La méthode neuve de stabilisation de sang prolonge la durée de vie des prises de sang pour le profilage de CTC

Une méthode neuve de stabilisation de sang, développée au centre de Massachusetts General Hospital pour concevoir en médicament (MGH-CEM), prolonge de manière significative la durée de vie des prises de sang pour trier microfluidic et le profilage de transcriptome des cellules tumorales de diffusion rares (CTCs), les cellules cancéreuses vivantes a transporté dedans la circulation sanguine. Ce travail, qui surmonte un barrage significatif à la traduction des technologies liquides de biopsie pour l'oncologie de précision et d'autres applications, était récent publié dans des transmissions de nature.

La seule méthode approuvée par le FDA de stabilisation de sang pour des analyses de CTC est la fixation chimique, qui détruit les cellules et dégrade fortement les biomolécules sensibles, particulièrement ARN. « Chimiquement la réparation des cellules vainc le but de les employer des voies cliniquement signicatives, » dit l'auteur important Keith Wong, PhD, du MGH-CEM. « Nous devons pouvoir étudier le transcriptome des cellules tumorales pour comprendre, par exemple, si la tumeur tourne certaines voies moléculaires mise en marche/arrêt en réponse aux demandes de règlement. Améliorez encore, nous voulons cultiver ces cellules pour le contrôle personnalisé de médicament, et faire que nous avons besoin de cellules sous tension. »

Quand l'isolement de ces cellules extrêmement fragiles et rares du sang frais et non transformé, calant est tout. Même les modifications mineures de la qualité d'une prise de sang - telle que la perte de cellules rouges, d'activation de leucocyte ou de formation de caillots - affectent grand cellule-trier des mécanismes et la qualité des biomolécules d'isolement pour le dépistage du cancer. Selon des études publiées, les facteurs importants tels que tout le numéro de CTCs dans un échantillon et le numéro avec de l'ARN de haute qualité diminuent par environ 50 pour cent dans les quatre premières à cinq heures après que l'échantillon est prélevé.

Wong explique, « au général de Massachusetts, nous avons le luxe d'être ainsi intégré avec l'équipe clinique que nous pouvons traiter des spécimens de sang dans le laboratoire type dans une heure ou deux après qu'ils soient entraînés. Mais pour effectuer à ceux-ci des technologies liquides de biopsie les essais en laboratoire courants pour le reste du monde, nous avons besoin de voies de maintenir le sang vivant beaucoup plus longtemps que plusieurs heures, puisque ces analyses mieux sont exécutées dans les laboratoires centraux pour des raisons de rentabilité et de reproductibilité. »

L'équipe de MGH a adopté une approche globale qui vise à préserver le sang dans sa condition indigène avec l'altération minimale. le Co-fil l'auteur Shannon Tessier, PhD, du MGH-CEM indique, « nous a voulu ralentir l'horloge biologique autant que possible à l'aide de l'hypothermie, mais ce n'est pas aussi simple qu'il retentit. La basse température est des moyens puissants de diminuer le métabolisme, mais une foule d'effets secondaires non désirés se produisent en même temps. Par certains côtés, ces défis sont assimilés à ceux que nous faisons face dans la conservation d'organe, où nous devons optimiser des stratégies pour un mélange très complexe des cellules. »

Pour atteindre ces objectifs, l'équipe d'abord a systématiquement analysé les conditions de stockage qui préservent de façon optimale la viabilité de la diverse cellule saisissent le sang total. Le défi important, il s'est avéré, était activation de plaquette. Wong explique, « nous préservent le sang très bien, y compris le fonctionnement de coagulation des plaquettes. Mais malheureusement, le refroidissement entraîne l'activation profonde des plaquettes. Maintenant nous avons besoin d'une approche visée pour des plaquettes ainsi elles ne forment pas de mauvais caillots dans le sang microfluidic triant le dispositif. »

L'équipe a alors analysé un grand choix d'agents antiplaquettes et a constaté que les inhibiteurs de la glycoprotéine IIb/IIIa, qui sont fréquemment employés en médicament cardiovasculaire, étaient extrêmement efficaces en contrant la totalisation refroidir-induite de plaquette. L'équipe enregistre que l'emploi de ces stratégies - en plus d'une brève demande de règlement de chélation d'ion, qui retire activée, les plaquettes collantes des leucocytes - permet le sang total préservé pour que trois jours soient traités comme si il ont été frais entraînés, avec la pureté très grande et pratiquement aucune perte dans le numéro de CTCs.

Tessier dit, « l'accomplissement critique ici est que les cellules tumorales d'isolement contiennent l'ARN de haute qualité qui convient pour exiger des analyses moléculaires, telles que le qPCR unicellulaire, l'ACP digital de gouttelette et l'ARN ordonnançant. »

Utilisant des spécimens de sang d'un groupe de 10 patients présentant le cancer métastatique de la prostate, l'équipe comparée l'utilisation du sang préservé contre les échantillons frais appareillés provenant des mêmes patients pour l'analyse de CTC. De façon générale, il y avait 92 pour cent de convention dans le dépistage de 12 transcriptions de gène de cancer-détail entre les échantillons frais et préservés, et il y avait 100 pour cent de convention dans le dépistage d'une transcription AR-V7 appelé. Les études récent publiées indiquent que la présence d'AR-V7 ARNm dans le cancer de la prostate CTCs prévoit la résistance aux inhibiteurs de récepteur aux androgènes, indiquant que la chimiothérapie peut être une meilleure option pour de tels patients.

« La capacité de préserver le sang pendant plusieurs jours et de pouvoir toujours capter ce biomarqueur cliniquement approprié est remarquable, » dit le co-auteur David Miyamoto, DM, PhD, centre de lutte contre le cancer de MGH. « C'est très passionnant pour des cliniciens, parce qu'AR-V7 ARNm peut seulement être trouvé utilisant CTCs et pas avec la tumeur de diffusion ADN ou d'autres analyses sans cellule. »

L'équipe met en valeur la nature universelle de cette approche de stabilisation par l'indication sa compatibilité avec CTC-iChip le dispositif microfluidic hautement exigeant, qui isole des cellules tumorales par le démontage rapide des globules sanguins, impliquant le choc potentiel de ce travail s'étend au delà du dépistage du cancer. Wong dit, « avec des découvertes passionnantes dans l'immunothérapie, greffe de cellules souches, et le médicament régénérateur - dans quel sang périphérique est souvent la source des cellules pour des analyses ou ex vivo l'extension fonctionnelles - la capacité de préserver les cellules sous tension soulagera grand des chronologies logistiques et réduira le coût d'analyses cellulaires complexes. »

Source : http://www.massgeneral.org/about/pressrelease.aspx?id=2196