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I ricercatori mettono a punto il nuovo metodo per rapido l'ordinamento dei virus del HIV

I ricercatori a EMBL, a ESPCI Parigi ed all'iniziativa vaccino dell'AIDS dell'internazionale hanno sviluppato una nuova tecnica per rapido l'ordinamento dei virus del HIV, in grado di piombo allo sviluppo più rapido di un vaccino per il HIV, come riferiscono nella biologia del prodotto chimico delle cellule.

La tecnica permetterà agli scienziati di identificare le funzionalità specifiche nelle proteine sulla superficie del virus che sono riconosciute dal sistema immunitario e di suscitare una risposta simile a quella veduta nei regolatori dell'elite - pazienti che possono sopravvivere a senza trattamento antivirale.

Intorno 1% dei pazienti con il HIV - conosciuto come i regolatori dell'elite - possono sopravvivere a senza trattamento antivirale, perché i loro sistemi immunitari producono determinati generi di anticorpi HIV-specifici: proteine che riconoscono le funzionalità sulla superficie del virus e legano a loro, rendenti il virus inattivo. La sfida nello sviluppare un vaccino del HIV è di identificare le funzionalità specifiche nelle proteine sulla superficie del virus che sono riconosciute dal sistema immunitario e di suscitare una risposta simile a quella veduta nei regolatori dell'elite.

Una tecnica ampiamente usata per lo studio delle proteine sulle superfici delle celle - che a volte egualmente è usato con i virus - è l'ordinamento fluorescenza-attivato delle cellule (FACS). Prelevate un campione delle celle ed aggiungete gli anticorpi fluorescenti che legano alle proteine che di superficie siete interessato dentro. Le celle con le proteine che sono riconosciute dagli anticorpi diventeranno fluorescenti, mentre le celle che mancano di tali proteine non non. Potete poi misurare determinato la fluorescenza di ogni cella, inviante le celle fluorescenti in un contenitore per ulteriore studio e le celle non fluorescenti in un altro. Ciò funziona bene per lo studio delle celle, a cui abbia centinaia di proteine di superficie affinchè gli anticorpi leghino, producendo un forte segnale della fluorescenza. FACS può anche essere usato per ordinare i grandi virus quale il virus di Ebola, ma per lo studio dei virus più piccoli con meno proteine di superficie - come il HIV - FACS non è abbastanza sensibile. Ora i ricercatori a EMBL, a ESPCI Parigi ed all'iniziativa vaccino dell'AIDS dell'internazionale hanno sviluppato una nuova tecnica per rapido l'ordinamento dei virus del HIV, in grado di piombo allo sviluppo più rapido di un vaccino per il HIV, come riferiscono nella biologia del prodotto chimico delle cellule. Lo studio Christoph Merten autore spiega.

Che cosa avete fatto?

Abbiamo messo a punto un sistema che permette noi di analizzare ed al HIV di ordinamento ad un tasso delle centinaia di virus al secondo, separante i virus secondo come o le non loro proteine di superficie hanno funzionalità riconosciute dagli anticorpi specifici. Invece di usando gli anticorpi fluorescenti che avrebbero legato direttamente alle proteine virali - producendo soltanto un segnale debole - abbiamo catturato gli anticorpi ordinari e non fluorescenti e li abbiamo fissati ad un enzima chiamato fosfatasi alcalina (AP). Poi abbiamo unito determinato i virus nelle goccioline di liquido, con un prodotto chimico che diventa fluorescente una volta agito sopra dal AP. Gli anticorpi legano alle proteine virali e gli enzimi fissati di AP producono molte molecole fluorescenti che rimangono dentro la gocciolina liquida, creanti un forte segnale della fluorescenza. Se le proteine del virus non hanno il diritto le funzionalità, gli anticorpi con i loro enzimi di AP non legheranno e nessuna fluorescenza è prodotta. Possiamo quindi studiare i diversi virus, ordinante li con alta precisione secondo come mostrano le funzionalità che potrebbero essere sfruttate nello sviluppare un vaccino contro il HIV.

Nostri sono un sistema microfluidic - cioè usa la tecnologia progettata per la manipolazione delle quantità di liquido estremamente piccole. L'intero sistema è contenuto “su un chip„ microfluidic - un'unità palma di taglia che consiste delle reti microscopiche dei canali affinchè il liquido attraversi. Questi canali sono appena alcuni centesimi di un millimetro attraverso ed ogni gocciolina nei nostri esperimenti è intorno 30 billionths di un millilitro. I chip di Microfluidic offrono i vantaggi particolari quando lavora con gli agenti patogeni gradiscono il HIV, poiché completamente sono sigillati e quindi molto sicuro di usare. I sistemi tipici di FACS possono produrre le goccioline disperse nell'aria, così tanto le misure più rigorose di contenimento sono richieste quando lavora con i batteri ed i virus nocivi.

Perché importa?

Il nostro metodo permette analizzare ed i virus del HIV di ordinamento nelle quantità ed alle velocità che non sono state possibili prima. Ciò ci permette di verificare rapido milioni di varianti virali, che dovrebbero accelerare significativamente il trattamento di sviluppo del vaccino.

Nei nostri esperimenti, ogni gocciolina ha contenuto un virus e gli anticorpi, ma dovrebbe anche essere possibile da aggiungere una cella alla gocciolina e da studiare se gli anticorpi possono fermare il virus dall'entrare nella cella. Quello non è possibile con FACS, in modo da apre molte possibilità per la ricerca futura.

Sorgente: https://news.embl.de/science/1705-sorting-out-hiv/