O método novo da estabilização do sangue prolonga o tempo de amostras de sangue para o perfilamento do CTC

Um método novo da estabilização do sangue, desenvolvido no centro do Hospital Geral de Massachusetts para projetar na medicina (MGH-CEM), prolonga significativamente o tempo de amostras de sangue para a classificação microfluidic e o perfilamento do transcriptome de pilhas de circulação raras do tumor (CTCs), células cancerosas vivas levou dentro a circulação sanguínea. Este trabalho, que supera uma barreira significativa à tradução de tecnologias líquidas da biópsia para a oncologia da precisão e as outras aplicações, foi publicado recentemente em comunicações da natureza.

O único método aprovado pelo FDA da estabilização do sangue para ensaios do CTC é a fixação química, que mata as pilhas e degrada pesadamente biomoléculas sensíveis, especialmente RNA. “Quimicamente fixar as pilhas derrota a finalidade de usá-las em maneiras clìnica significativas,” diz o autor principal Keith Wong, PhD, do MGH-CEM. “Nós precisamos de poder estudar o transcriptome de pilhas do tumor para compreender, por exemplo, se o tumor está girando determinados caminhos moleculars de ligar/desligar em resposta aos tratamentos. Melhore ainda, nós queremos cultivar estas pilhas para o teste personalizado da droga, e fazê-las que nós precisamos pilhas vivas.”

Quando isolar estas pilhas extremamente frágeis e raras do sangue fresco, não processado, cronometrando for tudo. Mesmo as mudanças menores na qualidade de uma amostra de sangue - tal como a divisão de pilhas vermelhas, de activação da leucócito ou de formação do coágulo - afectam extremamente a pilha-classificação de mecanismos e da qualidade das biomoléculas isoladas para a detecção do cancro. De acordo com estudos publicados, os factores importantes tais como o número total de CTCs em uma amostra e o número com diminuição de alta qualidade do RNA perto ao redor 50 por cento dentro das primeiras quatro a cinco horas após a amostra são tomados.

Wong explica, “na massa. General, nós temos o luxo assim da integração com a equipe clínica que nós podemos processar espécimes do sangue no laboratório tipicamente dentro de uma hora ou de dois depois que são desenhados. Mas para fazer a estas tecnologias líquidas da biópsia testes de laboratório rotineiros para o resto do mundo, nós precisamos maneiras de manter durante mais tempo o sangue vivo do que diversas horas, desde que estes ensaios são executados melhor em laboratórios centrais em razão da rentabilidade e da reprodutibilidade.”

A equipe de MGH tomou uma aproximação detalhada que apontasse preservar o sangue em seu estado nativo com alterações mínimas. o Co-chumbo autor Shannon Tessier, PhD, do MGH-CEM diz, “nós quis retardar tanto quanto possível o pulso de disparo biológico usando a hipotermia, mas aquele não é tão simples quanto soa. A baixa temperatura é meios poderosos diminuir o metabolismo, mas um anfitrião de efeitos secundários indesejáveis ocorre ao mesmo tempo. De certa forma, estes desafios são similares àqueles que nós enfrentamos na preservação do órgão, onde nós temos que aperfeiçoar estratégias para uma mistura muito complexa de pilhas.”

Para conseguir estes objetivos, a equipe primeiramente analisou sistematicamente as condições de armazenamento que preservam óptima a viabilidade da pilha diversa dactilografam dentro o sangue inteiro. O desafio o mais grande, despejou, foi activação da plaqueta. Wong explica, “nós está preservando o sangue muito bem, incluindo a função da coagulação das plaqueta. Mas infelizmente, refrigerar causa a activação profunda das plaqueta. Agora nós precisamos uma aproximação visada para plaqueta assim que não formam coágulos desagradáveis no sangue microfluidic que classifica o dispositivo.”

A equipe então analisou uma variedade de agentes antiplatelet e encontrou que os inibidores da glicoproteína IIb/IIIa, que são usados freqüentemente na medicina cardiovascular, eram extremamente eficazes em opr a agregação refrigerar-induzida da plaqueta. A equipe relata que aquela usar estas estratégias - além do que um breve tratamento da quelação do íon, que remova ativada, plaqueta pegajosas das leucócito - concede a sangue inteiro preservado para que três dias estejam processados como se foi desenhada recentemente, com pureza muito alta e virtualmente nenhuma perda no número de CTCs.

Tessier diz, “a realização crítica aqui é que as pilhas isoladas do tumor contêm o RNA de alta qualidade que é apropriado para exigir ensaios moleculars, tais como arranjar em seqüência digital do qPCR da único-pilha, do PCR da gota e do RNA.”

Usando espécimes do sangue de um grupo de 10 pacientes com cancro da próstata metastático, a equipe comparou o uso do sangue preservado contra amostras frescas emparelhadas dos mesmos pacientes para a análise do CTC. Total, havia 92 por cento de acordo na detecção de 12 transcritos cancro-específicos do gene entre as amostras frescas e preservadas, e havia 100 por cento de acordo na detecção de um transcrito chamado AR-V7. Os estudos recentemente publicados relatam que a presença de AR-V7 mRNA no cancro da próstata CTCs prevê a resistência aos inibidores do receptor do andrógeno, indicando que a quimioterapia pode ser uma opção melhor para tais pacientes.

“A capacidade para preservar por vários dias o sangue e ainda para poder pegarar este biomarker clìnica relevante é notável,” diz o co-autor David Miyamoto, DM, PhD, centro do cancro de MGH. “Isto é muito emocionante para clínicos, porque AR-V7 mRNA pode somente ser detectado usar CTCs e não com ADN de circulação do tumor ou outros ensaios sem célula.”

A equipe destaca a natureza universal desta aproximação da estabilização apontando a sua compatibilidade com CTC-iChip o dispositivo microfluidic altamente de exigência, que isola pilhas do tumor pela remoção rápida dos glóbulos, implicando o impacto potencial deste trabalho estende além da detecção do cancro. Wong diz, “com descobertas emocionantes na imunoterapia, transplantação da célula estaminal, e a medicina regenerativa - em que sangue periférico é frequentemente a fonte de pilhas para ensaios ou ex vivo a expansão funcional - a capacidade para preservar pilhas vivas facilitará extremamente os espaços temporais logísticos e reduzirá o custo de ensaios baseados em celulas complexos.”