Ottenendo il la maggior parte dalla tecnica di CHIAREZZA

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Un'intervista con Dott. Tim Steppe (Ph.D.) dai biosistemi del logos a SfN 2018, discutente gli ultimi avanzamenti nella tecnica di CHIAREZZA ed i suoi suggerimenti superiori per gli scienziati che utilizzano questo metodo nella loro ricerca.

Che cosa rende a CHIAREZZA così tecnica utile della ricerca per i neuroscenziati?

La CHIAREZZA permette i ricercatori alle proiezioni cartografiche in neuroni dalla rappresentazione approfondita d'avanzamento 3D sugli organi e sui tessuti. Il cervello è uno di migliori tessuti che possiate immagine facendo uso di questo metodo poichè ha così contenuto ad alta percentuale di lipidi. La CHIAREZZA permette che i ricercatori rintraccino le vie dei neuroni, lo sguardo alle connessioni e potenzialmente lo sguardo alle discontinuità fra gli stati sani ed alterati.

Illustrazione rosa del cervello umano - usato per studiare le malattie neurologiche con la tecnica di CHIAREZZA - dal bambino degli anni 80bambino degli anni 80 | Shutterstock

Alcuni degli esempi iniziali la modellistica e del laboratorio all'interno mouse nella tossicodipendenza stavano ricercando di CHIAREZZA usando della malattia. La CHIAREZZA fornisce ai ricercatori la capacità di vedere più dettagliatamente il cervello e di sviluppare una comprensione di come ha organizzato al livello cellulare.

Che generi di malattie neurologiche può la CHIAREZZA essere usata per studiare?

Tutte le specie di malattie! Può anche essere usata per studiare lo sviluppo di un neurone e come le strutture si sviluppano ed aggettano. L'applicazione principale di CHIAREZZA è lo studio sugli stati di malattia, quale il morbo di Alzheimer, essere confrontato agli stati normali. Egualmente è stata usata per esaminare il glioblastoma, la malattia del Parkinson ed altre lesioni neurologiche.

Che sfide hanno ricercatori hanno affrontato nel passato quando esegue la CHIAREZZA?

Dopo che il laboratorio di Karl Deisseroth alla Stanford University ha rilasciato il metodo nel 2013, i ricercatori hanno cominciato a provare a sviluppare i loro propri sistemi elettroforetici nostrani. I biologi non sono solitamente ingegneri, tanti si sono imbattuti in tutte le specie di problemi che quello piombo ai campioni male rimossi o rovinati.

Ai biosistemi del logos, abbiamo costruito i sistemi ed i reagenti di X-CLARITY per schiarimento del tessuto che permette i ricercatori tessuti a attendibilmente e coerente chiari. Ciò impedisce ai ricercatori di rovinare il loro campione e fornisce lo schiarimento riproducibile dal campione al campione.

Che cosa è il X-CLARITY ed il che vantaggi offre sopra manualmente l'avanzamento della tecnica?

La maggior parte della cosa importante per ognuno: tempo.  Dopo che i ricercatori hanno cominciato ad esplorare la CHIAREZZA, hanno rend contoere che era egualmente una tecnica realmente grande per la rimozione dei tessuti dal tessuto cerebrale, ma anche per i lipidi annullanti da altri tessuti ed organi. Tuttavia, la mancanza di successo con molti sistemi casalinghi ha guidato molti ricercatori di nuovo passivamente a rimuovere i loro campioni, in cui non corrente è guida applicata elimina i lipidi. L'emissione con questa è che state imbattendo nelle settimane e le settimane di tempo di schiarimento.

Con il X-CLARITY, i ricercatori possono riordinare a sei interi cervelli solo in 7 - 12 ore. Piuttosto che le settimane ai mesi per schiarimento passivo, con il X-CLARITY, ora richiede soltanto le ore.

Precedentemente, quando la gente ha voluto sviluppare un'immagine 3D o un modello del loro sistema, hanno dovuto affettare scrupoloso i campioni giù a 20 - 30 micron, preparano quei campioni, l'immagine ciascuna esclusivamente e poi li cucono insieme.

La CHIAREZZA permette che la gente migliori la tecnologia di divisione ottica di influenza, che è appena un modo operato descrivere un microscopio confocale, un microscopio leggero della lamiera sottile, o un microscopio di multiphoton. Una volta che i lipidi sono stati eliminati, questi sistemi possono ricercare in profondità nel campione, generante le migliori immagini in un modo ben più veloce.

Un altro aspetto è la flessibilità. Il X-CLARITY concede la corrente, la tensione e la temperatura da modulare, secondo il tipo del campione. Ciò permette che i ricercatori ottimizzino i termini per il loro propri campione e sistema-modello particolari.

Abbiamo un insieme generale delle linee guida che forniamo per aiutare i ricercatori, ma ogni campione o ogni sistema-modello sta andando essere leggermente differente. Abbiamo sviluppato i protocolli ed i parametri che funzioneranno abbastanza bene per tutto, con l'ultime tweaking ed ottimizzazione che vengono dai ricercatori stessi.

Perché lo avete ritenuto eravate importante da trovare una soluzione di CHIAREZZA per il contrassegno dell'anticorpo?

Con i supporti del multi-campione che abbiamo sviluppato e la velocità del sistema di X-CLARITY, il grave ostacolo a tempo ora cade al contrassegno dell'anticorpo. Con il nostro corredo etichette nuovo, abbiamo diviso in due il lasso di tempo che cattura per macchiare il campione.

L'anticorpo convenzionale che contrassegna con un intero campione rimosso del cervello del mouse può richiedere un periodo di incubazione dei 7 - 14 giorni con ogni anticorpo - primario e secondario - che lo significa può catturare dovunque fra due - quattro settimane per fare il contrassegno. Con l'anticorpo di DeepLabel che macchia il kit, tuttavia, richiede soltanto complessivamente 7 giorni per un intero cervello del mouse.

L'altro vantaggio del nostro corredo etichette è che aumenta il legame degli anticorpi agli obiettivi. Ciò si applica non solo per annullare, campioni di tessuto spessi, ma egualmente assottiglia le sezioni.  Così, per esempio, può contribuire ad aumentare il legame degli anticorpi agli obiettivi tenaci quali i neurotrasmettitori.

Sinapsi che mostra i neurotrasmettitori - illustrazione da nobeastsofiercenobeastsofierce | Shutterstock

Che cosa sono i punti seguenti per la vostra società e le tecnologie che producete?

Nel corso di prossimi anni, vorremmo potere fornire una soluzione completa all'intero flusso di lavoro di schiarimento del tessuto. Il nostro scopo globale è di fornire ai ricercatori un intero sistema che consegna i chiari tessuti, le immagini e l'analisi.

I nostri punti seguenti immediati includeranno il miglioramento il metodo di schiarimento e del corredo etichette dell'anticorpo che abbiamo messo a punto e poi sviluppare un microscopio leggero della lamiera sottile che è ottimizzato per uso con CHIAREZZA.

La nostra missione di memoria è di sviluppare gli strumenti cellulari innovatori di analisi e della rappresentazione.  Corrente, la nostra serie di prodotti principale è contatori di cellule automatizzati con i microscopi automatizzati per studi di schermatura ed altri di alto-capacità di lavorazione.

Dove possono i lettori trovare più informazioni?

Una guida graduale a CHIAREZZA dai biosistemi del logos.

Circa Dott. Tim Steppe

Immagine del ritratto della steppa di Tim, lLa steppa di Tim ha Ph.D. nelle scienze marine dalla collina della UNC-Cappella ed ha 15 anni di esperienza dell'industria principalmente passare con le partenze e le più piccole imprese in vari ruoli compreso il supporto tecnico, le vendite e l'introduzione sul mercato.

Nel suo ruolo corrente come specialista dell'applicazione ai biosistemi del logos, Tim è responsabile del cliente e della formazione della forza di vendite e dello sviluppo del mercato per i nuovi prodotti del logos.

Circa i biosistemi del logos

I biosistemi del logos si specializza negli strumenti di sviluppo e nelle tecnologie di scienze biologiche per un'ampia gamma di applicazioni compreso ricerca di base, controllo di qualità e la scoperta della droga. Dal suo fondare nel 2008, i biosistemi del logos sta mettendo a punto una serie di sistemi e di strumenti automatizzati della rappresentazione per i laboratori che si impegnano nella ricerca con un'enfasi cellulare e molecolare.

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