Obtention des la plupart hors de la technique de CLARTÉ

insights from industryDr. Tim SteppeApplication SpecialistLogos Biosystems

Une entrevue avec M. Tim Steppe (Ph.D.) des biosystèmes de logos chez SfN 2018, discutant les dernières avances dans la technique de CLARTÉ et sienne complètent des bouts pour des scientifiques employant cette méthode dans leur recherche.

Qu'effectue à CLARTÉ une technique si utile de recherches pour des neurologistes ?

La CLARTÉ permet des chercheurs aux projections cartographiques dans des neurones par la représentation 3D en profondeur de mise en oeuvre sur des organes et des tissus. Le cerveau est l'un des meilleurs tissus que vous pouvez image suivre cette méthode car elle a un teneur si à haut pourcentage de lipides. La CLARTÉ permet à des chercheurs de tracer des voies des neurones, le regard aux liens, et potentiellement le regard aux discontinuités entre les conditions saines et modifiées.

Illustration rose de lenfant des années 80 | Shutterstock

Certains des exemples tôt de la CLARTÉ d'emploi recherchaient la toxicomanie chez les souris dans le laboratoire et la modélisation de la maladie. La CLARTÉ procure à des chercheurs de voir le cerveau plus en détail et de développer une compréhension de la façon dont elle a dispensé au niveau cellulaire.

Quels genres de maladies neurologiques la CLARTÉ peut-elle être employé pour étudier ?

Toutes sortes de maladies ! Elle peut également être employée pour étudier le développement neuronal et comment les structures se développent et projettent. L'application principale de la CLARTÉ est l'étude des conditions de la maladie, telles que la maladie d'Alzheimer, pour être comparée aux conditions normales. Elle a été également employée pour regarder le glioblastome, la maladie de Parkinson, et d'autres lésions neurologiques.

Quels défis ont des chercheurs ont fait face dans le passé en exécutant la CLARTÉ ?

Après que le laboratoire de Karl Deisseroth à l'Université de Stanford ait relâché la méthode en 2013, les chercheurs ont commencé à essayer d'établir leurs propres systèmes électrophorétiques du cru. Les biologistes ne sont pas habituellement des techniciens, tellement on ont rencontré toutes sortes de problèmes que cela a menés aux échantillons mauvais libérés ou ruinés.

Aux biosystèmes de logos, nous avons conçu les systèmes et des réactifs de X-CLARITY pour la disculpation de tissu qui permet des chercheurs les tissus à sûrement et chronique clairs. Ceci empêche des chercheurs de ruiner leur échantillon et fournit la disculpation reproductible de l'échantillon à l'échantillon.

Quel est le X-CLARITY et le quel avantages offre-t-il au-dessus d'effectuer manuellement la technique ?

La chose la plus importante pour chacun : temps.  Après que les chercheurs aient commencé à explorer la CLARTÉ, ils se sont rendus compte que c'était également une technique réellement grande pour libérer des tissus du tissu cérébral, mais également pour les lipides libérants d'autres tissus et organes. Cependant, le manque de réussite avec beaucoup de systèmes faits maisons a piloté beaucoup de chercheurs de nouveau à libérer passivement leurs échantillons, où aucun courant n'est aide appliquée éliminent des lipides. L'édition avec ceci est que vous faites fonctionner dans des semaines et des semaines de temps de disculpation.

Avec le X-CLARITY, les chercheurs peuvent éclaircir à six cerveaux entiers dans seulement 7 à 12 heures. Plutôt que des semaines aux mois pour la disculpation passive, avec le X-CLARITY, cela prend maintenant seulement des heures.

Précédemment, quand les gens ont voulu établir une image 3D ou un modèle de leur système, ils ont dû soigneusement découper des échantillons en tranches vers le bas à 20 à 30 microns, préparent ces échantillons, image chacune séparé, et les piquent alors ensemble.

La CLARTÉ permet à des gens d'améliorer la technologie de sectionnement optique de puissance de levier, qui est juste une voie de fantaisie de décrire un microscope confocal, un microscope léger de feuille, ou un microscope de multiphoton. Une fois que les lipides ont été éliminés, ces systèmes peuvent fouiller profondément dans l'échantillon, produisant de meilleures images d'une façon bien plus rapide.

Un autre aspect est souplesse. Le X-CLARITY laisse le courant, la tension, et la température à moduler, selon le type témoin. Ceci permet à des chercheurs d'optimiser les conditions pour leur propres échantillon particulier et système modèle.

Nous avons un ensemble général de directives que nous fournissons pour aider des chercheurs, mais chaque échantillon ou chaque système modèle va être légèrement différent. Nous avons développé les protocoles et les paramètres qui fonctionneront assez bien pour tout, avec tordre et l'optimisation éventuelles venant des chercheurs eux-mêmes.

Pourquoi l'avez-vous ressenti étiez-vous important pour développer une solution de CLARTÉ pour le marquage d'anticorps ?

Avec les supports de multi-échantillon que nous avons développés et vitesse du système de X-CLARITY, le goulot d'étranglement à temps tombe maintenant au marquage d'anticorps. Avec notre lot d'étiquettes neuf, nous avons divisé en deux le laps de temps qu'il prend pour souiller l'échantillon.

L'anticorps conventionnel marquant avec une souris entière libérée que l'échantillon de cerveau peut avoir besoin d'une période d'incubation de 7 à 14 jours avec du chaque anticorps - primaire et secondaire - la signifiant peut prendre n'importe où entre deux à quatre semaines pour faire le marquage. Avec de l'anticorps de DeepLabel souillant le nécessaire, cependant, il a besoin de seulement un total de 7 jours pour un cerveau entier de souris.

L'autre avantage de notre lot d'étiquettes est qu'il augmente la liaison des anticorps aux objectifs. Ceci s'applique non seulement pour libérer, les prélèvements de tissu épais, mais amincit également des parties.  Ainsi, par exemple, il peut aider à augmenter la liaison des anticorps aux objectifs récalcitrants tels que des neurotransmetteurs.

Synapse montrant les neurotransmetteurs - illustration par le nobeastsofiercenobeastsofierce | Shutterstock

Quelles sont les prochaines opérations pour votre compagnie, et les technologies que vous produisez ?

Au cours des prochaines années, nous voudrions pouvoir fournir une solution complète au flux de travail entier de disculpation de tissu. Notre objectif général est de fournir à des chercheurs un système entier qui fournit les tissus clairs, les images, et l'analyse.

Nos prochaines opérations immédiates comprendront améliorer la méthode de disculpation et le lot d'étiquettes d'anticorps que nous avons développés, et puis développer un microscope léger de feuille qui est optimisé pour l'usage avec la CLARTÉ.

Notre mission de faisceau est de développer les outils cellulaires novateurs de représentation et d'analyse.  Actuel, notre ligne de produits principale est les ripostes automatisées de cellules avec les microscopes robotisés pour études examinantes et autres de haut-débit.

Où peuvent les lecteurs trouver plus d'informations ?

Un guide par étages de CLARTÉ par des biosystèmes de logos.

Au sujet de M. Tim Steppe

Image de verticale de steppe de Tim, lLa steppe de Tim a le Ph.D. dans des sciences marines de côte d'UNC-Chapelle et a 15 ans d'expérience d'entreprise en grande partie passés avec des mises en train et de plus petites compagnies dans rôles variés comprenant le support technique, les ventes, et le mercatique.

Dans son rôle actuel en tant que spécialiste en application aux biosystèmes de logos, Tim est responsable du propriétaire et de l'éducation de personnel de vente et du développement du marché pour les produits neufs de logos.

Au sujet des biosystèmes de logos

Les biosystèmes de logos se spécialise dans les outils se développants et les technologies des sciences de la vie pour un large spectre des applications comprenant la recherche fondamentale, le contrôle qualité, et la découverte de médicaments. Depuis sa fondation en 2008, les biosystèmes de logos avait développé une suite de systèmes robotisés et d'instruments de représentation pour des laboratoires s'engageant dans la recherche avec un accent cellulaire et moléculaire.

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