I ricercatori riferiscono gli avanzamenti tecnici nella produzione dei vaccini del HIV

La ricerca sul HIV negli ultimi dieci anni piombo a molte idee di promessa affinchè i vaccini impedisca l'infezione dal virus dell'immunodeficienza acquisita, ma molto pochi vaccini del candidato sono stati analizzati nei test clinici. Una ragione per questa è la difficoltà tecnica dei vaccini di fabbricazione basati sulle proteine di rivestimento del virus, secondo Phil Berman, che piombo lo sviluppo di una componente importante di solo vaccino per indicare tutta l'efficacia contro il HIV in un test clinico.

Berman, il professore di Baskin di assistenza tecnica biomolecolare al UC Santa Cruz, ora ha messo a punto i nuovi metodi per la produzione dei vaccini del HIV. Il suo approccio risolve i problemi tecnici importanti che hanno dannato il campo. Berman ha descritto i nuovi metodi ed i vaccini che del candidato il suo laboratorio ha prodotto, in una conversazione ad una conferenza sui vaccini del HIV hanno tenuto la settimana scorsa nel Canada (“tecnologie di emergenza nella scoperta e nello sviluppo vaccino,„ una riunione congiunta con “il progresso e vie verso un efficace vaccino del HIV,„ dal 28 gennaio al 1° febbraio in Banff, in Alberta, parte della serie globale di salubrità dei simposi trapezoidali).

“Dozzine di candidati vaccino interessanti sono stati descritti, ma la maggior parte non sono stati provati in esseri umani perché precedentemente non è stato possibile fabbricarli accessibile e tempestivamente,„ Berman hanno detto. “La tecnologia che ci siamo sviluppati dovrebbe rompere l'intoppo nello sviluppo del vaccino del HIV, perché immensamente accorcia il tempo, migliora il rendimento ed abbassa il costo.„

Il laboratorio di Berman poteva usare la robotica per accorciare il tempo richiesto per produrre le linee cellulari stabili, state necessarie per fare le proteine per un vaccino, mentre allo stesso tempo notevolmente aumentava quanto della proteina le linee cellulari possono produrre. Il rendimento migliore permette di diminuire la dimensione del bioreattore stato necessario per fare il vaccino per i grandi test clinici--da 200 - alle imbarcazioni da 10.000 litri a 50 - o 100 imbarcazioni di litro--con conseguente risparmio tremendo nella strumentazione richiesta e nel costo dei materiali. Inoltre, il laboratorio di Berman poteva creare le linee cellulari che preparano le proteine di rivestimento del HIV con il genere di destra di componenti del carboidrato (chiamate glycans) state necessarie per un'efficace risposta immunitaria.

“I carboidrati fissati alla proteina sono realmente importanti, qualcosa nessuno realizzato fino ad oggi,„ Berman ha detto. “Il modo convenzionale di fabbricazione dei questi vaccini della proteina di rivestimento ha compreso il genere sbagliato di carboidrati. Ora sappiamo che distrutto molti dei siti antigenici importanti riconosciuti dagli anticorpi protettivi.„

Le linee cellulari derivate dalle celle cinesi dell'ovaia (CHO) del criceto sono lo standard industriale utilizzato per produrre le proteine recombinanti complesse per uso terapeutico. Queste celle sono egualmente utili per la produzione dei vaccini del HIV. Il gene per la proteina desiderata è trasferito nelle celle di CHO in un trattamento chiamato transfezione e decine di migliaia di celle transfected sono schermate per trovare le poche celle rare che producono un gran numero di proteina. Le migliori linee cellulari si sviluppano nei grandi batch, in un trattamento simile a fermento per produrre la birra e le proteine poi sono isolate e depurate.

Il laboratorio di Berman ha messo a punto un nuovo metodo robot per isolare le linee cellulari producenti alta che preparano le proteine di rivestimento del HIV. Ciò ha accorciato il tempo richiesto per produrre le linee cellulari stabili da 18 a 24 mesi ad appena 2 o 3 mesi, mentre aumentare rende da un fattore di 100 - 200. Quei miglioramenti sono in confronto all'esperienza precedente di Berman che crea il vaccino di AIDSVAX, in primo luogo a Genentech e poi a VaxGen.

AIDSVAX era una componente di un regime vaccino sperimentale utilizzato in un test clinico su grande scala conosciuto come RV144, che ha mostrato 31 per cento di efficacia nell'impedire le nuove infezioni HIV. I risultati RV144 hanno indicato che la protezione è stata correlata con gli anticorpi ad un determinato segmento di una proteina di rivestimento del HIV chiamata gp120. L'altra ricerca, tuttavia, ha rivelato che molti degli anticorpi più potenti (anticorpi largamente di neutralizzazione capaci di neutralizzazione dei molti sforzi differenti del HIV) realmente riconoscono le componenti del carboidrato (glycans) fissate a gp120.

“Abbiamo rend contoere che il vaccino originale di AIDSVAX ha avuto il tipo completamente sbagliato di carboidrato e che potremmo migliorare il livello di protezione se potessimo trovare un modo farlo con il tipo adeguato di carboidrato,„ Berman dicesse.

Così lui ed il dottorando Gabriel Byrne hanno precisato per creare una linea cellulare che può produrre i glycans insoliti trovati sulle proteine di rivestimento del HIV piuttosto che i glycans complessi celle di CHO che producono normalmente. Ciò è stata permessa dal nuovo gene potente che modifica la tecnologia conosciuta come CRISPR/Cas9. Il laboratorio di Berman ha usato CRISPR per creare una nuova linea cellulare che hanno chiamato MGAT CHO, che produce le proteine che mancano dei glycans complessi che contengono l'acido sialico ed arricchiti per “il tipo semplice dell'alto mannosio„ trovato sulle proteine di rivestimento del HIV. Un vantaggio inatteso di questa nuova linea cellulare era che ha permesso ad un procedimento più semplice e meno costoso per il recupero e la depurazione delle proteine.

“La gente usata per pensare i carboidrati non è immunogena, ma il HIV gira tutto sulla sua testa e risulta che gli anticorpi più importanti sono diretti verso questo carboidrato insolito,„ Berman ha detto. “Possiamo ora fare per la prima volta i vaccini con ed abbiamo creato una versione migliore del vaccino utilizzato nella prova RV144. La nostra speranza è che porterà l'efficacia su da 31 per cento a più maggior di 50 per cento, il probabile livellato richiesto per la registrazione del prodotto.„

Il laboratorio di Berman corrente ha due linee cellulari che ha detto è pronto a cominciare produrre i vaccini su vasta scala. Ora sta cercando i partner e sta costituendo un fondo per introdurrli nei test clinici. Un vaccino è una versione migliore di AIDSVAX che comprende il genere di destra di glycans. L'altro è fatto da uno sforzo del virus chiamato Clade C che è diffuso nell'Africa meridionale ed in India e rappresenta la maggior parte di nuove infezioni HIV universalmente.

I ricercatori hanno continuato a utilizzare il vaccino di AIDSVAX negli studi clinici perché è stato così duro fare i nuovi vaccini del HIV, Berman ha detto, notanti che ci sono stati 14 tali studi da quando i risultati RV144 sono stati rilasciati nel 2009. “Ancora stanno usando che lo stesso vecchio vaccino che abbiamo fatto nell'inizio degli anni 90. Sebbene la stabilità e la sicurezza del prodotto sia testamento alla qualità del vaccino che abbiamo fatto, i nuovi vaccini sono richiesti che approfittano di tutti che abbiamo imparato da allora,„ lui ha detto. “Sottolinea appena la necessità di trovare un più modo efficace di fare un vaccino del HIV.„

Oltre alla conversazione di Berman, parecchi altri membri del suo laboratorio hanno presentato i dettagli dei loro metodi e risultati alla conferenza. Berman ha detto che pensano pubblicare alla fine di quest'anno i loro risultati in parecchi documenti. Questa ricerca è stata costituita un fondo per dalle concessioni importanti dall'istituto nazionale dell'allergia e delle malattie infettive agli istituti della sanità nazionali.

Sorgente: http://www.ucsc.edu/