El nuevo método de la estabilización de la sangre prolonga la vida útil de las muestras de sangre para el perfilado del adaptador de canal a canal

Un nuevo método de la estabilización de la sangre, desarrollado en el centro del Hospital General de Massachusetts para dirigir en el remedio (MGH-CEM), prolonga importante la vida útil de las muestras de sangre para la clasificación microfluidic y el perfilado del transcriptome de las células de circulación raras del tumor (CTCs), las células cancerosas llevó hacia adentro la circulación sanguínea. Este trabajo, que supera una barrera importante a la traslación de las tecnologías líquidas de la biopsia para la oncología de la precisión y otros usos, fue publicado recientemente en comunicaciones de la naturaleza.

El único método aprobado por la FDA de la estabilización de la sangre para los análisis del adaptador de canal a canal es la fijación química, que mata a las células y degrada pesado biomoléculas sensibles, especialmente ARN. “Químicamente reparar las células derrota el propósito de usarlas en maneras clínico significativas,” dice al autor importante Keith Wong, doctorado, del MGH-CEM. “Necesitamos poder estudiar el transcriptome de las células del tumor para entender, por ejemplo, si el tumor está girando ciertos caminos moleculares con./desc. en respuesta a tratamientos. Mejore todavía, queremos cultivar estas células para la prueba personalizada de la droga, y hacer que necesitamos las células vivas.”

Cuando el aislamiento de estas células extremadamente frágiles y raras de la sangre fresca, sin procesar, cronometrando es todo. Incluso los cambios de menor importancia en la calidad de una muestra de sangre - tal como la avería de glóbulos rojos, de la activación del leucocito o de la formación del coágulo - afectan grandemente a célula-clasificación mecanismos y la calidad de las biomoléculas aisladas para la detección del cáncer. Según estudios publicados, los factores importantes tales como el número total de CTCs en una muestra y el número con la disminución de alta calidad del ARN cerca el alrededor 50 por ciento en el plazo de las primeras cuatro a cinco horas después de la muestra se toman.

Wong explica, “en el general de Massachusetts, tenemos el lujo tan de la integración con las personas clínicas que podemos tramitar especímenes de la sangre en el laboratorio típicamente dentro de una hora o de dos después de que se drenen. Pero para hacer estas tecnologías líquidas de la biopsia los pruebas de laboratorio rutinarios para el resto del mundo, necesitamos maneras de mantener sangre activa durante mucho más tiempo que varias horas, puesto que estos análisis se realizan mejor en laboratorios centrales por razones de rentabilidad y reproductibilidad.”

Las personas de MGH tomaron una aproximación completa que apunta preservar sangre en su estado nativo con cambios mínimos. el Co-guía autor Shannon Tessier, doctorado, del MGH-CEM dice, “nosotros quiso retrasar el reloj biológico tanto cuanto sea posible usando hipotermia, pero ése no es tan simple como suena. La baja temperatura es los medios potentes de disminuir metabolismo, pero un ordenador principal de efectos secundarios indeseados ocurre al mismo tiempo. En cierto modo, estos retos son similares a ésos que hacemos frente en la preservación del órgano, donde tenemos que optimizar las estrategias para una mezcla muy compleja de células.”

Para lograr estas metas, las personas primero analizaban sistemáticamente las condiciones de almacenamiento que preservan óptimo la viabilidad de la célula diversa pulsan hacia adentro sangre entera. El reto más grande, resultó, era activación de la plaqueta. Wong explica, “nosotros está preservando la sangre muy bien, incluyendo la función de la coagulación de plaquetas. Pero lamentablemente, el enfriamiento causa la activación profunda de plaquetas. Ahora necesitamos una aproximación apuntada para las plaquetas así que no forman coágulos desagradables en la sangre microfluidic clasificación el dispositivo.”

Las personas después analizaban una variedad de agentes antiplaquetarios y encontraron que los inhibidores de la glicoproteína IIb/IIIa, que se utilizan con frecuencia en remedio cardiovascular, eran extremadamente efectivos en contradecir la agregación enfriar-inducida de la plaqueta. Las personas denuncian que usar estas estrategias - además de un tratamiento abreviado de la quelación del ión, que quita haber activado, las plaquetas pegajosas de leucocitos - permite la sangre entera preservada para que tres días sean tramitados como si fuera drenado recientemente, con pureza muy elevada y virtualmente ninguna baja en el número de CTCs.

Tessier dice, “el logro crítico aquí es que las células aisladas del tumor contienen el ARN de alta calidad que es conveniente para exigir análisis moleculares, tales como secuencia digital unicelular del qPCR, de la polimerización en cadena de la gotita y del ARN.”

Usando especímenes de la sangre de un grupo de 10 pacientes con el cáncer de próstata metastático, las personas compararon el uso de la sangre preservada contra muestras frescas emparejadas de los mismos pacientes para el análisis del adaptador de canal a canal. Total, había el 92 por ciento de acuerdo en la detección de 12 transcripciones cáncer-específicas del gen entre las muestras frescas y preservadas, y había el 100 por ciento de acuerdo en la detección de una transcripción llamada AR-V7. Los estudios recientemente publicados denuncian que la presencia de AR-V7 mRNA en el cáncer de próstata CTCs predice resistencia a los inhibidores del receptor del andrógeno, indicando que la quimioterapia puede ser una mejor opción para tales pacientes.

“La capacidad de preservar la sangre durante varios días y todavía de poder tomar este biomarker clínico relevante es notable,” dice al co-autor David Miyamoto, Doctor en Medicina, doctorado, centro del cáncer de MGH. “Esto es muy emocionante para los clínicos, porque AR-V7 mRNA se puede descubrir solamente usando CTCs y no con la DNA de circulación del tumor u otros análisis sin células.”

Las personas destacan la naturaleza universal de esta aproximación de la estabilización apuntando a su compatibilidad con Adaptador de canal a canal-iChip el dispositivo microfluidic altamente exigente, que aísla las células del tumor con el retiro rápido de glóbulos, implicando el impacto potencial de este trabajo extienden más allá de la detección del cáncer. Wong dice, “con rupturas emocionantes en la inmunoterapia, trasplante de la célula madre, y el remedio regenerador - en qué sangre periférica es a menudo la fuente de las células para los análisis o ex vivo la extensión funcionales - la capacidad de preservar las células vivas facilitará grandemente cronologías logísticas y reducirá el costo de análisis célula-basados complejos.”