Vendo a imagem completa, análise do tempo real das vivo-pilhas

insights from industryKimberly WicklundDirector of Product ManagementEssen Bioscience

Uma entrevista com Kimberley Wicklund, conduzido por James Ives, MPsych

As Pilhas, e as interacções da pilha são extremamente complexas e altamente dinâmicas. Dê Por Favor uma vista geral dos desafios que enfrentam pesquisadores ao analisar estes sistemas complexos.

Sua primeira batida da frase em um desafio chave: dinâmica. Cada pilha é uma fábrica diminuta que recolhe a matéria prima (sinais extracelulares) e que processa a para produzir algo (uma resposta biológica). Mas ao contrário de uma fábrica que possa facilmente ser tweaked para ser executado em de estado estacionário e para olhar de um dia para o outro o mesmos, as pilhas são dinâmicas.

Se você está usando pilhas para investigar respostas, como você sabe quando a resposta acontece? Que se você o falta? Conhecendo o que suas pilhas estão fazendo e quando fazem é um desafio chave. Um Outro desafio é importância fisiológico. Se você está olhando linha celular ou culturas celulares preliminares, a grande dor é tomada para mantê-los em um ambiente consistente.

mas por outro lado são recolhidos e fora de suas HOME felizes a ser picadas e incitado em instrumentos analíticos. Como estas mudanças no ambiente afectam a saúde e a função celulares? Porque nós progredimos para uns modelos mais complexos ou mais sensíveis, manter as circunstâncias ambientais consistentes é não somente importante para manter as pilhas vivas, mas igualmente para a importância de manutenção ao sistema biológico original e para assegurar a reprodutibilidade de sua experiência.

Um Outro desafio em manter a importância fisiológico elevara quando nós usamos reagentes para detectar mudanças biológicas do interesse. A Maioria de reagentes molestam a biologia que mesma nós estamos investigando. É importante considerar como os reagentes afectam a saúde e a morfologia da pilha antes dos usar com pilhas vivas.

IncuCyte misturou o contrat da HD-fase/imagem da fluorescência (10x) de uma população estável misturada de pilhas Vermelhas do Verde e do A549 NucLight de HT-1080 NucLight.

Até o que tem sido usado recentemente como a bandeira de ouro em métodos analíticos da biologia celular?

Para a biologia celular, a chave que os métodos analíticos envolveram instrumentos tais como microscópios, fluem cytometers ou chapeiam os leitores usados conjuntamente com reagentes colorimetric ou fluorescentes para ajudar na detecção da biologia do interesse.

A Revelação de proteínas fluorescentes, naturalmente, foi um avanço chave para executar a análise da pilha. Estas proteínas podem constitutiva ser expressadas sem rompimento significativo ao comportamento normal da pilha e verdadeiramente ter permitido a imagem lactente da vivo-pilha.

Dê Por Favor uma vista geral do Incucyte S3 e suas características.

O IncuCyte® S3 é o único sistema da imagem lactente e de análise da vivo-pilha do tempo real que automaticamente as captações e analisam imagens de pilhas vivas dia-e-noite, por dias, semanas, ou meses, quando as pilhas permanecerem imperturbadas dentro de uma incubadora padrão da cultura do tecido.

O IncuCyte tem um projecto óptico original, compacto e móvel que permita que as pilhas fiquem estacionárias durante todo a experiência, que é crucial para tipos não-aderentes ou sensíveis da pilha tais como pilhas imunes ou neurônios. Nossa aproximação aplicação-é focalizada e a pilha saúde-é focalizada.

Através de uma interface de utilizador recentemente actualizado, o IncuCyte está conseguindo da “o estado caminhada-acima e do uso” para a imagem lactente e a análise da vivo-pilha. O Sinal De Adição, o IncuCyte consegue este na escala. Um usuário novo pode conduzir 96 - e 384 experiências boas numa questão de minutos, e cria então os filmes e medidor da representação gráfica que estão publicação e apresentação-prontos com apenas alguns cliques.

Eu ainda recordo meu primeiro dia em Essen onde Eu aprendi como fazer um ensaio da ferida do risco de 96 poços usando o IncuCyte e nosso Woundmaker.  Tomou não mais do que uma meia hora da hora a trabalhar de semear, cria 96 riscos, põe o microplate no IncuCyte, e estabelece o software para adquirir e analisar automaticamente.

Os Gráficos começaram a construir imediatamente, verdadeiramente análise do tempo real. Quando nós terminamos, Eu disse que “É que???”. Aquele era ele, muito simples e acessível, e muito muito poderoso.

Além do que o melhoramento da produtividade para o usuário individual, o IncuCyte S3 autoriza uma equipa de investigação inteira. Os usuários Múltiplos podem executar aplicações múltiplas no IncuCyte paralelamente, reduzindo o tempo passado esperando um instrumento para estar disponíveis. Além, os dados são acessíveis remotamente a todo o usuário através das licenças conectadas ilimitadas, livres.

Com o IncuCyte novo S3, os pesquisadores podem planejar experiências novas pensaram não previamente possível. Têm agora o acesso à análise da vivo-pilha do tempo real que oferece não somente introspecções novas, mas igualmente à produção e a uma experiência aerodinâmica do usuário.

Dê Por Favor uma vista geral da importância imagem lactente e análise da vivo-pilha do tempo real do `'? Por Que é tão importante manter amostras da vivo-pilha um pouco do que usando os procedimentos que destroem as pilhas como parte dos trabalhos experimentais?

Um Pouco do que um único instantâneo, a análise contínua assegura-se de que você nunca falte uma resposta ou uma interacção crítica. Além Disso, as medidas cinéticas, imagem-baseadas fornecem os dados mais physiologically relevantes e umas introspecções mais profundas, mais significativas em processos biológicos activos e a função celular que não podem ser conseguidos com ensaios convencionais do valor-limite.

Para obter a uma compreensão de uma resposta tempo-dependente com ensaios do valor-limite, exige a instalação de ensaios múltiplos e a concatenação dos dados unir uma imagem do que aconteceu. Isso é demorado e caro, e você não tem nenhuma capacidade para analisar mais suas amostras uma vez que você conduziu o ensaio.

Além Disso, se sua tecnologia imagem-não é baseada, você não poderá validar visualmente nenhuma tendências ou avaliar outliers. Com imagem lactente e análise do tempo real usando reagentes não-inquietantes, cada um poço ou a embarcação podem ser analisados ao longo do tempo para revelar as respostas dependentes da concentração ou pilha-específicas que podem ser validadas com imagens e filmes e permitir a tomada de decisão do tempo real.

Você igualmente tem o benefício que suas pilhas não estão destruídas durante o processo experimental, e pode ser caracterizado mais usando outras tecnologias tais como o cytometry de fluxo.

Com exceção da introspecção você ganha usando a imagem lactente contínua da vivo-pilha e análise, você igualmente pode rapidamente avaliar todos os outliers, como você pode avaliar a semeação da densidade e da morfologia de suas pilhas no início da experiência e por toda parte. O aspecto do controle da qualidade de executar a análise da vivo-pilha não pode ser negligenciado.

Que aplicações podem ser estudadas ao usar o Incucyte S3? Há umas limitações ou umas limitações?

O IncuCyte S3 é compatível com uma vasta gama de embarcações e de aplicações de cultura. O Sistema de IncuCyte S3 pode ser usado para a monitoração e a fiscalização da pilha do tempo real, saúde e viabilidade de análise da pilha, migração e invasão, mais uma vasta gama de ensaios baseados em celulas fenotípicos.

O IncuCyte toma uma aproximação população-baseada à análise da pilha. Se você está interessado em investigar detalhes estruturais subcelulares com uma aproximação da vivo-pilha, nós recomendamos primeiramente usar o IncuCyte para caracterizar suas pilhas e para investigar variáveis a nível da população, e continuamos então com uma técnica mais de alta resolução tal como a microscopia confocal.

O IncuCyte tem uma coleção ràpida crescente sobre de 1.000 artigos revistos par, e as novas aplicações que usam o IncuCyte estão sendo publicadas continuamente.

Por Que é importante poder deixar suas pilhas dentro da incubadora, com o equipamento da imagem lactente para dentro? Que vantagens há a este método?

Um dia, anos há, um de nossos fundadores estava andando em torno do laboratório e estava observando cientistas andar para a frente e para trás à incubadora, remover pilhas e trazê-las a um instrumento ser verificado.

Ele pediu “Você pensa as pilhas como aquele? Não seria melhor se você poderia ver suas pilhas quando se sentarem dentro da incubadora?” Aquele é o começo da história de IncuCyte e de um exemplo perfeito do “projecto que pensa” - observe o usuário em seu ambiente natural e resolva um problema com inovação.

A incubadora da cultura do tecido é uma parte de equipamento altamente confiada e precisa que mantem um de grande volume do gás em uma mistura, em uma temperatura e em uma umidade apropriadas. Projectou manter pilhas vivas.

Pondo o IncuCyte dentro da incubadora, nós leverage esse ambiente confiado. Naturalmente, há os instrumentos que têm o controle ambiental incorporado ou acessórios auxiliares, mas o regulamento preciso de volumes substancialmente menores de mistura de gases pode ser incómodo e difícil.

Como a ajuda do trabalho do processamento de imagem e do software de análise automatiza a análise experimental? Que aplicações há para este software de análise automatizada?

Eu gastei uma parcela substancial de minha carreira que aprendo o vários processamento de imagem e plataformas de software da análise e que guio cientistas em seu uso. Muitas plataformas de software tomam uma aproximação da “caixa de ferramentas”.

Com um sistema tradicional da imagem lactente, Eu tenho que primeiramente tomar etapas para calibrar as imagens e os produtos manufacturados correctos do dispositivo de imagem lactente e o sistema de iluminação, a seguir os produtos manufacturados correctos da amostra próprios, a seguir figuro para fora como prolongar minhas características do interesse com uma disposição do brilho de filtros do processamento de imagem, e finalmente, Eu trabalho através de uma variedade do medidor para analisar….uma única imagem.

Para repetir este procedimento, Eu construo um script ou esperançosamente há algum menu do processo de grupo. É incómodo, pelo menos, e Eu estou tentando constantemente recordar exactamente que etapas Eu tomei e onde minhas imagens são.

O IncuCyte oferece diversas vantagens. Primeiramente, o instrumento tem um processo da calibração que corrija produtos manufacturados automaticamente. Em Segundo, a relação de software apresenta somente as ferramentas que você precisa para a tarefa à mão.

Derive umas introspecções mais profundas com análise da vivo-pilha do tempo real. (a) Adquira Automaticamente imagens ao longo do tempo, (b) uso IncuCyte® VesselView ver imediatamente imagens de todos os lugar na embarcação e avaliar rapidamente resultados experimentais, mais zumbe dentro em imagens do interesse (c) identifica automaticamente regiões de interesse através das máscaras que (d) gera gráficos apresentação-prontos do timelapse, e (e) de vista toda a 96 - ou 384 tendências cinéticas boas imediatamente com IncuCyte® PlateGraph e dados da exportação calcular valores da resposta EC50 ou IC50.

Se você está fazendo um ensaio da proliferação de pilha que esteja contando gotas vermelhas da proteína nuclear, nós apresentamos-lhe as ferramentas às gotas do vermelho da contagem. Se a análise é mais complexa, como a análise da conseqüência do neurite, nós damo-lo que as ferramentas fazem aquela também. Em Terceiro Lugar, a análise é aplicada a sua experiência inteira, a todos os pontos do tempo e a todos os poços automaticamente.

Os Usuários podem estabelecer uma definição de processamento uma vez usando uma experiência representativa, e aplicam então essa semana após a semana, mês após mês com um clique de um botão. Dure, mas o mais certamente especialmente, todas as imagens e análises são armazenadas ordenadamente junto em uma base de dados procurado.

Que pode ser ganhado observando a morfologia da pilha e os movimentos da pilha durante estudos?

Observando mudanças na morfologia e no movimento da pilha forneça a introspecção em muitos processos normais e patológicos que incluem a metástase da resposta imune e do tumor. A capacidade para estudar estas mudanças cinètica e em circunstâncias physiologically relevantes é pertinente a compreender os efeitos de tratamentos da droga e da resposta celular subseqüente, permitindo que você localize precisamente quando estas mudanças ocorrem.

A avaliação Visual da morfologia e do movimento da pilha, verifica não somente os dados quantitativos, mas permite-os finalmente a informação fenotípica adicional a fim perfilar a actividade biológica pilha-específica e tempo-dependente.

Que o futuro guardara para a tecnologia de IncuCyte S3? Como uns pesquisadores mais adicionais desta ajuda conduzirão experiências no futuro?

Nós temos algumas revelações emocionantes adiante. Quando Eu não puder dar demasiado detalhe, nós estamos avaliando activamente uns modelos mais complexos tais como esferóides e pilhas igualmente iPSC-derivadas, tais como os neurônios. Nós estamos introduzindo sempre para uma importância mais fisiológico e uma introspecção mais profunda na função. Certifique-se seguir-nos em Facebook e em Linkedin para manter-se atualizado com nossas actividades!

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

Visite Por Favor nosso Web site em www.incucyte.com.

Sobre Kimberley Wicklund

Kimberly Wicklund passou uma década que trabalha com hardware e software da microscopia da pesquisa antes de juntar-se Essen em 2015. Começou sua carreira na instrumentação da ciência da vida como um cientista das aplicações e um gerente do suporte laboral antes de aterrar na gestão de produtos.

Lançou um número sistemas da imagem lactente, dispositivos, e de plataformas de software ao mercado e servir-los como a faculdade do vendedor em muitos cursos da microscopia no Furo da Madeira, no Porto Frio da Mola, e em Laboratórios Biológicos da Ilha de Deserto da Montagem.

Obteve seu PhD na engenharia química na Universidade de Califórnia-Berkeley e estudou o metabolismo da pilha de cancro da mama em circunstâncias hypoxic, assim que tem apreciado por muito tempo a importância de ambientes physiologically relevantes. É agora o Director da Gestão de Produtos na Ciência Biológica de Essen, de uma empresa do Sartório e de vidas em Ann Arbor, Michigan.