Les chercheurs enregistrent des avances techniques dans la production des vaccins de VIH

La recherche sur le VIH au cours de la dernière décennie a mené à beaucoup d'idées prometteuses pour que les vaccins évitent l'infection par le virus du sida, mais très peu de vaccins de candidat ont été examinés dans les tests cliniques. Une raison de ceci est la difficulté technique des vaccins de fabrication basés sur les protéines d'enveloppe du virus, selon Phil Berman, qui a abouti le développement d'une composante importante du seul vaccin pour avoir montré n'importe quelle efficacité contre le VIH dans un test clinique.

Berman, professeur de Baskin du bureau d'études biomoléculaire à UC Santa Cruz, a maintenant développé des méthodes neuves pour la production des vaccins de VIH. Son approche résout les problèmes techniques importants qui ont damné l'inducteur. Berman a décrit les méthodes neuves, et les vaccins de candidat que son laboratoire a produit, dans un entretien à une conférence sur des vaccins de VIH se sont retenus la semaine dernière au Canada (« technologies émergentes dans la découverte et le développement vacciniques, » une réunion conjointe avec le « progrès et des voies vers un vaccin efficace de VIH, » du 28 janvier au 1er février dans Banff, Alberta, une partie de la suite globale de santé de colloques trapézoïdaux).

Des « douzaines de candidats vacciniques intéressants ont été décrites, mais les la plupart n'ont pas été vérifiées chez l'homme parce qu'il n'a pas précédemment été possible de les fabriquer abordable et en temps utile, » Berman ont dit. « La technologie que nous avons développée devrait briser l'embouteillage dans la mise au point de vaccin de VIH, parce qu'elle diminue énormément le temps, améliore la puissance, et abaisse le coût. »

Le laboratoire de Berman pouvait employer la robotique pour diminuer le temps requis pour produire les lignées cellulaires stables, requises pour effectuer les protéines pour un vaccin, tout en en même temps grand augmentant quelle quantité de protéine les lignées cellulaires peuvent produire. La puissance améliorée permet pour réduire la taille du bioréacteur requis pour effectuer le vaccin pour de grands tests cliniques--de 200 - aux récipients de 10.000 litres à 50 - ou 100 récipients de litre--ayant pour résultat l'épargne énorme dans le matériel a exigé et coût de matériaux. De plus, le laboratoire de Berman pouvait produire les lignées cellulaires qui effectuent des protéines d'enveloppe de VIH avec le bon genre de composantes d'hydrate de carbone (glycans appelés) requises pour une réponse immunitaire efficace.

« Les hydrates de carbone fixés à la protéine sont réellement importants, quelque chose personne réalisé jusque récemment, » Berman a dit. « La voie conventionnelle d'effectuer ces vaccins de protéine d'enveloppe a comporté le genre incorrect d'hydrates de carbone. Nous savons maintenant que détruit plusieurs des sites antigéniques importants identifiés par les anticorps protecteurs. »

Les lignées cellulaires dérivées des cellules chinoises d'ovaire (CHO) de hamster sont les industriellement compatibles utilisées aux protéines recombinées complexes de produit pour l'usage thérapeutique. Ces cellules sont également utiles pour la production des vaccins de VIH. Le gène pour la protéine désirée est transféré dans des cellules de CHO dans une transfection appelée de processus, et des dizaines de milliers de cellules de transfecté sont interviewées pour trouver les quelques cellules rares qui produisent un grand nombre de protéine. Les meilleures lignées cellulaires sont développées dans de grands lots, dans un procédé assimilé à la fermentation de par levure pour effectuer la bière, et les protéines sont alors isolées et épurées.

Le laboratoire de Berman a développé une méthode robotisée neuve pour isoler les lignées cellulaires productrices de haut effectuant des protéines d'enveloppe de VIH. Ceci a diminué le temps requis pour produire les lignées cellulaires stables à partir de 18 à 24 mois à juste 2 ou 3 mois, alors que l'augmentation fournit par un facteur de 100 à 200. Ces améliorations sont en comparaison de l'expérience précédente de Berman produisant le vaccin d'AIDSVAX, d'abord chez Genentech et puis chez VaxGen.

AIDSVAX était une composante d'un régime vaccinique expérimental utilisé dans un test clinique de grande puissance connu sous le nom de RV144, qui a montré 31 pour cent d'efficacité en évitant des infections à VIH neuves. Les résultats RV144 ont prouvé que la protection a été marquée avec des anticorps à un certain segment d'une protéine d'enveloppe de VIH gp120 appelé. L'autre recherche, cependant, a indiqué que plusieurs des anticorps les plus efficaces (anticorps grand de neutralisation capables de neutraliser beaucoup de différentes tensions de VIH) identifient réellement les composantes d'hydrate de carbone (glycans) fixées à gp120.

« Nous nous sommes rendus compte que le vaccin originel d'AIDSVAX a eu complet le mauvais type d'hydrate de carbone, et que nous pourrions améliorer le niveau de protection si nous pourrions trouver une voie de l'effectuer avec le type correcte d'hydrate de carbone, » Berman disait.

Ainsi lui et l'étudiant de troisième cycle Gabriel Byrne se sont mis à produire une lignée cellulaire qui peut produire les glycans exceptionnels trouvés sur des protéines d'enveloppe de VIH plutôt que les glycans complexes que des cellules de CHO produisent normalement. Ceci a été rendu possible par la technologie neuve puissante de retouche de gène connue sous le nom de CRISPR/Cas9. Le laboratoire de Berman a employé CRISPR pour produire une lignée cellulaire neuve ils MGAT appelé CHO, qui produit des protéines manquant des glycans complexes contenant l'acide sialique et enrichis pour le type simple « de mannose élevé » trouvé sur des protéines d'enveloppe de VIH. Un avantage inattendu de cette lignée cellulaire neuve était qu'il a activé un procédé plus simple et moins cher pour récupérer et épurer les protéines.

Les « gens utilisés pour penser des hydrates de carbone ne sont pas immunogènes, mais le VIH tourne tout sur sa tête, et il s'avère que les anticorps les plus importants sont dirigés vers cet hydrate de carbone exceptionnel, » Berman a dit. « Nous pouvons maintenant effectuer des vaccins avec lui pour la première fois, et nous avons produit une version améliorée du vaccin utilisé dans l'essai RV144. Notre espoir est qu'il portera l'efficacité de 31 pour cent à plus grand que 50 pour cent, le susceptible de niveau exigé pour l'inscription de produit. »

Le laboratoire de Berman a actuel deux lignées cellulaires qu'il a dites sont prêt à commencer à produire des vaccins à grande échelle. Il maintenant recherche des associés et les finance pour les introduire dans des tests cliniques. Un vaccin est une version améliorée d'AIDSVAX qui comporte le bon genre de glycans. L'autre est effectué à partir d'une tension du virus Clade appelé C qui est répandu l'Afrique méridionale et en Inde et représente la majorité d'infections à VIH neuves mondiales.

Les chercheurs ont prolongé pour employer le vaccin d'AIDSVAX dans les études cliniques parce qu'il a été si difficile d'effectuer les vaccins neufs de VIH, Berman a dit, notant qu'il y a eu 14 telles études depuis que les résultats RV144 ont été relâchés en 2009. « Ils emploient toujours que le même vieux vaccin que nous avons effectué au début des années 90. Bien que la stabilité et la sécurité du produit soit testament à la qualité du vaccin que nous avons effectué, on exige des vaccins neufs qui tirent profit de tous ce que nous avons appris depuis lors, » il a dit. « Il met l'accent sur juste la nécessité de trouver plus de moyen efficace d'effectuer un vaccin de VIH. »

En plus de l'entretien de Berman, plusieurs autres membres de son laboratoire ont présenté des détails de leurs méthodes et découvertes à la conférence. Berman a dit qu'ils comptent publier leurs découvertes en plusieurs journal dans le courant de l'année. Cette recherche a été financée par des concessions importantes de l'institut national de l'allergie et des maladies infectieuses aux instituts de la santé nationaux.

Source : http://www.ucsc.edu/