Os pesquisadores relatam avanços técnicos na produção de vacinas do VIH

A pesquisa sobre o VIH ao longo da última década conduziu a muitas ideias prometedoras para que as vacinas impeçam a infecção pelo vírus do AIDS, mas poucas vacinas do candidato foram testadas muito nos ensaios clínicos. Uma razão para esta é a dificuldade técnica das vacinas da fabricação baseadas nas proteínas de envelope do vírus, de acordo com Phil Berman, que conduziu a revelação de um componente principal da única vacina para ter mostrado toda a eficácia contra o VIH em um ensaio clínico.

Berman, professor de Baskin da engenharia biomolecular em UC Santa Cruz, tem desenvolvido agora métodos novos para a produção de vacinas do VIH. Sua aproximação resolve os problemas técnicos principais que têm amaldiçoado o campo. Berman descreveu os métodos novos, e as vacinas que do candidato seu laboratório produziu, em uma conversa em uma conferência sobre vacinas do VIH realizaram na semana passada em Canadá (“tecnologias emergentes na descoberta e na revelação vacinais,” uma reunião conjunta com “progresso e caminhos para uma vacina eficaz do VIH,” do 28 de janeiro ao 1º de fevereiro em Banff, em Alberta, parte da série global da saúde dos simpósios trapezóides).

As “dúzias de candidatos vacinais interessantes foram descritas, mas a maioria não foram testados nos seres humanos porque não tem sido previamente possível os fabricar disponìvel e em tempo hábil,” Berman disseram. “A tecnologia que nós desenvolvemos deve quebrar o atasco na revelação vacinal do VIH, porque encurta tremenda o tempo, melhora o rendimento, e abaixa o custo.”

O laboratório de Berman podia usar a robótica para encurtar o tempo exigido para produzir as linha celular estáveis, necessários para fazer as proteínas para uma vacina, ao ao mesmo tempo extremamente aumentar quanto da proteína as linha celular podem produzir. O rendimento melhorado torna possível reduzir o tamanho do bioreactor necessário para fazer a vacina para grandes ensaios clínicos--de 200 - às embarcações de 10.000 litros a 50 - ou 100 embarcações do litro--tendo por resultado economias tremendas no equipamento exigido e no custo dos materiais. Além, o laboratório de Berman podia criar as linha celular que fazem proteínas de envelope do VIH com o tipo direito dos componentes do hidrato de carbono (chamados glycans) necessários para uma resposta imune eficaz.

“Os hidratos de carbono anexados à proteína são realmente importantes, algo ninguém realizado até recentemente,” Berman disse. “A maneira convencional de fazer estas vacinas da proteína de envelope incorporou o tipo errado dos hidratos de carbono. Nós sabemos agora que destruído muitos dos locais antigénicos importantes reconhecidos por anticorpos protectores.”

As linha celular derivadas das pilhas chinesas do ovário (CHO) do hamster são o padrão do sector usado para produzir proteínas de recombinação complexas para o uso terapêutico. Estas pilhas são igualmente úteis para a produção de vacinas do VIH. O gene para a proteína desejada é transferido em pilhas de CHO em um processo chamado transfection, e os dez dos milhares de pilhas transfected são seleccionados para encontrar poucas pilhas raras que produzem grandes quantidades da proteína. As melhores linha celular são crescidas em grandes grupos, em um processo similar à fermentação de fermento para fazer a cerveja, e as proteínas então são isoladas e refinadas.

O laboratório de Berman desenvolveu um método robótico novo para isolar a alto-produção das linha celular que fazem proteínas de envelope do VIH. Isto encurtou o tempo exigido para produzir linha celular estáveis de 18 a 24 meses a apenas 2 ou 3 meses, quando aumentar render por um factor de 100 a 200. Aquelas melhorias são em comparação com a experiência precedente de Berman que cria a vacina de AIDSVAX, primeiramente em Genentech e então em VaxGen.

AIDSVAX era um componente de um regime vacinal experimental usado em um ensaio clínico em grande escala conhecido como RV144, que mostrou 31 por cento de eficácia em impedir infecções pelo HIV novas. Os resultados RV144 mostraram que a protecção estêve correlacionada com os anticorpos a um determinado segmento de uma proteína de envelope gp120 chamado do VIH. A outra pesquisa, contudo, revelou que muitos dos anticorpos os mais poderosos (anticorpos amplamente de neutralização capazes de neutralizar muitas tensões diferentes do VIH) reconhecem realmente os componentes do hidrato de carbono (glycans) anexados a gp120.

“Nós realizamos que a vacina original de AIDSVAX teve o tipo completamente errado de hidrato de carbono, e que nós pudemos melhorar o nível de protecção se nós poderíamos encontrar uma maneira da fazer com o tipo apropriado de hidrato de carbono,” Berman disse.

Assim e o aluno diplomado Gabriel Byrne expor para criar uma linha celular que pudesse produzir os glycans incomuns encontrados em proteínas de envelope do VIH um pouco do que os glycans complexos pilhas de CHO que produzem normalmente. Isto foi tornado possível pelo gene novo poderoso que edita a tecnologia conhecida como CRISPR/Cas9. O laboratório de Berman usou CRISPR para criar uma linha celular que nova chamaram MGAT CHO, que produz as proteínas que faltam os glycans complexos que contêm o ácido sialic e enriquecidos para “o tipo simples da manose alta” encontrado em proteínas de envelope do VIH. Um benefício inesperado desta linha celular nova era que permitiu um processo mais simples, menos caro para recuperar e refinar as proteínas.

Os “povos usados para pensar hidratos de carbono não são imunogenéticos, mas o VIH gira tudo em sua cabeça, e despeja que os anticorpos os mais importantes estão dirigidos a este hidrato de carbono incomum,” Berman disse. “Nós podemos agora fazer vacinas com ele pela primeira vez, e nós criamos uma versão melhorada da vacina usada na experimentação RV144. Nossa esperança é que trará a eficácia acima de 31 por cento a maior de 50 por cento, o provável nivelado exigido para o registo do produto.”

O laboratório de Berman tem actualmente duas linha celular que disse está pronto para começar produzir vacinas em grande escala. Agora está procurando sócios e está financiando-os para trazê-los em ensaios clínicos. Uma vacina é uma versão melhorada de AIDSVAX que incorpora o tipo direito dos glycans. O outro é feito de uma tensão do vírus chamado Clade C que é difundido na África meridional e na Índia e esclarece a maioria de infecções pelo HIV novas no mundo inteiro.

Os pesquisadores continuaram a usar a vacina de AIDSVAX nos estudos clínicos porque foi tão duro fazer vacinas novas do VIH, Berman disse, notando que houve 14 tais estudos desde que os resultados RV144 foram liberados em 2009. “Ainda estão usando-se que a mesma vacina que velha nós fizemos no começo dos 90. Embora a estabilidade e a segurança do produto sejam testamento à qualidade da vacina que nós fizemos, as vacinas novas são exigidas que se aproveitam de tudo que nós aprendemos desde então,” ele disse. “Apenas sublinha a necessidade de encontrar mais maneira eficaz de fazer uma vacina do VIH.”

Além do que a conversa de Berman, diversos outros membros de seu laboratório apresentaram detalhes de seus métodos e resultados na conferência. Berman disse que esperam publicar no fim deste ano seus resultados em diversos papéis. Esta pesquisa foi financiada por concessões principais do instituto nacional da alergia e de doenças infecciosas nos institutos de saúde nacionais.

Source: http://www.ucsc.edu/