Vedere l'immagine completa, analisi in tempo reale delle in tensione-celle

insights from industryKimberly WicklundDirector of Product ManagementEssen Bioscience

Un'intervista con Kimberley Wicklund, condotto da James Ives, MPsych

Le Celle e le interazioni delle cellule sono estremamente complesse ed altamente dinamiche. Faccia Prego una generalità delle sfide che affrontano i ricercatori quando analizzano questi sistemi complessi.

Il Vostro primo colpo di frase su una sfida chiave: dinamica. Ogni cella è una fabbrica miniatura che contiene la materia prima (segnali extracellulari) e che la elabora per produrre qualcosa (una risposta biologica). Ma a differenza di una fabbrica che può essere tweaked facilmente per funzionare allo costante-stato e per guardare lo stessi da un giorno all'altro, le celle sono dinamiche.

Se state usando le celle per studiare le risposte, come sapere quando la risposta accade? Che Cosa se lo mancate? Conoscendo che cosa le vostre celle stanno facendo e quando fanno è una sfida chiave. Un'Altra sfida è pertinenza fisiologica. Se state esaminando le linee cellulari o le colture cellulari primarie, il grande dolore è catturato per tenerli in un ambiente coerente.

ma d'altra parte sono contenute e dalle loro case felici da colpire ed incitare sugli strumenti analitici. Come questi cambiamenti nell'ambiente pregiudicano la salubrità e la funzione cellulari? Poichè progrediamo verso i modelli più complessi o più sensibili, mantenere le condizioni ambientali coerenti è non solo importante per la conservazione delle celle vive, ma anche per pertinenza di mantenimento con sistema biologico originale e per l'assicurazione della riproducibilità del vostro esperimento.

Un'Altra sfida nel mantenimento della pertinenza fisiologica sorge quando usiamo i reagenti per individuare i cambiamenti biologici di interesse. La Maggior Parte dei reagenti perturbano la biologia che stessa stiamo studiando. È importante considerare come i reagenti pregiudicano la salubrità e la morfologia delle cellule prima di usando con le celle viventi.

IncuCyte ha mescolato il contrat di HD-fase/immagine della fluorescenza (10x) di una popolazione stabile mista delle celle Rosse di Verde e di A549 NucLight di HT-1080 NucLight.

Fino ad oggi che cosa è stato utilizzato come il sistema monetario aureo nei metodi analitici di biologia cellulare?

Per biologia cellulare, il tasto che i metodi analitici hanno compreso gli strumenti quali i microscopi, che scorre cytometers o che placca i lettori usati insieme con i reagenti colorimetrici o fluorescenti per aiutare nella rilevazione della biologia di interesse.

Lo Sviluppo delle proteine fluorescenti, naturalmente, è stato un avanzamento chiave per l'esecuzione dell'analisi delle cellule. Queste proteine possono essenzialmente essere espresse senza rottura significativa a comportamento normale delle cellule e vero permettere alla rappresentazione della in tensione-cella.

Faccia Prego una generalità del Incucyte S3 e le sue funzionalità.

Il IncuCyte® S3 è il solo sistema in tempo reale della rappresentazione e di analisi della in tensione-cella che automaticamente i bloccaggi ed analizza le immagini delle celle viventi ventiquattr'ore su ventiquattro, per i giorni, settimane, o mesi, mentre le celle rimangono indisturbate dentro un'incubatrice standard della cultura del tessuto.

Il IncuCyte ha una progettazione ottica unica, compatta e mobile che permette che le celle restino stazionarie in tutto l'esperimento, che è cruciale per i tipi non aderenti o sensibili delle cellule quali le celle immuni o i neuroni. Il Nostro approccio applicazione-è messo a fuoco e la cella salubrità-è messa a fuoco.

Via un'interfaccia utente recentemente aggiornata, il IncuCyte sta raggiungendo “lo stato di uso e della passeggiata-su„ per la rappresentazione e l'analisi della in tensione-cella. Il Più, il IncuCyte raggiunge questo al disgaggio. Un nuovo utente può condurre in pochi minuti 96 - e 384 esperimenti buoni e poi crea i film e metrica rappresentare graficamente che è pubblicazione e presentazione-pronto con appena alcuni clic.

Ancora ricordo il mio primo giorno a Essen in cui ho imparato come fare un'analisi della ferita del graffio di 96 pozzi facendo uso del IncuCyte e del nostro Woundmaker.  Ha catturato non più di una mezza ora di tempo pratico di seminare, crea 96 graffi, ha messo il microplate nel IncuCyte ed ha installato il software per acquistare ed analizzare automaticamente.

I Grafici hanno cominciato a costruire immediatamente, l'analisi vero in tempo reale. Quando abbiamo rifinito, ho detto che “È che???„. Quello era, molto semplice ed accessibile e molto molto potente.

Oltre a migliorare la produttività per l'utente determinato, il IncuCyte S3 autorizza un intero gruppo di ricerca. Gli utenti Multipli possono eseguire le applicazioni multiple sul IncuCyte parallelamente, diminuendo il tempo passato aspettando uno strumento per essere disponibili. Inoltre, i dati sono a distanza accessibili a tutto l'utente via le licenze di reti illimitate e libere.

Con il nuovo IncuCyte S3, i ricercatori possono inventare i nuovi esperimenti non precedentemente hanno ritenuto possibile. Ora hanno accesso all'analisi in tempo reale della in tensione-cella che offre non solo le nuove comprensioni, ma anche alla capacità di lavorazione e ad un'esperienza utente aerodinamica.

Faccia Prego una generalità di importanza della rappresentazione e dell'analisi in tempo reale della in tensione-cella del `'? Perché è così importante tenere i campioni della in tensione-cella piuttosto che facendo uso delle procedure che distruggono le celle come componente del flusso di lavoro sperimentale?

Piuttosto che una singola istantanea, l'analisi continua assicura che non manchiate mai una risposta o un'interazione critica. Ancora, a misure cinetiche e basate a immagine svolgono i dati più fisiologicamente pertinenti e le comprensioni più profonde e più significative nei trattamenti biologici attivi e la funzione cellulare che non possono essere raggiunti con le analisi convenzionali di punto finale.

Per ottenere ad una comprensione di una risposta dipendente dal tempo con le analisi di punto finale, richiede l'impostazione delle analisi multiple e la concatenazione dei dati di un una maschera di che cosa è accaduto. Quello è che richiede tempo e costoso e non avete capacità più ulteriormente di analizzare i vostri campioni una volta che avete condotto l'analisi.

Ancora, se la vostra tecnologia non è basata a immagine, non potrete convalidare visivamente alcune tendenze o valutare i valori erratici. Con la rappresentazione e l'analisi in tempo reale facendo uso dei reagenti di perturbazione, ciascuno pozzo o l'imbarcazione può essere analizzata col passare del tempo per rivelare le risposte dipendenti dalla concentrazione o cella-specifiche che possono essere convalidate con le immagini ed i film e permettere al processo decisionale in tempo reale.

Egualmente avete il vantaggio che le vostre celle non si distruggono durante il trattamento sperimentale e potete essere caratterizzati più ulteriormente facendo uso di altre tecnologie quale citometria a flusso.

Oltre alla comprensione guadagnate facendo uso della rappresentazione continua della in tensione-cella e l'analisi, anche potete valutare rapidamente tutti i valori erratici, come potete valutare la semina la densità e della morfologia delle vostre celle all'inizio dell'esperimento ed interamente. L'aspetto di controllo di qualità dell'esecuzione dell'analisi della in tensione-cella non può essere trascurato.

Le Che applicazioni possono essere studiate quando usando il Incucyte S3? Sono ci limitazioni o le restrizioni?

Il IncuCyte S3 è compatibile con una vasta gamma di imbarcazioni e di applicazioni di cultura. Il Sistema di IncuCyte S3 può essere usato per il video e sorveglianza in tempo reale delle cellule, salubrità ed attuabilità analizzante delle cellule, migrazione ed invasione, più una vasta gamma adi analisi basate a cella fenotipiche.

Il IncuCyte adotta un approccio basato sulla popolazione all'analisi delle cellule. Se siete interessato nello studio dei dettagli strutturali sottocellulari con un approccio della in tensione-cella, raccomandiamo in primo luogo di usando il IncuCyte per caratterizzare le vostre celle e per studiare le variabili al livello della popolazione e poi continuiamo con una tecnica più di alta risoluzione quale microscopia confocale.

Il IncuCyte ha una collezione rapido crescente oltre di 1.000 articoli esaminati il pari e le nuove applicazioni facendo uso del IncuCyte stanno pubblicande continuamente.

Perché è importante potere da lasciare le vostre celle all'interno dell'incubatrice, con la strumentazione della rappresentazione dentro? Che vantaggi sono ci a questo metodo?

L'Un giorno, gli anni fa, uno dei nostri fondatori stava camminando intorno al laboratorio e stava osservando gli scienziati camminare avanti e indietro all'incubatrice, eliminare le celle e portarli ad uno strumento essere controllato.

Lui avete chiesto “Pensate le celle come quello? Non sarebbe migliore se poteste vedere le vostre celle mentre stanno sedendo dentro l'incubatrice?„ Quello è l'inizio della storia di IncuCyte e di un esempio perfetto “di progettazione che pensa„ - osservi l'utente nel loro ambiente naturale e risolva un problema con innovazione.

L'incubatrice della cultura del tessuto è un pezzo di strumentazione altamente di fiducia e preciso che tiene un grande volume di gas ad una miscela, ad una temperatura e ad un'umidità appropriate. Ha progettato per tenere le celle vive.

Mettendo il IncuCyte dentro l'incubatrice, facciamo leva quell'ambiente di fiducia. Naturalmente, ci sono strumenti che hanno accessori incorporati di adjunta o di controllo dell'ambiente, ma il regolamento preciso di volumi di miscugli di gas sostanzialmente più piccoli può essere ingombrante e difficile.

Come il trattamento di immagine e la guida del lavoro del software di analisi automatizza l'analisi sperimentale? Le Che applicazioni sono ci per questo software di analisi automatizzato?

Ho speso una parte sostanziale di mia carriera che imparo le varie piattaforme softwari di trattamento e dell'analisi di immagine e che guido gli scienziati sul loro uso. Molte piattaforme softwari adottano un approccio “della cassetta portautensili„.

Con un sistema tradizionale della rappresentazione, devo in primo luogo intraprendere le azione per calibrare le immagini ed i artefatti corretti dall'unità di rappresentazione ed il sistema di illuminazione, quindi i artefatti corretti dal campione stesso, quindi capisco come estrarre le mie funzionalità di interesse con una schiera dell'abbagliamento dei filtri da trattamento di immagine e per concludere, lavoro con un assortimento di metrica per analizzare….una singola immagine.

Per ripetere questa procedura, sviluppo uno script o eventualmente c'è un certo menu di processo discontinuo. È ingombrante, dire i minimo e sto provando costantemente a ricordarmi esattamente che misure ho catturato e dove le mie immagini sono.

Il IncuCyte offre parecchi vantaggi. In Primo Luogo, lo strumento ha un trattamento di calibratura che corregge automaticamente i artefatti. In Secondo Luogo, l'interfaccia di software presenta soltanto gli strumenti che avete bisogno di per il compito attuale.

Derivi le comprensioni più profonde con l'analisi in tempo reale della in tensione-cella. (A) Acquisti Automaticamente col passare del tempo le immagini, (B) l'uso IncuCyte® VesselView osservare le immagini di tutte le posizioni nell'imbarcazione immediatamente e valutare rapidamente i risultati sperimentali, più zumma sulle immagini di interesse (C) identifica automaticamente le regioni di interesse via le maschere (D) genera i grafici presentazione-pronti del timelapse e (E) visualizzazione tutta 96 - o 384 tendenze cinetiche buone immediatamente con IncuCyte® PlateGraph e dati dell'esportazione calcolare i valori di risposta EC50 o IC50.

Se state facendo un'analisi di proliferazione delle cellule che sta contando le chiazze rosse di proteina nucleare, vi presentiamo gli strumenti alle chiazze di rosso di conteggio. Se l'analisi è più complessa, come analizzare la conseguenza del neurite, vi diamo che gli strumenti fanno quello pure. In Terzo Luogo, l'analisi si applica automaticamente al vostro intero esperimento, a tutti i punti di tempo ed a tutti i pozzi.

Gli Utenti possono installare una definizione di trattamento una volta facendo uso di un esperimento rappresentativo e poi applicano quella settimana dopo la settimana, mese dopo mese con un clic di un bottone. Duri, ma il più certamente specialmente, tutte immagini ed analisi sono memorizzate ordinatamente insieme in un database esplorabile.

Che Cosa può essere guadagnato osservando la morfologia delle cellule ed i movimenti delle cellule durante gli studi?

Osservando i cambiamenti nella morfologia e nel movimento delle cellule fornisca la comprensione in molti trattamenti normali e patologici compreso la metastasi del tumore e di risposta immunitaria. La capacità di studiare questi cambiamenti cineticamente e nelle circostanze fisiologicamente pertinenti è pertinente a capire gli effetti dei trattamenti della droga e della risposta cellulare successiva, permettendo che segniate precisamente quando con esattezza questi cambiamenti accadono.

La valutazione Visiva della morfologia e del movimento delle cellule, non solo verifica i dati quantitativi, ma infine tiene conto informazioni fenotipiche supplementari per profilare l'attività biologica cella-specifica e dipendente dal tempo.

Che Cosa il futuro tiene per la tecnologia di IncuCyte S3? Come ricercatori di questa ulteriori guida eseguiranno gli esperimenti in futuro?

Abbiamo alcuni sviluppi emozionanti avanti. Mentre non posso fornire troppo dettaglio, attivamente stiamo valutando i modelli più complessi quali le sferoidi e le celle anche iPSC-derivate, quali i neuroni. Stiamo spingendo sempre verso pertinenza più fisiologica e comprensione più profonda nella funzione. Assicuri seguirci su Facebook e su Linkedin per tenere aggiornato con le nostre attività!

Dove possono i lettori trovare più informazioni?

Visualizzi Prego il nostro sito Web a www.incucyte.com.

Circa Kimberley Wicklund

Kimberly Wicklund ha passato una decade che lavora con il hardware ed il software di microscopia della ricerca prima dell'aggiunta di Essen nel 2015. Ha cominciato la sua carriera nella strumentazione di scienze biologiche come uno scienziato delle applicazioni e gestore del supporto tecnico prima della stazione in gestione del prodotto.

Ha lanciato una serie di sistemi, unità e piattaforme softwari della rappresentazione al servizio ed ha servito da facoltà del venditore a molti corsi di microscopia al Foro di Legno, al Porto Freddo della Sorgente ed ai Laboratori Biologici dell'Isola Deserta del Supporto.

Ha ottenuto il suo PhD in ingegneria chimica all'Università di California-Berkeley ed ha studiato il metabolismo delle cellule di cancro al seno nelle circostanze hypoxic, in modo da lungamente ha apprezzato l'importanza degli ambienti fisiologicamente pertinenti. Ora è il Direttore di Gestione del Prodotto a Scienze Biologiche di Essen, di una società del Sartorius e delle vite a Ann Arbor, Michigan.