zone de détection électrique), ils fournissent une vue des particules qui est orthogonale à beaucoup d'autres méthodes lumière lumière et à un niveau ajouté d'atténuation de risque pour le contrôle qualité des procédés et des produits. Le Multisizer n'exige pas le marquage des particules, et ne se fonde pas sur les propriétés d'indice de réfraction des particules. Pour finir, le Multisizer simultanément compte et classe chaque particule, un par un dans l'échantillon, et la fait très rapidement. À la différence des approches d'ensemble telles que DLS et diffraction de laser, les instruments de Multisizer peuvent trouver les particules uniques de massif détaché dans toute la gamme d'analyse granulométrique d'une expérience.

Que pensez-vous les futures prises pour le comptage de cellules bactérien ?

Pendant que plus de scientifiques, de techniciens, et de personnel de qualité se rendent compte des avantages du Multisizer 4e et sa gamme étendue, j'envisage l'extension spectaculaire dans les endroits suivants.

  1. Contrôle qualité de produit de processus et bactérien pour la fabrication vaccinique ;
  2. Recherche de processus pour l'optimisation de l'expression de la protéine recombinée ;
  3. Analyse de recherche fondamentale des communautés microbiennes ;
  4. Recherche environnementale ;
  5. Recherche des procédés de purification d'eau comprenant l'analyse des procédés de filtration ;

Quelle est la visibilité du coutre de Beckman pour le comptage de cellules et les quels avances sont dans le pipeline ?

Pendant plus de 80 années de coutre de Beckman a été au premier rang du comptage de cellules et de l'innovation cellulaire d'analyse. Aujourd'hui la recherche cellulaire continue à augmenter à un rythme furieux et nous sommes entrés dans l'ère du bureau d'études de cellules pour la production des médicaments et des traitements cellulaires pour la demande de règlement des maladies. Le coutre de Beckman est commis à fournir à nos propriétaires les outils novateurs pour répondre à leurs besoins cellulaires d'analyse en fournissant les technologies, les réponses et les solutions qu'ils recherchent.

Où peuvent les lecteurs trouver plus d'informations ?

https://www.beckman.com/cell-counters-and-analyzers/multisizer-4e

Au sujet de M. Jones

M. Richard Johns

M. Jones a un intérêt de longue date pour le développement et l'application des technologies robotisées d'analyse de protéine et des flux de travail pour interroger des systèmes de protéine en biologie humaine et pharmacologie. Il a sur 20 ans d'expérience dans le domaine de la biotechnologie de protéine et de cellules.

Tandis qu'un professeur adjoint dans le Ben peut service pour la cancérologie à l'Université de Chicago, M. Jones a développé des choix micro-occidentaux pour étudier les réactions des cellules cancéreuses à la thérapeutique et pour comprendre les mécanismes chimiothérapeutiques de résistance. En plus d'être un professeur adjoint, il était un camarade de faisceau et un membre fondateur de l'institut pour la génomique et la biologie de systèmes et était fondateur et directeur de l'installation Micro-occidentale de faisceau d'analyse de protéine de choix d'Université de Chicago.

Il s'est exercé à l'Université de Harvard comme recherche post-doctorale honorifique de Kirchstein et le camarade d'enseignement où il a participé au développement de la puce ADN de protéine s'approche pour tracer les réseaux humains d'interaction de protéines dans le cancer du sein.

Citations

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    Beckman Coulter Life Sciences - Particle Counting and Characterization. (2020, May 06). Comptage de cellules bactérien et calibrage utilisant le Multisizer. News-Medical. Retrieved on September 26, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20170315/Bacterial-cell-counting-and-sizing-using-the-Multisizer.aspx.

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