Voir l'image entière, analyse en temps réel des sous tension-cellules

insights from industryKimberly WicklundDirector of Product ManagementEssen Bioscience

Une entrevue avec Kimberley Wicklund, conduit par James Ives, MPsych

Les Cellules, et les interactions cellulaires sont extrêmement complexes et hautement dynamiques. Veuillez donner une synthèse des défis faisant face à des chercheurs en analysant ces systèmes complexes.

Votre premier coup de jugement sur un défi principal : dynamique. Chaque cellule est une usine miniature rentrant la matière première (signes extracellulaires) et la traitant pour produire quelque chose (une réaction biologique). Mais à la différence d'une usine qui peut être facilement tordue pour faire fonctionner à équilibré et pour examiner la même chose au jour le jour, les cellules sont dynamiques.

Si vous utilisez des cellules pour vérifier des réactions, comment savez-vous quand la réaction se produit ? Ce Qui si vous le manquez ? Sachant ce que vos cellules font et quand elles font c'est un défi principal. Un Autre défi est pertinence physiologique. Si vous regardez des lignées cellulaires ou des cultures cellulaires primaires, la douleur grande est prise pour les maintenir dans un environnement cohérent.

mais d'autre part elles sont rentrées et hors de leurs maisons heureuses à pousser et être poussées doucement sur les instruments analytiques. Comment ces changements d'environnement affectent-ils la santé cellulaire et le fonctionnement ? Car nous progressons vers des modèles plus complexes ou plus sensibles, la mise à jour des conditions environnementales cohérentes est non seulement importante pour maintenir les cellules vivantes, mais également pour la pertinence de mise à jour avec le système biologique initial et pour assurer la reproductibilité de votre expérience.

Un Autre défi en mettant à jour la pertinence physiologique surgit quand nous employons des réactifs pour trouver les modifications biologiques d'intérêt. La Plupart Des réactifs perturbent la biologie même que nous vérifions. Il est important de considérer comment les réactifs affectent la santé et la morphologie de cellules avant de les utiliser avec les cellules vivantes.

IncuCyte a mélangé le contrat de HD-phase/image de fluorescence (10x) d'une population stable mélangée des cellules Rouges de Vert et d'A549 NucLight de HT-1080 NucLight.

Jusque récemment qu'a été utilisé comme étalon-or dans les méthodes analytiques de la biologie cellulaire ?

Pour la biologie cellulaire, les méthodes analytiques principales ont concerné des instruments tels que des microscopes, circulent des cytometers ou plaquent des lecteurs utilisés conjointement avec les réactifs colorimétriques ou fluorescents pour faciliter le dépistage de la biologie d'intérêt.

Le Développement des protéines fluorescentes, naturellement, a été un avancement principal pour exécuter l'analyse de cellules. Ces protéines peuvent être constitutivement exprimées sans interruption significative au comportement normal de cellules et avoir vraiment activé la représentation de sous tension-cellule.

Veuillez donner une synthèse de l'Incucyte S3 et ses caractéristiques techniques.

L'IncuCyte® S3 est le seul système en temps réel de représentation et d'analyse de sous tension-cellule qu'automatiquement les captures et analyse des images des cellules vivantes vingt-quatre heures sur vingt-quatre, pour des jours, des semaines, ou des mois, alors que les cellules demeurent calmes à l'intérieur d'un incubateur normal de culture de tissu.

L'IncuCyte a un seul, compact et mobile design optique qui permet à des cellules de rester stationnaires dans toute l'expérience, qui est essentielle pour les types non-adhérents ou sensibles de cellules tels que des cellules immunitaires ou des neurones. Notre élan application-est orienté et la cellule santé-est orientée.

Par L'intermédiaire d'une interface utilisateur récent actualisée, l'IncuCyte réalise le mode de « immeuble sans ascenseur et d'utilisation » pour la représentation et l'analyse de sous tension-cellule. Le Plus, l'IncuCyte réalise ceci à l'échelle. Un utilisateur neuf peut conduire 96 - et 384 bonnes expériences dans quelques minutes, et puis produit des films et la métrique de graphique qui sont publication et exposé-disponible avec juste quelques claquements.

Je me rappelle toujours mon premier jour à Essen où J'ai appris comment faire une analyse de blessure de brouillon de 96 puits utilisant l'IncuCyte et notre Woundmaker.  Elle n'a pris pas plus qu'une demie heure d'heure à commande manuelle d'injecter, produit 96 brouillons, a mis le microplate dans l'IncuCyte, et a installé le logiciel pour saisir et analyser automatiquement.

Les Graphiques ont commencé à établir immédiatement, analyse véritablement en temps réel. Quand nous avons terminé, J'ai dit que « Est que ce ? ? ? ». C'était lui, très simple et accessible, et très très puissant.

En plus d'améliorer la productivité pour l'utilisateur individuel, l'IncuCyte S3 autorise une équipe de recherche entière. Les Multiples utilisateurs peuvent faire fonctionner des applications multiples sur l'IncuCyte en parallèle, réduisant le temps passé attendant un instrument pour être disponibles. De plus, les données sont accessibles à distance à n'importe quel utilisateur par l'intermédiaire des plaques d'immatriculation en réseau illimitées et libres.

Avec l'IncuCyte S3 neuf, les chercheurs peuvent concevoir des expériences neuves ont pas précédemment pensé possible. Ils ont maintenant accès à l'analyse en temps réel de sous tension-cellule qui offre non seulement des analyses neuves, mais également au débit et à une expérience utilisateur profilée.

Veuillez donner une synthèse d'importance représentation en temps réel et analyse de sous tension-cellule de ` de la' ? Pourquoi est-il si important de maintenir des échantillons de sous tension-cellule plutôt que suivant les procédures qui détruisent les cellules en tant qu'élément du flux de travail expérimental ?

Plutôt qu'un instantané unique, l'analyse continue s'assure que vous ne manquez jamais une réaction ou une interaction critique. En Outre, les mesures cinétiques et image-basées fournissent les données plus physiologique appropriées et les analyses plus profondes et plus signicatives dans des procédés biologiques actifs et la fonction cellulaire qui ne peuvent pas être réalisées avec des analyses conventionnelles de point final.

Pour obtenir à une compréhension d'une réaction dépendant du temps avec des analyses de point final, il exige de l'installation des analyses multiples et de la concaténation des données de remonter une illustration de ce qui s'est produit. C'est long et cher, et vous n'avez aucune capacité d'analyser davantage vos échantillons une fois que vous avez conduit l'analyse.

En Outre, si votre technologie n'est pas image-basée, vous ne pourrez pas ne valider visuellement aucune tendance ou évaluer des massifs détachés. Avec la représentation en temps réel et l'analyse utilisant les réactifs non-troublants, chacun puits ou le récipient peut s'analyser au fil du temps pour indiquer les réactions dépendant de la concentration ou cellule-particulières qui peuvent être validées avec des images et des films et activer la prise de décision en temps réel.

Vous avez également l'avantage que vos cellules ne sont pas détruites pendant le procédé expérimental, et pouvez être caractérisé davantage utilisant d'autres technologies telles que la cytométrie de flux.

Hormis l'analyse vous gagnez utilisant la représentation continue de sous tension-cellule et analyse, vous pouvez rapidement également évaluer tous les massifs détachés, comme vous pouvez évaluer injecter la densité et la morphologie de vos cellules au début de l'expérience et partout. L'aspect de contrôle qualité d'exécuter l'analyse de sous tension-cellule ne peut pas être négligé.

Quelles applications peuvent être étudiées en utilisant l'Incucyte S3 ? Y A-t-il des limitations ou les restrictions ?

L'IncuCyte S3 est compatible avec un large éventail de récipients et d'applications de culture. Le Système d'IncuCyte S3 peut être utilisé pour la surveillance en temps réel et le contrôle de cellules, la santé et la viabilité de analyse de cellules, le transfert et l'invasion, plus un large éventail d'analyses cellulaires phénotypiques.

L'IncuCyte adopte un élan basé sur la population à l'analyse de cellules. Si vous êtes intéressé à vérifier les petits groupes structurels sous-cellulaires avec un élan de sous tension-cellule, nous recommandons d'employer d'abord l'IncuCyte pour caractériser vos cellules et pour vérifier des variables au niveau de population, et puis continuons avec une technique plus de haute résolution telle que la microscopie confocale.

L'IncuCyte a une collection rapidement croissante de plus de 1.000 articles révisés par pairs, et des applications neuves utilisant l'IncuCyte sont publiées continuellement.

Pourquoi est-il important de pouvoir laisser vos cellules dans l'incubateur, avec le matériel de représentation à l'intérieur ? Quels avantages y a-t-il à cette méthode ?

Pendant Un jour, il y a années, un de nos fondateurs marchait autour du laboratoire et observait des scientifiques marcher dans les deux sens à l'incubateur, sortir des cellules et les amener à un instrument être contrôlé.

Il avez-vous demandé « Pensez-vous les cellules comme cela ? Il ne serait pas meilleur si vous pourriez voir vos cellules tandis qu'elles s'asseyent à l'intérieur de l'incubateur ? » C'est le début de l'histoire d'IncuCyte et d'un parfait exemple du « design pensant » - observez l'utilisateur dans leur environnement naturel et résolvez un problème avec l'innovation.

L'incubateur de culture de tissu est un appareil fortement de confiance et précis qui maintient un de large volume du gaz à un mélange, à une température et à une humidité appropriés. Il a conçu pour maintenir des cellules vivantes.

En mettant l'IncuCyte à l'intérieur de l'incubateur, nous influençons cet environnement de confiance. Naturellement, il y a des instruments qui ont le contrôle de l'environnement intrinsèque ou les accessoires ajoutés, mais le règlement précis des volumes sensiblement plus petits de mélanges de gaz peut être encombrant et difficile.

Comment l'aide de travail à traitement d'images et d'analyse de logiciel automatise-elle l'analyse expérimentale ? Quelles applications y a-t-il pour ce logiciel d'analyse robotisé ?

J'ai dépensé une partie substantielle de ma carrière apprenant les plates-formes logiciel variées à traitement d'images et d'analyse et guidant des scientifiques en leur usage. Beaucoup de plates-formes logiciel adoptent un élan de « coffre à outils ».

Avec un système traditionnel de représentation, Je dois d'abord prendre des mesures pour étalonner les images et les artefacts corrects du dispositif imageur et le système de flash, puis les artefacts corrects de l'échantillon lui-même, puis figure à l'extérieur comment extraire mes caractéristiques techniques d'intérêt avec un alignement d'éblouissement de filtres à traitement d'images, et en conclusion, Je travaille par un assortiment de métrique pour analyser….une image unique.

Pour répéter cette procédure, J'établis un script ou si tout va bien il y a un certain menu de traitement par lots. Il est encombrant, pour ne pas dire plus, et J'essaye continuellement de me rappeler exact quelles mesures J'ai prises et où mes images sont.

L'IncuCyte offre plusieurs avantages. D'abord, l'instrument a un procédé d'étalonnage qui rectifie des artefacts automatiquement. En Second Lieu, l'interface du logiciel présente seulement les outils que vous avez besoin pour la tâche actuelle.

Dérivez des analyses plus profondes avec l'analyse en temps réel de sous tension-cellule. (a) Saisissez Automatiquement les images au fil du temps, (b) utilisation IncuCyte® VesselView de visualiser des images de tous les emplacements dans le récipient immédiatement et évaluer rapidement des résultats expérimentaux, plus changent de plan dedans sur des images d'intérêt (c) recensent automatiquement des régions d'intérêt par l'intermédiaire des masques que (d) produisent des graphiques exposé-disponibles de timelapse, et (e) la vue toute 96 - ou 384 cinétiques tendances bonnes immédiatement avec IncuCyte® PlateGraph et données d'exportation de prévoir des valeurs de la réaction EC50 ou IC50.

Si vous faites une analyse de prolifération cellulaire qui compte des gouttes rouges de protéine nucléaire, nous te présentons les outils aux gouttes de rouge de compte. Si l'analyse est plus complexe, comme analyser la conséquence de neurite, nous vous donnons que les outils font cela aussi bien. Troisièmement, l'analyse est appliquée à votre expérience entière, à toutes les remarques de temps et à tous les puits automatiquement.

Les Utilisateurs peuvent installer une définition de traitement une fois utilisant une expérience représentative, et puis appliquent cette semaine après semaine, mois après mois avec un clic du bouton. Durez, mais le plus certainement pas moins, toutes les images et analyses sont d'une manière ordonnée enregistrées ensemble dans une base de données interrogeable.

Que peut être gagné en observant la morphologie de cellules et les mouvements de cellules pendant les études ?

En Observant des changements de la morphologie et du mouvement de cellules fournissez l'analyse dans beaucoup de procédés normaux et pathologiques comprenant la métastase de réaction immunitaire et de tumeur. La capacité d'étudier ces modifications cinétique et dans des conditions physiologique appropriées est ayant trait à comprendre les effets des traitements médicamenteux et de la réponse cellulaire ultérieure, te permettant d'indiquer exactement avec précision quand ces modifications se produisent.

L'estimation Visuelle de la morphologie et du mouvement de cellules, vérifie non seulement les données quantitatives, mais tient compte éventuel de l'information phénotypique supplémentaire afin de profiler l'activité biologique cellule-particulière et dépendant du temps.

Que le contrat à terme retient-il pour la technologie d'IncuCyte S3 ? Comment chercheurs de cette d'autres aide entreprendront-ils des expériences à l'avenir ?

Nous avons quelques développements passionnants en avant. Tandis Que Je ne peux pas fournir excessif petit groupe, nous évaluons activement des modèles plus complexes tels que des sphéroïdes et des cellules également iPSC-dérivées, telles que des neurones. Nous poussons toujours vers une pertinence plus physiologique et une analyse plus profonde dans le fonctionnement. Veillez à nous suivre sur Facebook et Linkedin pour tenir à jour avec nos activités !

Où peuvent les lecteurs trouver plus d'informations ?

Veuillez visiter notre site Web chez www.incucyte.com.

Au Sujet de Kimberley Wicklund

Kimberly Wicklund a passé une décennie fonctionnant avec le matériel et le logiciel de microscopie de recherches avant de joindre Essen en 2015. Il a commencé sa carrière dans l'instrumentation des sciences de la vie en tant qu'un scientifique d'applications et gestionnaire de support technique avant l'atterrissage dans la gestion du produit.

Il a lancé un certain nombre de systèmes, de dispositifs, et de plates-formes logiciel de représentation au marché et a servi de corps enseignant de constructeur à beaucoup de cours de microscopie au Trou de l'En Bois, au Cold Spring Harbor, et aux Laboratoires Biologiques de l'Île Déserte de Support.

Il a obtenu son PhD en génie chimique à l'Université de Californie-Berkeley et a étudié le métabolisme de cellules de cancer du sein en conditions hypoxiques, ainsi il a longtemps apprécié l'importance des environnements physiologique appropriés. Il est maintenant la Directrice de la Gestion Du Produit Aux Biosciences d'Essen, d'une compagnie de Sartorius et des durées de vie à Ann Arbor, Michigan.