Se det fullt föreställa, realtidsanalys av levande-celler

insights from industryKimberly WicklundDirector of Product ManagementEssen Bioscience

En intervju med Kimberley Wicklund som föras av James Ives, MPsych

Celler och cellväxelverkan är extremt komplexa och högt dynamiska. Please ger en överblick av utmaningarna som vänder mot forskare, när det analyserar dessa komplexa system.

Dina första dömer hit på en nyckel- utmaning: dynamik. Varje cell är en miniatyrfabrik som tar i rått materiellt (extracellular signalerar) och bearbetar den till jordbruksprodukter något (ett biologiskt svar). Men i motsats till en fabrik, som kan lätt tweakeds för att köra på stödja-statligt och för att se samma från dag till dagen, är celler dynamiska.

Om du använder celler för att utforska svar, hur vet du när svaret händer? Vad, om du missa den? Veta vad dina celler gör, och, när de gör, är det en nyckel- utmaning. En Annan utmaning är fysiologisk relevans. Om du ser cellen fodrar eller, primära cellkulturer, store smärtar tas uppehället dem i en jämn miljö.

Men därefter tas de i, och ut ur deras lyckliga hem som ska petas och stimuleras på analytiskt, instrumenterar. Hur påverkar fungerar dessa ändringar i miljö cell- vård- och? Som vi fortskrider in mot mer komplex, eller känsligt modellerar, det är inte endast viktigt villkorar att underhålla som är miljö-, jämnt för att hålla cellerna vid liv, men också för underhållande relevans till det original- biologiska systemet och för att se till reproducibility av ditt experiment.

En Annan utmaning, i att underhålla fysiologisk relevans, uppstår, när vi använder reagents för att avkänna biologiska ändringar av för att intressera. Mest reagents perturb den very biologin som vi utforskar. Det är viktigt att betrakta hur reagents påverkar cellen som är vård- och morfologi innan de använder dem med bosatt celler.

IncuCyte blandade HD-arrangerar gradvis contrat/fluorescence avbildar (10x) av en blandad stabil befolkning av celler för Gräsplan och för A549 NucLight för HT-1080 NucLight Röda.

Till för en tid sedan vad har använts som guldmyntfoten i analytiska metoder av cellbiologi?

För cellbiologi har nyckel- analytiska metoder involverat instrumenterar liksom mikroskop, flödar cytometers eller pläterar avläsare som används i samverkan med colorimetric, eller fluorescerande reagents som ska bistås i upptäckt av biologin av, intresserar.

Utveckling av fluorescerande proteiner, har varit naturligtvis en nyckel- befordran för att utföra cellanalys. Dessa proteiner kan constitutively uttryckas utan viktig söndring till det normalacelluppförande och riktigt ha möjliggjort levande-cell att avbilda.

Please ger en överblick av Incucyten S3 och dess särdrag.

IncuCyten® S3 är den enda realtidslevande-cellen som avbildar, och analyssystemet som automatiskt tillfångataganden och analyserar avbildar av bosatt celler runt om ta tid på, för dagar, veckor, eller månader, stundceller återstår ostörd insida per den standarda silkespapperkulturkuvösen.

IncuCyten har en unik, kompakt och mobil optisk design som låter det cellstaget stationär alltigenom experiment, som är avgörande för non-anhängare, eller den känsliga cellen skrivar liksom immuna celler eller neurons. Vårt att närma sig applikation-fokuseras, och cellen vård--fokuseras.

Via en för en tid sedan uppdaterad användare ha kontakt, uppnår IncuCyten ”går-upp och använder” status för levande-cell att avbilda och analys. Plusen IncuCyten uppnår denna på fjäll. En ny användare kan föra 96 - och 384 väl experiment i en materia av noterar och skapar därefter filmer, och graphing av metrik, som är publikationen och presentation-ordnar till med precis några, klickar.

Jag stillar minns min första dag på Essen var lärt I hur man gör för skrapasår för 96 brunn en analys genom att använda IncuCyten och vår Woundmaker.  Den tog inte mer, än en halvtimme av praktisk tid att kärna ur, att skapa 96 skrapor, satte microplaten i IncuCyten och ställer in programvaran för att få och automatiskt analysera.

Grafer började byggande omgående, riktigt realtidsanalys. Då vi avslutade oss, sade Jag att ”Är att det???”. Det var det, mycket enkelt och tillgängligt och mycket mycket kraftigt.

Förutom att förbättra produktivitet för individanvändaren, bemyndigar IncuCyten S3 ett helt forskninglag. Multipelanvändare kan köra multipelapplikationer på IncuCyten i parallellen, spenderad förminskande tid vänta en instrumentera för att vara tillgängliga. I tillägg är data tillgängliga avlägset till någon användare via obegränsat, frigör sammankopplade licenser.

Med den nya IncuCyten S3, är forskare kompetent att planera nya experiment tänkte inte föregående möjlighet. De har nu att ta fram till realtidslevande-cellen analys som erbjuder inte endast nya inblickar, men också genomgång och en strömlinjeformad användare erfar.

Please ger en överblick av betydelsen av `-realtids' levande-cell avbilda och analys? Varför är det den så viktiga uppehällelevande-cellen tar prov ganska än genom att använda tillvägagångssätt som förstör cellerna som del av den experimentella workflowen?

Ganska än ett singelkort, ser till fortlöpande analys att du missa aldrig ett kritisk svar eller växelverkan. Dessutom ger kinetic avbilda-baserad mätningar physiologically relevant data och djupare, bearbetar mer meningsfull inblickar in i den biologiska aktivet, och cell- fungera som inte kan uppnås med konventionella endpointanalyser.

Att få till en överenskommelse av ettanhörig svar med endpointanalyser kräver den ställer in av multipelanalyser och sammanlänkning av datan för att sätta tillsammans en föreställa av vad händde. Det är tidskrävande och dyr, och du har ingen kapacitet vidare att analysera ditt tar prov, när du har förat analysen.

Dessutom om din teknologi inte avbilda-baseras, ska du för att inte vara kompetent visuellt att validera några trender eller att bedöma outliers. Med realtidsavbilda och analys genom att använda non-perturbing reagents, kan varje brunnen eller skytteln analyseras med tiden för att avslöja koncentration-anhörig, eller cell-närmare detalj svar, som kan valideras med avbildar, och filmer och möjliggör realtidsbeslutsfattande.

Du har också gynna att dina celler inte förstörs under det experimentellt bearbetar och kan karakteriseras vidare genom att använda andra teknologier liksom flödescytometry.

Förutom inblicken som du når genom att använda den fortlöpande levande-cellen som avbildar, och analys, kan du också snabbt bedöma några outliers, som du kan utvärdera att kärna ur täthet och morfologi av dina celler på starten av experiment och alltigenom. Det kvalitets- kontrollerar aspekt av att utföra levande-cell analys kan inte förbises.

Kan Vilka applikationer vara utstuderade, när de använder Incucyten S3? Finns det begränsningar eller begränsningar?

IncuCyten S3 är kompatibel med en lång räcka av kulturskyttlar och applikationer. Det IncuCyte S3 Systemet kan användas för realtidscellövervakning och bevakning och att pröva den vård- cellen och viability, flyttning och invasion, plus en lång räcka av phenotypic cell-baserade analyser.

IncuCyten tar befolkning-baserad att närma sig till cellanalys. Om du intresseras, i att utforska subcellular strukturellt, specificerar med encell att närma sig, rekommenderar vi först att använda IncuCyten för att karakterisera dina celler, och att utforska variabler på befolkningen jämna och följ därefter upp med en högre upplösningsteknik liksom confocal microscopy.

IncuCyten har växande en snabbt samling av över 1.000 jämliket granskade artiklar, och nya applikationer som använder IncuCyten, publiceras fortlöpande.

Varför är det viktigt att vara kompetent att lämna dina celler inom kuvösen, med att avbilda utrustninginsida? Vilka fördelar finns det till denna metod?

En dag år sedan, gick observerade en av våra grundarear runt om labbet och forskare att gå fram och tillbaka till kuvösen, att ta celler ut och att komma med dem till en instrumentera som ska kontrolleras.

Honom ”Frågade du funderare cellerna gillar det? Skulle det inte var bättre, om du kunde se att dina celler att fördriva dem var sammanträdeinsida kuvösen?”, Det är början av den IncuCyte berättelsen och ett göra perfektexempel av ”den tänkande designen” - observera användaren i deras naturliga miljö och lös ett problem med innovation.

Silkespapperkulturkuvösen är ett högt betrott och preciserar lappar av utrustning det uppehällen som, per stor volym av gasa på en anslåblandning, temperaturen och fuktighet. Den har planlagt vid liv uppehälleceller.

Genom att sätta den IncuCyte insidan kuvösen, utnyttjar vi den betrodda miljö. Naturligtvis, finns det instrumenterar, som har inbyggt miljö- att kontrollera eller tilläggtillbehör, men preciserar reglering av väsentligen mindre volymer av gasar blandningar kan vara ohanterligt och svårt.

Hur avbildar bearbeta och analysprogramvaruarbete som ska hjälpas att automatisera experimentell analys? Vilka applikationer finns det för denna automatiserade analysprogramvara?

Jag har spenderat en väsentlighet portionr av min karriär som lärer att olikt avbilda bearbeta och analysprogramvaruplattformar och att vägleda forskare på deras användning. Många programvaruplattformar tar ”bearbetar boxas” att närma sig.

Med ett traditionellt avbilda system måste Jag först att ta kliver för att kalibrera avbildar och korrekta kulturföremål från det avbilda apparat- och belysningsystemet, då korrekta kulturföremål från ta prov sig själv, då figurerar ut hur man drar ut min särdrag av intresserar med en blända samling av avbildar att bearbeta filtrerar, och slutligen, fungerar Jag till och med ett sortiment av metrik för att analysera….,en singel avbildar.

Till repetition detta tillvägagångssätt, bygger Jag en skriva, eller hopefully finns det något grupperar den processaa menyn. Den är ohanterlig, till något att säga least, och den constantly pröva I-förmiddagen att minnas exakt vad kliver Mig, tog och var mitt avbildar, är.

IncuCyten erbjuder flera fördelar. Först har instrumentera en processaa kalibrering som korrigerar kulturföremål automatiskt. Understödja programvaran har kontakt gåvor bearbetar som endast dig, räcker behov för uppgiften på.

Härleda djupare inblickar med realtidslevande-cell analys. (A) Få Automatiskt avbildar med tiden, avbildar bedömer bruk (B) IncuCyte® VesselView att beskåda allra lägen i skytteln strax och snabbt experimentella resultat som är positiva zoom på avbildar in av intresserar (C) identifierar automatiskt regioner av intresserar via maskerar (D) frambringar presentation-ordnar till timelapsegrafer, och (E) beskåda allt 96 - eller 384 väl kinetic trender strax med IncuCyte® PlateGraph och exportera data för att beräkna EC50, eller svaret IC50 värderar.

Om du gör en cellspridninganalys som räknar röda klickar av kärn- protein, framlägger vi dig bearbetar för att räkna röda klickar. Om analysen är mer komplex, likt analysera neuriteföljd, ger vi dig bearbetar gör att som väl. Third appliceras analysen till ditt hela experiment, pekar hela tid, och allt väller fram automatiskt.

Användare är kompetent att ställa in en bearbeta definition en tid genom att använda ett representativt experiment och applicerar därefter den vecka efter veckan, månad efter månad med en klicka av en knäppas. Vara men bestämdast inte least, alla av avbildar, och analyser lagras neatly tillsammans i en searchable databas.

Kan Vad nås, genom att observera cellmorfologi och cellförehavanden under studier?

Observera ändringar i cellmorfologi och rörelse ge inblick in i många det normala, och patologiskt bearbetar den inklusive immuna svars- och tumormetastasisen. Kapaciteten till studien dessa ändringar kinetically och i physiologically relevant villkorar är relevant till överenskommelse verkställer av drogbehandlingar och följande cell- svar och att låta dig exakt precisera när dessa ändringar uppstår.

Visuellt hjälpmedelbedömningen av cellmorfologi och rörelse, verifierar inte endast de kvantitativa datan, utan låter ultimately för extra phenotypic information för att profilera cell-närmare detalj och Time-anhörig biologisk aktivitet.

Vad rymmer framtiden för IncuCyte S3 teknologi? Hur ska forskare för denna mer ytterligare hjälp för att föra experiment i framtiden?

Vi har några spännande utvecklingar framåt. Stunder som Jag inte kan ge för mycket, specificerar, oss bedömer aktivt mer komplex modellerar liksom spheroids och också iPSC-härledde celler, liksom neurons. Vi är alltid driftiga in mot mer fysiologisk relevans, och djupare inblick in i fungerar. Se till att följa oss på den aktuella Facebook och Linkedin uppehället med våra aktiviteter!

Var kan avläsare finna mer information?

Behaga besök vår website på www.incucyte.com.

Om Kimberley Wicklund

Kimberly Wicklund spenderade ett årtiondearbete med forskningmicroscopymaskinvara och programvara före att sammanfoga Essen i 2015. Hon började henne karriären i vetenskaperna om olika organismers beskaffenhetinstrumentation som en applikationforskare och en chef för teknisk service, innan hon landade i produktledning.

Hon har lanserat ett nummer av avbilda system, apparater och programvaruplattformar till marknadsföra och har tjänat som som försäljare som fakulteten på många microscopy jagar på Trä Spela golfboll i hål, Fjädrar Monterar Förkylning Hamn och Biologiska Laboratorium för Öde ö.

Hon erhöll henne PhD i kemiskt iscensätta på Universitetar av Kalifornien-Berkeley, och utstuderad bröstcancercellämnesomsättning i hypoxic villkorar, så hon long har long uppskattat betydelsen av physiologically relevant miljöer. Hon är nu Direktören av ProduktLedning på Essen Bioscience, ett Sartoriusföretag och liv i Ann Arbor, Michigan.