Ver el retrato completo, análisis en tiempo real de vivo-células

insights from industryKimberly WicklundDirector of Product ManagementEssen Bioscience

Una entrevista con Kimberley Wicklund, conducto por James Ives, MPsych

Las Células, y las acciones recíprocas de la célula son extremadamente complejas y altamente dinámicas. Dé Por Favor una reseña de los retos que hacen frente a investigadores al analizar estos sistemas complejos.

Su primer golpe de la sentencia en un reto dominante: dinámica. Cada célula es una fábrica miniatura que admite la materia prima (señales extracelulares) y que la tramita para producir algo (una reacción biológica). Pero a diferencia de una fábrica que se pueda pellizcar fácilmente para ejecutarse en de estado estacionario y para observar lo mismo día a día, las células son dinámicas.

¿Si usted está utilizando las células para investigar reacciones, cómo usted sabe cuándo suceso la reacción? ¿Qué si usted lo falta? Conociendo lo que están haciendo sus células y cuando hacen es un reto dominante. Otro reto es importancia fisiológica. Si usted está observando variedades de células o cultivos celulares primarios, el gran dolor se toma para mantenerlos un ambiente constante.

pero por otra parte se admiten y fuera de sus hogares felices que se empujarán y pinchados en los instrumentos analíticos. ¿Cómo estos cambios en el ambiente afectan a salud y a la función celulares? Pues progresamos hacia modelos más complejos o más sensibles, mantener las condiciones ambientales constantes es no sólo importante para mantener las células activas, pero también para la importancia que mantiene al sistema biológico original y para asegurar reproductibilidad de su experimento.

Otro reto en mantener importancia fisiológica se presenta cuando utilizamos los reactivos para detectar cambios biológicos del interés. La Mayoría de los reactivos perturban la misma biología que estamos investigando. Es importante considerar cómo los reactivos afectan a salud y a morfología de la célula antes de usarlas con las células vivas.

IncuCyte mezcló el contrat/la imagen de la fluorescencia (10x) de la HD-fase de una población estable mezclada de glóbulos Rojos del Verde y de A549 NucLight de HT-1080 NucLight.

¿Hasta hace poco tiempo qué se ha utilizado como el patrón oro en métodos analíticos de biología celular?

Para la biología celular, el clave que los métodos analíticos han implicado los instrumentos tales como microscopios, que fluye los cytometers o que chapa a los programas de lectura usados conjuntamente con los reactivos colorimétricos o fluorescentes para ayudar en la detección de la biología del interés.

El Revelado de proteínas fluorescentes, por supuesto, ha sido un adelanto dominante para realizar análisis de la célula. Estas proteínas pueden constitutivo ser expresadas sin la desorganización importante al comportamiento normal de la célula y haber activado verdad proyección de imagen de la vivo-célula.

Dé Por Favor una reseña del Incucyte S3 y sus características.

El IncuCyte® S3 es el único sistema en tiempo real de la proyección de imagen y de análisis de la vivo-célula que automáticamente las capturas y analizan imágenes de células vivas las veinticuatro horas del día, por días, las semanas, o los meses, mientras que las células siguen siendo imperturbadas dentro de una incubadora estándar de la cultura del tejido.

El IncuCyte tiene un diseño óptico único, compacto y movible que permita que las células tirante estacionarias en el experimento, que es crucial para los tipos no-adherentes o sensibles de la célula tales como células inmunes o neuronas. Aplicación-se enfoca Nuestra aproximación y salud-se enfoca la célula.

Vía una interfaz de usuario recientemente actualizada, el IncuCyte está logrando el estatus del “paseo-hacia arriba y del uso” para la proyección de imagen y el análisis de la vivo-célula. El Más, el IncuCyte logra esto en la escala. Un nuevo utilizador puede conducto 96 - y 384 bien experimentos en cuestión de minutos, y después crea películas y las métricas de la representación gráfica gráficamente que están publicación y presentación-listas con apenas algunos tecleos.

Todavía recuerdo mi primer día en Essen en donde aprendí cómo hacer un análisis de la herida de la rayadura de 96 receptores de papel usando el IncuCyte y nuestro Woundmaker.  Tomó no más que una media hora de hora con manos de sembrar, crea 96 rayaduras, puso el microplate en el IncuCyte, y fijó el software para detectar y para analizar automáticamente.

Los Gráficos comenzaron a construir inmediatamente, análisis verdaderamente en tiempo real. Cuando acabamos, dije que “Es que???”. Eso era él, muy simple y accesible, y muy muy potente.

Además de mejorar la productividad para el utilizador individual, el IncuCyte S3 autoriza a un equipo de investigación entero. Los utilizadores Múltiples pueden ejecutar aplicaciones múltiples en el IncuCyte paralelamente, reduciendo el tiempo pasado esperando un instrumento para estar disponibles. Además, los datos son accesibles remotamente a cualquier utilizador vía licencias conectadas ilimitadas, libres.

Con el nuevo IncuCyte S3, los investigadores pueden idear nuevos experimentos pensaron no previamente posible. Ahora tienen acceso al análisis en tiempo real de la vivo-célula que ofrece no sólo nuevos discernimientos, pero también a la producción y a una experiencia aerodinámica del utilizador.

¿Dé Por Favor una reseña de la importancia proyección de imagen y análisis en tiempo real de la vivo-célula del ` de la'? ¿Por Qué es tan importante guardar muestras de la vivo-célula bastante que usando los procedimientos que destruyen las células como parte del flujo de trabajo experimental?

Bastante que una única foto, el análisis contínuo se asegura que usted nunca falte una reacción o una acción recíproca crítica. Además, las mediciones cinéticas, imagen-basadas proporcionan a los datos más fisiológico relevantes y a discernimientos más profundos, más significativos en procesos biológicos activos y a la función celular que no se pueden lograr con análisis convencionales de la punto final.

Para conseguir a una comprensión de una reacción dependiente del tiempo con análisis de la punto final, requiere el ajuste de análisis múltiples y la concatenación de los datos juntar un retrato de qué suceso. Eso es que toma tiempo y costoso, y usted no tiene ninguna capacidad de analizar más lejos sus muestras una vez que usted ha conducto el análisis.

Además, si su tecnología imagen-no se basa, usted no podrá validar visualmente ninguna tendencias o evaluar afloramientos. Con proyección de imagen y análisis en tiempo real usando los reactivos de no-perturbación, cada uno receptor de papel o el vaso se puede analizar en un cierto plazo para revelar las reacciones dependientes de la concentración o célula-específicas que pueden ser validadas con imágenes y películas y activar la toma de decisión en tiempo real.

Usted también tiene la ventaja que sus células no están destruidas durante el proceso experimental, y puede ser caracterizado más lejos usando otras tecnologías tales como cytometry de flujo.

Independientemente del discernimiento usted gana usando proyección de imagen contínua de la vivo-célula y análisis, usted también puede evaluar rápidamente cualquier afloramiento, como usted puede evaluar el sembrador de densidad y de la morfología de sus células al inicio del experimento y en todas partes. El aspecto del control de calidad de realizar análisis de la vivo-célula no puede ser pasado por alto.

¿Qué aplicaciones pueden ser estudiadas al usar el Incucyte S3? ¿Hay limitaciones o restricciones?

El IncuCyte S3 es compatible con una amplia gama de recipientes y de aplicaciones de cultivo. El Sistema de IncuCyte S3 se puede utilizar para la supervisión y vigilancia en tiempo real de la célula, salud y viabilidad de la célula que ensaya, migración e invasión, más una amplia gama de análisis célula-basados fenotípicos.

El IncuCyte lleva una aproximación sobre la base de la población el análisis de la célula. Si usted está interesado en la investigación de los detalles estructurales subcelulares con una aproximación de la vivo-célula, recomendamos primero el usar del IncuCyte para caracterizar sus células y para investigar variables en el nivel de la población, y después seguimos con una técnica más de alta resolución tal como microscopia confocal.

El IncuCyte tiene una colección rápidamente cada vez mayor sobre de 1.000 artículos revisados par, y las nuevas aplicaciones usando el IncuCyte se están publicando contínuo.

¿Por Qué es importante poder dejar sus células dentro de la incubadora, con el equipo de la proyección de imagen dentro? ¿Qué ventajas hay a este método?

Un día, hace años, uno de nuestros fundadores recorría alrededor del laboratorio y observaba a científicos el recorrer hacia adelante y hacia atrás a la incubadora, el sacar de las células y el traer de ellas a un instrumento ser controlado.

¿Él pidió “Usted piensa las células como eso? No sería mejor si usted podría ver sus células mientras que se están sentando dentro de la incubadora?” Ése es el principio de la historia de IncuCyte y de un ejemplo perfecto del “diseño que piensa” - observe al utilizador en su ambiente natural y resuelva un problema con la innovación.

La incubadora de la cultura del tejido es un pedazo de equipo altamente de confianza y exacto que guarde un de gran capacidad del gas en una mezcla, una temperatura y una humedad apropiadas. Ha diseñado mantener las células activas.

Poniendo el IncuCyte dentro de la incubadora, leverage ese ambiente de confianza. Por supuesto, hay los instrumentos que tienen accesorios incorporados del control del medio ambiente o de la agregación, pero la regla exacta de volúmenes substancialmente más pequeños de mezclas de gases puede ser incómoda y difícil.

¿Cómo la ayuda del trabajo del tratamiento de la imagen y del software de análisis automatiza análisis experimental? ¿Qué aplicaciones hay para este software de análisis automatizado?

He gastado una porción sustancial de mi carrera que aprendía el diversos tratamiento de la imagen y plataformas de programación de análisis y que conducía a científicos en su uso. Muchas plataformas de programación toman una aproximación de la “caja de herramientas”.

Con un sistema tradicional de la proyección de imagen, tengo que primero tomar medidas para calibrar las imágenes y los artefactos correctos del dispositivo de proyección de imagen y el sistema de iluminación, después los artefactos correctos de la muestra sí mismo, después imagino cómo drenar fuera mis características del interés con un arsenal del deslumbramiento de filtros del tratamiento de la imagen, y finalmente, trabajo a través de un surtido de métrica para analizar….una única imagen.

Para relanzar este procedimiento, construyo un script o esperanzadamente hay un cierto menú del proceso de tratamiento por lotes. Es incómodo, por lo menos, y estoy intentando constante recordar exactamente qué medidas tomé y donde están mis imágenes.

El IncuCyte ofrece varias ventajas. Primero, el instrumento tiene un proceso de la calibración que corrija los artefactos automáticamente. En Segundo Lugar, la interfaz presenta solamente las herramientas que usted necesita para la tarea a mano.

Derive discernimientos más profundos con análisis en tiempo real de la vivo-célula. (a) Detecte Automáticamente las imágenes en un cierto plazo, (b) uso IncuCyte® VesselView de ver imágenes de todas las ubicaciones en el vaso inmediatamente y evaluar rápidamente resultados experimentales, más empinadura hacia adentro en imágenes del interés (c) determina automáticamente regiones de interés vía máscaras que (d) genera gráficos presentación-listos del timelapse, y (e) de visión toda la 96 - o 384 cinéticas tendencias bien inmediatamente con IncuCyte® PlateGraph y datos de la exportación de calcular valores de la reacción EC50 o IC50.

Si usted está haciendo un análisis de la proliferación de célula que esté contando gotas rojas de la proteína nuclear, le presentamos las herramientas a las gotas del rojo de la cuenta. Si el análisis es más complejo, como analizar consecuencia del neurite, le damos que las herramientas hacen eso también. Tercero, el análisis se aplica a su experimento entero, a todas las puntas del tiempo y a todos los receptores de papel automáticamente.

Los Utilizadores pueden fijar una definición de tramitación una vez usando un experimento representativo, y después aplican esa semana después de la semana, mes tras mes con un tecleo de un botón. Dure, pero lo más ciertamente posible especialmente, todas las imágenes y análisis se salvan cuidadosamente juntos en una base de datos registrable.

¿Qué puede ser ganada observando morfología de la célula y los movimientos de la célula durante estudios?

Observando cambios en morfología y el movimiento de la célula proporcione al discernimiento en muchos procesos normales y patológicos incluyendo metástasis de la inmunorespuesta y del tumor. La capacidad de estudiar estos cambios cinético y en condiciones fisiológico relevantes está en relación con la comprensión de los efectos de los tratamientos de la droga y de la reacción celular subsiguiente, permitiendo que usted establezca claramente exacto cuando ocurren estos cambios.

La evaluación Visual de la morfología y del movimiento de la célula, no sólo verifica los datos cuantitativos, pero permite final la información fenotípica adicional para perfilar actividad biológica célula-específica y dependiente del tiempo.

¿Qué el futuro sujeta para la tecnología de IncuCyte S3? ¿Cómo investigadores más futuros de esta ayuda conducto experimentos en el futuro?

Tenemos algunos progresos emocionantes delante. Mientras Que no puedo dar a demasiado detalle, estamos evaluando activamente modelos más complejos tales como esferoides y células también iPSC-derivadas, tales como neuronas. Estamos activando siempre hacia una importancia más fisiológica y un discernimiento más profundo en la función. ¡Asegúrese de seguirnos en Facebook y Linkedin para mantener actualizado con nuestras actividades!

¿Dónde pueden los programas de lectura encontrar más información?

Visite Por Favor nuestro Web site en www.incucyte.com.

Sobre Kimberley Wicklund

Kimberly Wicklund pasó una década que trabajaba con soporte físico y software de la microscopia de la investigación antes de ensamblar Essen en 2015. Ella comenzó su carrera en la instrumentación de las ciencias de la vida como un científico de las aplicaciones y gerente del soporte técnico antes de aterrizar en gestión de productos.

Ella ha puesto en marcha varios sistemas de la proyección de imagen, dispositivos, y plataformas de programación al mercado y ha servido como facultad del vendedor en muchos cursos de la microscopia en el Agujero de Madera, el Puerto Frío del Muelle, y los Laboratorios Biológicos de la Isla Desierta del Montaje.

Ella obtuvo su Doctorado en la ingeniería química en la Universidad de California-Berkeley y estudió metabolismo de la célula cancerosa del pecho en condiciones hipóxicas, así que ella ha apreciado de largo la importancia de ambientes fisiológico relevantes. Ella ahora es el Director de la Gestión de Productos en la Ciencia Biológica de Essen, de una compañía del Sartorio y de vidas en Ann Arbor, Michigan.