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Contagem de células e cola bacterianas usando o Multisizer

Nesta entrevista, o Dr. Rico Jones introduz a contagem de células bacteriana e um exemplo de quando o Multisizer 4e da relha de Beckman foi usado para esta aplicação.

Que são as aplicações principais da contagem de células e da cola bacterianas?

Duas áreas de aplicação que consideram um impulso principal para o multisizer são na pesquisa ambiental e para a optimização da expressão de recombinação da proteína no laboratório.

Um exemplo do anterior é trabalho publicado no ano passado por pesquisadores na universidade de Alborgue em Dinamarca. Usaram o instrumento de Multisizer 4e para contar e fazer sob medida Escherichia Coli patogénico e para estudar a capacidade de uns outros magnum ambientais do organismo D. para reduzir esta tensão patogénico de Escherichia Coli no ambiente.

Relha do beckman do instrumento de Multisizer 4e

Crédito de imagem: Relha de Beckman

Similarmente, os pesquisadores na universidade de Groningen usaram o Multisizer para contar o huxleyi oceânico do micróbio E. O huxleyi de E é um produtor importante do dimethylsulfide e a equipe usou o MS4e aos titers microbianos estandardizados e para investigar subseqüentemente a influência de níveis do CO2 no gás (DMS) do dimethylsulfide.

Mais perto da HOME, os pesquisadores nos estudos litorais centram-se em Brunsvique, MIM usaram o Multisizer para monitorar o crescimento do laboratório do cylindrus do F. Neste caso o grupo estudava a influência do sal na produção um DMS (precursor).

Suporte nos velhos tempos, concentrações bacterianas foram avaliados tipicamente medindo a densidade óptica que forneceu bastante uma avaliação bruta da concentração. Alternativamente, os microbiologista puderam ter executado uma diluição de série de culturas bacterianas e então ter transferido estes aos pratos de Petri a fim ter uma determinação mais exacta de contagens de pilha. Infelizmente, muitos tipos microbianos não são cultivados facilmente no laboratório nas placas. Os micróbios ambientais frequentemente vivem nas comunidades e não podem ser cultivados sós. Nesses casos, o Multisizer é uma salva-vidas. Porque simultaneamente conta e faz sob medida cada micróbio individual, de um a um, o pesquisador pode seguir a influência de perturbação ambientais tais como o pH, os gáss, provando a fonte, etc. na taxa do tamanho e da proliferação de bactérias e ter uma compreensão melhor de como estas variáveis podem influenciar as comunidades microbianas e o ambiente no conjunto.

Devido à capacidade excelente do Multisizer 4e para fazer sob medida e contar pilhas, foi usada por muitos grupos para aperfeiçoar condições para produzir proteínas de recombinação. Para que mamífero, o insecto, ou as pilhas das bactérias expressem quantidades altas de proteína que devem proliferar, mas devem igualmente crescer e ser mantidas em um tamanho óptimo. Os pesquisadores na universidade de Brisbane usaram o MS4e para estudar o relacionamento do tamanho de pilha, e a densidade com produção do baculovirus nivela em pilhas do insecto.

Como os avanços na tecnologia do contador de relha impactaram estas aplicações?

Diversas câmaras de ar da abertura de escalas diferentes do tamanho estão disponíveis para o instrumento. Cada câmara de ar da abertura pode medir as dimensão das partículas que variam de 2 a 80% do diâmetro da câmara de ar da abertura. Por exemplo a câmara de ar a mais nova da abertura com um diâmetro de 10 mícrons pode medir partículas de .2 mícron a 8 mícrons; na outra extremidade da escala do tamanho, as 2000 aberturas do mícron podem fazer sob medida partículas de 40 a 1600 mícrons.

Pode você por favor dar uma vista geral do Multisizer 4e da relha de Beckman?

O Multisizer 4e representa o mais atrasado em uma série longa de analisadores da pilha e da partícula desenvolvidos originalmente pela relha de Wallace nos anos 40. Similarmente como no analisador original, o MS4e conta partículas usando uma câmara de ar de vidro da “abertura” que contenha um orifício pequeno através de que as partículas passam, denominado uma abertura. Em cada lado do orifício são os eléctrodos que aplicam um potencial elétrico. Na ausência das partículas, uma baixa impedância é medida através do orifício. Em cima da aplicação de um vácuo, as partículas são puxadas através do orifício da abertura que conduz aos pulsos elétricos que são proporcionais ao volume de eletrólito deslocado.

O instrumento mede o volume da partícula que é uma função cubada do raio. As pequenas alterações no volume da pilha conduzem conseqüentemente às grandes mudanças na condutibilidade elétrica. O MS4e é conseqüentemente muito mais sensível do que instrumentos imagem-baseados no tamanho de pilha da monitoração. Porque opera sobre o principal do deslocamento do volume, não exige a mancha das partículas. Podem ser invisíveis iluminar-se mas conduzir ainda a um sinal mensurável pelo instrumento.

Como o Multisizer 4e difere das versões anteriores e que impacto este teve nas aplicações na pesquisa?

O Multisizer 4e oferece uma variedade de melhorias sobre a versão anterior conhecida como o Multisizer 4. em primeiro lugar, o Multisizer 4e tem a maior escala, é oferecido agora com uma câmara de ar da abertura de 10 mícrons que estende a escala mais baixa para baixo a .2 mícron. Isto conduziu a um aumento acentuado em aplicações titering microbianas e do vírus no laboratório de investigação básica assim como em laboratórios do controle da qualidade.

Pode você por favor explicar como o Multisizer foi usado recentemente por Kirkitadze e outros em um ambiente do QC do biopharma?

O porto Kirkitadze e seus colegas em Sanofi Pasteur usaram recentemente o instrumento de Mutisizer para avaliar a consistência da fabricação do bacilo de Calmette e de Guerrin (BCG) immunotherapeutic.

Embora usassem previamente um instrumento da difracção do laser para finalidades do controle da qualidade, encontraram que o Multisizer teve diversas vantagens importantes para elas.

Seguridade biológica

O projecto de Multisizer permitiu que as amostras fossem medidas em uma câmara limitada que impedisse a liberação biohazardous do aerossol. Isto era em contraste com seu instrumento da difracção do laser que não podia impedir a produção de aerossóis e a exposição potencial de pessoais da qualidade ao material biohazardous.

Freqüência do uso e da limpeza do diluente

O diluente muito mais baixo exigido Multisizer do que seu instrumento previamente usado da difracção do laser e encontraram que menos etapas da limpeza estiveram exigidas com o Multisizer devido a seu uso da solução do eletrólito de IsotonII que impediu a adsorção de seu material.

Medida da contagem e do tamanho de partícula

Em contraste com seu instrumento previamente usado da difracção do laser, o Multisizer podia medir o tamanho e a contagem de partícula. Usando os 280 e as aberturas de 1000 mícrons, a equipe podia monitorar a escala relevante do tamanho de suas partículas. Usando o Multisizer o grupo podia avaliar a distribuição de tamanho de BCG de diversos lotes da produção (expressados como o d10, o d50, e o d90) assim como a concentração.  A polidispersidade foi analisada através de 20 lotes do material. O grupo qualificou o instrumento para apoiar estudos da comparabilidade. Têm os planos para usar o instrumento para avaliar o impacto da mudança do processo em atributos da qualidade de produto.

Em resumo, este era um relatório elegante que segurança aumentada descrita, produtividade aumentada, e maior controle do processo de produção que foi tido recursos para pelas vantagens do instrumento de Multisizer.

Que feedback você recebeu dos usuários de Multisizer?

Sobre o passado diversos meses, eu falei com as dúzias de usuários de Multisizer. Diversos temas comuns emergiram das conversações. O Multisizer está em uma liga do seus próprios quando se trata das aplicações que exigem a contagem ou a cola de alta resolução das partículas nos 200 nanômetro - escala de um tamanho de 1600 mícrons. O Multisizer é usado frequentemente calibrar ou verificar o tamanho e/ou a partícula que contam a precisão de outros instrumentos tais como o cytometery do fluxo, a difracção do laser, a dispersão de luz ou a exclusão HPLCs do tamanho.

Em uma de minhas visitas recentes a um fabricante de jogos diagnósticos que emprega a resina do gel, o director da qualidade indicou que o multisizer salvar sua empresa aproximadamente 10 milhão dólares. Uma verificação da qualidade com o multisizer revelou mudanças subtis na distribuição de tamanho de grânulos do gel de um fornecedor. Esta mudança na distribuição provocou uma investigação que revelasse uma mudança no processo por seu fornecedor. Teve o usuário que verifica a distribuição de cola de seus grânulos com o multisizer, a qualidade de seus jogos estaria no perigo e seguir para baixo a fonte das mudanças no desempenho do jogo seria muito mais fastidioso, e caro.

Em que maneiras o Multisizer difere de outros produtos no mercado?

Porque os instrumentos de Multisizer empregam o princípio da relha (igualmente conhecida como a zona de detecção elétrica), fornecem uma ideia das partículas que seja ortogonal a muita outro métodos luz-baseados e um nível adicionado de mitigação do risco para o controle da qualidade dos processos e dos produtos. O Multisizer não exige a rotulagem das partículas, e não confia nas propriedades do R.I. das partículas. Última, o Multisizer simultaneamente conta e faz sob medida cada partícula, um de cada vez dentro da amostra, e fá-la muito rapidamente. Ao contrário das aproximações do conjunto tais como DLS e difracção do laser, os instrumentos de Multisizer podem detectar únicas partículas do outlier durante todo a escala da análise de tamanho de uma experiência.

Que você pensa as posses futuras para a contagem de células bacteriana?

Enquanto mais cientistas, coordenadores, e pessoais da qualidade se tornam cientes das vantagens do Multisizer 4e e sua escala prolongada, eu prever a expansão dramática nas seguintes áreas.

  1. Controle da qualidade do processo e do produto bacteriano para a fabricação vacinal;
  2. Pesquisa de processo para a optimização da expressão de recombinação da proteína;
  3. Análise da investigação básica das comunidades microbianas;
  4. Pesquisa ambiental;
  5. A pesquisa da purificação de água processa incluir a análise de processos de filtração;

Que são a visão da relha de Beckman para a contagem de células e os que avanços estão no encanamento?

Por mais de 80 anos de relha de Beckman estêve no pelotão da frente da contagem de células e da inovação celular da análise. Hoje a pesquisa celular continua a expandir em um ritmo furioso e nós incorporamos a era da engenharia da pilha para a produção de drogas e de terapias baseados em celulas para o tratamento das doenças. A relha de Beckman é comprometida a fornecer nossos clientes as ferramentas inovativas para encontrar suas necessidades celulares da análise entregando as tecnologias, as respostas e as soluções que procuram.

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

https://www.beckman.com/cell-counters-and-analyzers/multisizer-4e

Sobre o Dr. Jones

Dr. Richard Johns

O Dr. Jones tem um interesse de longa data na revelação e na aplicação de tecnologias automatizadas da análise da proteína e trabalhos para interrogar sistemas da proteína na biologia humana e na farmacologia. Tem sobre 20 anos de experiência no campo da biotecnologia da proteína e da pilha.

Quando um professor adjunto no Ben puder departamento para a investigação do cancro na Universidade de Chicago, o Dr. Jones desenvolveu disposições micro-ocidentais para estudar as respostas das células cancerosas à terapêutica e para compreender mecanismos quimioterapêuticos da resistência. Além do que ser um professor adjunto, era um companheiro do núcleo e um membro fundador do instituto para a genómica e a biologia de sistemas e era fundador e director da facilidade Micro-ocidental do núcleo da análise da proteína da disposição da Universidade de Chicago.

Treinou na Universidade de Harvard como uma pesquisa pos-doctoral honorário de Kirchstein e o companheiro de ensino onde participou na revelação do microarray da proteína aproxima-se traçando redes humanas da interacção da proteína no cancro da mama.

Citations

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    Beckman Coulter Life Sciences - Particle Counting and Characterization. (2020, May 06). Contagem de células e cola bacterianas usando o Multisizer. News-Medical. Retrieved on September 21, 2020 from https://www.news-medical.net/news/20170315/Bacterial-cell-counting-and-sizing-using-the-Multisizer.aspx.

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