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Os pesquisadores desenvolvem o método novo para ràpida classificar vírus do VIH

Os pesquisadores em EMBL, em ESPCI Paris, e na iniciativa vacinal do AIDS internacional desenvolveram uma técnica nova para ràpida classificar os vírus do VIH, que poderiam conduzir a uma revelação mais rápida de uma vacina para o VIH, como relatam na biologia do produto químico da pilha.

A técnica permitirá cientistas de identificar características específicas nas proteínas na superfície do vírus que são reconhecidas pelo sistema imunitário e de induzir uma resposta similar àquela considerada em controladores da elite - os pacientes que podem sobreviver sem tratamento antiviroso.

Ao redor 1% dos pacientes com o VIH - conhecido como controladores da elite - podem sobreviver sem tratamento antiviroso, porque seus sistemas imunitários produzem determinados tipos de anticorpos VIH-específicos: proteínas que reconhecem características na superfície do vírus e lhes ligam, fazendo o vírus inactivo. O desafio em desenvolver uma vacina do VIH é identificar características específicas nas proteínas na superfície do vírus que são reconhecidas pelo sistema imunitário e induzir uma resposta similar àquela considerada em controladores da elite.

Uma técnica amplamente utilizada para estudar proteínas nas superfícies das pilhas - que é usado às vezes igualmente com vírus - é classificação fluorescência-ativada da pilha (FACS). Você toma uma amostra de pilhas e adiciona os anticorpos fluorescentes que ligam às proteínas que de superfície você está interessado dentro. As pilhas com proteínas que são reconhecidas pelos anticorpos tornar-se-ão fluorescentes, quando as pilhas que faltam tais proteínas não. Você pode então medir a fluorescência de cada pilha individualmente, enviando as pilhas fluorescentes em um recipiente para um estudo mais adicional, e as pilhas não-fluorescentes em outro. Isto trabalha bem estudando as pilhas, a que tenha centenas das proteínas de superfície para que os anticorpos liguem, produzindo um sinal forte da fluorescência. FACS pode igualmente ser usado para classificar grandes vírus tais como o vírus de Ebola, mas para estudar vírus menores com menos proteínas de superfície - como o VIH - FACS não é sensível bastante. Agora os pesquisadores em EMBL, em ESPCI Paris, e na iniciativa vacinal do AIDS internacional desenvolveram uma técnica nova para ràpida classificar os vírus do VIH, que poderiam conduzir a uma revelação mais rápida de uma vacina para o VIH, como relatam na biologia do produto químico da pilha. O estudo Christoph Merten autor explica.

Que você fez?

Nós desenvolvemos um sistema que permitisse nos de analisar e o tipo VIH a uma taxa das centenas de por segundo dos vírus, separando os vírus conforme o que ou não suas proteínas de superfície têm as características reconhecidas por anticorpos específicos. Em vez de usar os anticorpos fluorescentes que ligariam directamente às proteínas virais - produzindo somente um sinal fraco - nós tomamos os anticorpos ordinários, não-fluorescentes e anexamo-los a uma enzima chamada fosfatase alcalina (AP). Nós encerramos então os vírus individualmente nas gotas do líquido, junto com um produto químico que se tornasse fluorescente quando actuado sobre pelo AP. Os anticorpos ligam às proteínas virais, e as enzimas anexadas do AP produzem muitas moléculas fluorescentes que permanecem dentro da gota líquida, criando um sinal forte da fluorescência. Se as proteínas do vírus não têm as características direitas, os anticorpos com suas enzimas do AP não ligarão e nenhuma fluorescência é produzida. Nós podemos conseqüentemente estudar os vírus individuais, classificando os com precisão alta conforme o que mostram as características que poderiam ser exploradas em desenvolver uma vacina contra o VIH.

Nossos são um sistema microfluidic - ou seja usa a tecnologia projetada manipulando quantidades extremamente pequenas de líquido. O sistema inteiro é contido em uma “microplaqueta microfluidic” - um dispositivo palma-feito sob medida que consiste em redes microscópicas dos canais para que o líquido corra através. Estes canais são apenas alguns centésimo de um milímetro transversalmente, e cada gota em nossas experiências é ao redor 30 billionths de um mililitro. As microplaquetas de Microfluidic oferecem vantagens particulares ao trabalhar com micróbios patogénicos gostam do VIH, desde que são seladas completamente e conseqüentemente muito seguro se usar. Os sistemas típicos de FACS podem produzir gotas transportadas por via aérea, umas medidas mais estritas da retenção são exigidas tanto ao trabalhar com bactérias e os vírus prejudiciais.

Por que importa?

Nosso método torna a possíveis analisar e vírus do tipo VIH nas quantidades e nas velocidades que não foram possíveis antes. Isto permite-nos de testar ràpida milhões de variações virais, que devem significativamente acelerar o processo de revelação vacinal.

Em nossas experiências, cada gota conteve um vírus e anticorpos, mas deve igualmente ser possível adicionar uma pilha à gota e estudá-la se os anticorpos podem parar o vírus de incorporar a pilha. Isso não é possível com FACS, assim que abre muitas possibilidades para a pesquisa futura.

Source: https://news.embl.de/science/1705-sorting-out-hiv/