I ricercatori di CNIO ottimizzano il nuovo sistema capace della generazione del modello cellulare del sarcoma di Ewing

Un gruppo dal Centro Nazionale Spagnolo di Ricerca Sul Cancro (CNIO) ha ottimizzato un sistema capace della generazione del modello cellulare del sarcoma di Ewing. La tecnica, in base a CRISPR e descritto nelle pagine dei Rapporti della Cellula Staminale, permette generare i modelli cellulari per analizzare i meccanismi che sono alla base dell'origine e della progressione questa e di altre malattie come pure la ricerca di nuovi trattamenti.

CRISPR, la tecnica modificante genomica famosa, non solo servisce a fare maturare le malattie, anche per ricrearle nei modelli cellulari per studiare gli eventi molecolari che li provocano. Questi modelli sono cruciali da studiare le nuove vie diagnostiche e terapeutiche. Nel documento pubblicato nei Rapporti della Cellula Staminale del giornale, gli autori presentano uno sviluppo tecnologico significativo capace della ricreazione del sarcoma di Ewing in cellule staminali umane adulte ed embrionali.

“L'idea è di avere un sistema che ci permette di generare un modello che è accurato come possibile a che cosa sta accadendo in un tumore,„ ha detto Sandra Rodríguez Perales, dalla Citogenetica Molecolare e l'Unità Genomica di Assistenza Tecnica e la guida del progetto di ricerca.

In questo modo, con un modello che riproduce le origini della malattia, sarà possibile analizzare i meccanismi di fondo e la base molecolare di ogni patologia. Nel caso del sarcoma di Ewing, il grilletto della malattia è uno spostamento fra i cromosomi 11 e 22, che provoca la fusione di due geni, con conseguente nuovo oncogene.

Gli autori già avevano usato CRISPR per indurre questa alterazione e per generare un modello di questa malattia, ma avevano incontrato un a basso livello di efficacia e di altre difficoltà metodologiche nell'applicazione della tecnica alle cellule staminali umane. “Quando stavamo lavorando con le linee cellulari, tutto è andato uniformemente, ma quando la abbiamo applicata alle cellule staminali, abbiamo trovato molti problemi,„ spieghiamo Raúl Torres Ruiz, co-author del documento.

Per migliorare i risultati e per raffinare la tecnica, hanno confrontato tre strategie per generare questo spostamento nella maggior parte del modo efficace possibile facendo uso di CRISPR. Dopo parecchi esperimenti, hanno notato quello combinando l'uso di un complesso della ribonucleoproteina sgRNA-Cas9 generato in laboratorio (invece di un'espressione del plasmide) e di un DNA “graffetta„ - una breve sequenza che collega le estremità di due cromosomi che rompe il sistema di CRISPR e quindi facilita lo spostamento? l'indice di successo aumentato fino a da un multiplo di sette. Ciò suggerisce, secondo gli autori, che siamo affrontati “ad uno strumento solido per indurre gli spostamenti mirati a„.

Tutti I miglioramenti applicati durante lo studio hanno permesso agli autori di generare questo modello in cellule staminali pluripotent incitate (iPSC), che hanno potenziale enorme da un punto di vista scientifico, poiché costituiscono un modello cellulare ideale per lo studio sullo sviluppo di varie patologie, fra loro le fasi iniziali dei trattamenti oncogeni. Tutto questo permetterà lo studio sulla base meccanicistica delle patologie quale il sarcoma di Ewing.

Inoltre, può non solo essere utile per questo sarcoma, è egualmente “un'approssimazione valida per altre patologie,„ ha detto Rodríguez Perales. “Questa strategia - gli autori concludono faciliteranno la creazione dei modelli del cancro dalle cellule staminali umane e dal genoma accurato che modificano per cercare le nuove droghe o le terapie cellulari, così accelerando l'avanzamento dal laboratorio alla clinica.„

Sorgente: http://www.cnio.es/ing/publicaciones/a-protein-a-molecular-staple-and-crispr-to-generate-an-ewing-sarcoma-model