Het Zien van het volledige beeld, analyse in real time van levend-cellen

insights from industryKimberly WicklundDirector of Product ManagementEssen Bioscience

Een gesprek met Kimberley Wicklund, dat door James Ives, MPsych wordt geleid

De Cellen, en de celinteractie zijn uiterst complex en hoogst dynamisch. Gelieve te geven een overzicht van de uitdagingen die onderzoekers onder ogen zien wanneer het analyseren van deze complexe systemen.

Uw eerste zin raakte op een zeer belangrijke uitdaging: dynamica. Elke cel is een miniatuurfabriek die in grondstof (extracellulaire signalen) neemt en het verwerkt om iets (een biologische reactie) te veroorzaken. Maar in tegenstelling tot een fabriek die gemakkelijk kan worden geknepen om bij evenwichtstoestand te lopen en het zelfde van van dag tot dag te kijken, zijn de cellen dynamisch.

Als u cellen gebruikt om reacties te onderzoeken, hoe weet u wanneer de reactie gebeurt? Wat als u het mist? Het Weten van wat uw cellen doen en wanneer zij het doen is een zeer belangrijke uitdaging. Een Andere uitdaging is fysiologische relevantie. Als u cellenvariëteiten of primaire celculturen bekijkt, wordt de grote pijn genomen om hen in een verenigbaar milieu te houden.

maar anderzijds worden zij genomen in en uit hun gelukkige huizen die op analytische instrumenten worden moeten gepord en worden gepord. Hoe beïnvloeden deze veranderingen in milieu cellulaire gezondheid en functie? Aangezien wij naar complexere of gevoelige modellen vorderen, is handhaven van milieu verenigbare voorwaarden niet alleen belangrijk voor het houden van de cellen levend, maar ook voor het handhaven van relevantie voor het originele biologische systeem en voor het verzekeren van reproduceerbaarheid van uw experiment.

Een Andere uitdaging in het handhaven van fysiologische relevantie doet zich voor wanneer wij reagentia gebruiken om biologische veranderingen van belang te ontdekken. De Meeste reagentia verstoren de eigenlijke biologie wij onderzoeken. Het is belangrijk om te overwegen hoe de reagentia de celgezondheid en morfologie alvorens hen met levende cellen beïnvloeden te gebruiken.

IncuCyte mengde HD-Fase contrat/fluorescentiebeeld (10x) van een gemengde stabiele bevolking van ht-1080 Groene NucLight en A549 de Rode cellen van NucLight.

Tot onlangs wat is gebruikt als goudstandaard in analytische methodes van celbiologie?

Voor celbiologie, sluit analytische methodes hebben geïmpliceerd instrumenten zoals microscopen, stroomcytometers of plaatlezers die samen met colorimetrische of fluorescente reagentia aan hulp in opsporing van de biologie van belang worden gebruikt.

De Ontwikkeling van fluorescente proteïnen, natuurlijk, is een zeer belangrijke vordering voor het uitvoeren van celanalyse geweest. Deze proteïnen kunnen constitutief zonder significante verstoring aan normaal celgedrag worden uitgedrukt en levend-celweergave echt toegelaten.

Gelieve te geven een overzicht van Incucyte S3 en zijn eigenschappen.

IncuCyte® S3 is het enige van de levend-celweergave en analyse systeem in real time dat vangen en automatisch beelden de wijzer rond van levende cellen, voor dagen, weken analyseren, of maanden, terwijl de cellen binnen een standaardincubator van de weefselcultuur ongestoord blijven.

IncuCyte heeft een uniek, compact en mobiel optisch ontwerp dat cellen om door het experiment stationair toestaat te blijven, dat voor niet adherente of gevoelige celtypes zoals immune cellen of neuronen essentieel is. Onze benadering wordt toepassing-geconcentreerd en de cel gezondheid-geconcentreerd.

Via een onlangs bijgewerkt gebruikersinterface, bereikt IncuCyte „en gebruiks“ gang-omhoog status voor levend-celweergave en analyse. Plus, bereikt IncuCyte dit bij schaal. Een nieuwe gebruiker kan 96 leiden - en 384 experimenteren goed in een kwestie van minuten, en leiden dan tot films en het grafisch voorstellen van metriek die publicatie en presentatie-klaar met enkel een paar kliks zijn.

Ik herinner nog mijn eerste dag in Essen waar Ik leerde hoe te om 96 te doen kras goed gekronkeld analyse gebruikend IncuCyte en onze Woundmaker.  Het nam neen meer dan een half uur van hands-on tijd aan zaad, tot 96 krassen leidt, microplate in IncuCyte, en opstelling de software om zette te verwerven en automatisch te analyseren.

De Grafieken begonnen bouw analyse onmiddellijk, echt in real time. Toen wij eindigden, zei Ik „dat het???“ Is. Dat was het, en zeer toegankelijk eenvoudig, en zeer zeer krachtig.

Naast het verbeteren van productiviteit voor de individuele gebruiker, machtigt IncuCyte S3 een volledig onderzoeksteam. De Veelvoudige gebruikers kunnen veelvoudige toepassingen in werking stellen die op IncuCyte tegelijkertijd, tijd beschikbaar besteed wachten voor een instrument verminderen om te zijn. Bovendien zijn de gegevens toegankelijk ver voor om het even welke gebruiker via onbeperkte, vrije genetwerkte vergunningen.

Met nieuwe IncuCyte S3, kunnen de onderzoekers nieuwe experimenten bedenken niet eerder gedacht mogelijk. Zij hebben nu toegang tot levend-celanalyse in real time die niet alleen nieuw inzicht, maar ook productie en een gestroomlijnde gebruikerservaring aanbiedt.

Gelieve te geven een overzicht van het belang van `' levend-celweergave en analyse in real time? Waarom is het zo belangrijk om levend-celsteekproeven eerder dan het gebruiken van te houden procedures die de cellen als deel van het experimentele werkschema vernietigen?

Eerder dan één enkele momentopname, verzekert de ononderbroken analyse u nooit een kritieke reactie of een interactie mist. Voorts verstrekken de kinetische, op beeld-gebaseerde metingen meer fysiologisch relevante gegevens en dieper, zinvoller inzicht in actieve biologische processen en cellulaire functie die niet met conventionele eindpuntanalyses kunnen worden bereikt.

Om aan een inzicht in een time-dependent reactie met eindpuntanalyses te krijgen, vereist het opstelling van veelvoudige analyses en aaneenschakeling van de gegevens om een beeld samen te brengen van wat gebeurde. Dat is tijdrovend en duur, en u hebt geen capaciteit uw steekproeven verder om te analyseren zodra u de analyse hebt geleid.

Voorts als uw technologie niet op beeld-gebaseerd is, zult u om het even welke tendensen kunnen visueel bevestigen of geen uitlopers beoordelen. Met weergave en analyse die in real time niet-verstoort reagentia gebruiken, kan elk goed of het schip in tijd worden geanalyseerd om reacties afhankelijk van de concentratie te openbaren of cel-specifieke die met beelden en films kunnen worden bevestigd en besluitvorming in real time toelaten.

U hebt ook het voordeel dat uw cellen niet tijdens het experimentele proces worden vernietigd, en kunt worden gekenmerkt verder gebruikend andere technologieën zoals cytometry stroom.

Ongeacht het inzicht bereikt u het gebruiken van ononderbroken levend-celweergave en de analyse, u kan ook om het even welke uitlopers snel beoordelen, aangezien u het zaaien dichtheid en de morfologie van uw cellen bij het begin van het experiment kunt evalueren en helemaal. Het kwaliteitsbeheersing aspect van het uitvoeren van levend-celanalyse kan niet worden overzien.

Welke toepassingen kan wanneer het gebruiken van Incucyte S3 worden bestudeerd? Zijn er beperkingen of beperkingen?

IncuCyte S3 is compatibel met een brede waaier van cultuurschepen en toepassingen. Het S3 Systeem IncuCyte kan voor cel controle en toezicht in real time, het analyseren celgezondheid en uitvoerbaarheid, migratie en invasie, plus een brede waaier van phenotypic op cel-gebaseerde analyses worden gebruikt.

IncuCyte kiest een benadering op basis van de bevolking van celanalyse. Als u in het onderzoeken van subcellular structurele details met een levend-celbenadering geinteresseerd bent, adviseren wij eerst gebruikend IncuCyte om uw cellen te kenmerken en variabelen te onderzoeken op het bevolkingsniveau, en volgen dan met een hogere resolutietechniek op zoals confocal microscopie.

IncuCyte heeft een snel het groeien inzameling van meer dan 1.000 peer review artikelen, en de nieuwe toepassingen die IncuCyte gebruiken worden onophoudelijk gepubliceerd.

Waarom is het belangrijk uw cellen binnen de incubator, met weergave binnen apparatuur verlaten kunnen? Welke voordelen zijn er aan deze methode?

Één dag, jaren geleden, liep één van onze stichters rond het laboratorium en nam wetenschappers waar lopend afwisselend aan de incubator, nemend cellen en brengend hen aan een instrument om worden gecontroleerd.

Hij vroeg „u de cellen als dat denkt? Niet zou het beter zijn als u uw cellen kon zien terwijl zij binnen de incubator?“ zitten Dat is het begin van het verhaal IncuCyte en een perfect voorbeeld van „ontwerp denkend“ - neem de gebruiker in hun natuurlijk milieu waar en los een probleem met innovatie op.

De incubator van de weefselcultuur is een hoogst op vertrouwd en nauwkeurig stuk van apparatuur dat een groot volume van gas bij een aangewezen mengsel, een temperatuur en een vochtigheid houdt. Het heeft ontworpen om cellen levend te houden.

Door IncuCyte binnen de incubator te zetten, wij hefboomwerking die op milieu vertrouwde. Natuurlijk, zijn er instrumenten die ingebouwde milieucontrole of randtoebehoren hebben, maar de nauwkeurige regelgeving van wezenlijk kleinere volumes van gasmengsels kan hinderlijk en moeilijk zijn.

Hoe automatiseert de van de beeldverwerking en analyse hulp van het softwarewerk experimentele analyse? Welke toepassingen zijn er voor deze geautomatiseerde analysesoftware?

Ik heb een wezenlijk gedeelte van mijn carrière besteed die diverse van de beeldverwerking en analyse softwareplatforms leren en wetenschappers begeleiden aan hun gebruik. Vele softwareplatforms kiezen een benadering „van de hulpmiddeldoos“.

Met een traditioneel weergavesysteem, moet Ik maatregelen eerst treffen om de beelden en de correcte artefacten van het weergaveapparaat en het verlichtingssysteem te kalibreren, dan correcte artefacten van de steekproef zelf, dan te berekenen hoe te om mijn eigenschappen van belang met een verblindende serie van de filters van de beeldverwerking te voorschijn te halen, en tenslotte, Ik door een assortiment van te analyseren metriek werk….één enkel beeld.

Om deze procedure te herhalen, bouw Ik een manuscript of hopelijk is er één of ander menu van het partijproces. Het is hinderlijk, om het zachtjes uit te drukken, en Ik probeer constant om precies te herinneren welke maatregelen Ik trof en waar mijn beelden zijn.

IncuCyte biedt verscheidene voordelen aan. Eerst, heeft het instrument een kaliberbepalingsproces dat artefacten automatisch verbetert. Ten Tweede, stelt de softwareinterface slechts de hulpmiddelen voor u voor de dichtbije taak wenst.

Leid dieper inzicht met levend-celanalyse in real time af. (a) verwerf Automatisch beelden in tijd, (b) gebruik IncuCyte® VesselView om beelden van alle plaatsen in het schip meteen te bekijken en snel experimentele resultaten te beoordelen, plus gezoem op beelden van belang (c) identificeer binnen automatisch gebieden van belang via maskers (d) produceren presentatie-klaar timelapsegrafieken, en (e) alle mening de 96 - of 384 goed kinetische tendensen meteen met IncuCyte® PlateGraph en de uitvoergegevens om EC50 te berekenen of IC50 reactiewaarden.

Als u een analyse doet van de celproliferatie die rode vlekken van kernproteïne telt, stellen wij u voor de hulpmiddelen om rode vlekken te tellen. Als de analyse complexer is, als het analyseren van neurite uitloper, geven wij u de hulpmiddelen eveneens doen dat. Ten Derde, wordt de analyse automatisch toegepast op uw volledig experiment, alle tijdpunten en alle putten.

De Gebruikers kunnen aan opstelling een verwerkingsdefinitie één keer gebruikend een representatief experiment, en passen dan die week na week, maand na maand met een klik van een knoop toe. Het Laatst, maar het zekerst in het bijzonder, worden alle beelden en analyses keurig opgeslagen samen in een searchable gegevensbestand.

Wat kan door de celmorfologie en celbewegingen tijdens studies waar te nemen worden bereikt?

Waarnemend verstrekken de veranderingen in de celmorfologie en beweging inzicht in vele normale en pathologische processen met inbegrip van immune reactie en tumormetastase. De capaciteit om deze veranderingen fysiologisch relevante voorwaarden kinetisch en in te bestuderen is toepasselijk op het begrip van de gevolgen van drugbehandelingen en verdere cellulaire reactie, die u toestaan om precies aan te wijzen wanneer deze veranderingen zich voordoen.

De Visuele beoordeling van de celmorfologie en de beweging, niet alleen verifiëren uiteindelijk de kwantitatieve gegevens, maar staan voor extra phenotypic informatie toe om cel-specifieke en time-dependent biologische activiteit te profileren.

Wat houdt de toekomst voor S3 technologie IncuCyte? Hoe deze de verdere hulponderzoekers experimenten in de toekomst zullen leiden?

Wij hebben vooruit sommige opwindende ontwikkelingen. Terwijl Ik niet teveel detail kan geven, beoordelen wij actief complexere modellen zoals sferoïden en ook iPSC-afgeleide cellen, zoals neuronen. Wij duwen altijd naar meer fysiologische relevantie en dieper inzicht in functie. Zorg ervoor om ons op Facebook en Linkedin te volgen om met onze activiteiten bijgewerkt te houden!

Waar kunnen de lezers meer informatie vinden?

Gelieve te bezoeken onze website in www.incucyte.com.

Ongeveer Kimberley Wicklund

Kimberly Wicklund bracht een decennium door werkend met de hardware en de software van de onderzoekmicroscopie voorafgaand aan zich het aansluiten van bij Essen in 2015. Zij begon met haar carrière in de instrumentatie van de het levenswetenschap als toepassingenwetenschapper en technische steunmanager alvorens in productbeheer te landen.

Zij heeft een aantal weergavesystemen, apparaten, en softwareplatforms aan de markt gelanceerd en als verkopersfaculteit bij vele de microscopiecursussen bij het Gat van het Hout, de Koude Haven van de Lente, gediend en Opzet de Biologische Laboratoria van het Eiland van de Woestijn.

Zij verkreeg haar Doctoraat in chemische techniek bij de Universiteit van Californië-Berkeley en bestudeerde de celmetabolisme van borstkanker in hypoxic voorwaarden, zodat heeft zij lang het belang van fysiologisch relevante milieu's gewaardeerd. Zij is nu de Directeur van het Beheer van het Product bij de Biologische Wetenschap van Essen, een bedrijf Sartorius en het leven in Ann Arbor, Michigan.