Obtendo o a maioria fora da técnica da CLARIDADE

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Uma entrevista com Dr. Tim Estepe (Ph.D.) das biosistemas dos logotipos em SfN 2018, discutindo os avanços os mais atrasados na técnica da CLARIDADE e suas pontas superiores para os cientistas que usam este método em sua pesquisa.

Que faz a CLARIDADE uma técnica tão útil da pesquisa para neurocientistas?

A CLARIDADE permite pesquisadores às projecções de mapa nos neurônios pela imagem lactente 3D detalhada de execução em órgãos e em tecidos. O cérebro é um dos melhores tecidos que você pode imagem usando este método porque tem um índice tão alto do lipido. A CLARIDADE permite que os pesquisadores sigam caminhos dos neurônios, olhar em conexões, e potencial olhar em descontinuidades entre estados saudáveis e alterados.

Ilustração cor-de-rosa do cérebro humano - usado para estudar doenças neurológicas com a técnica da CLARIDADE - pela criança dos anos 80criança dos anos 80 | Shutterstock

Alguns dos exemplos adiantados de usar a CLARIDADE pesquisavam a toxicodependência nos ratos dentro do laboratório e da modelagem da doença. A CLARIDADE fornece pesquisadores a capacidade para considerar com maiores detalhes o cérebro e para desenvolver uma compreensão de como organizou a nível celular.

Que tipos de doenças neurológicas pode a CLARIDADE ser usada para estudar?

Todos os tipos de doenças! Pode igualmente ser usada para estudar a revelação neuronal e como as estruturas crescem e se projectam. A aplicação principal da CLARIDADE é o estudo de estados da doença, tais como a doença de Alzheimer, para ser comparado aos estados normais. Foi usada igualmente para olhar o glioblastoma, a doença de Parkinson, e outras lesões neurológicas.

Que desafios têm pesquisadores enfrentaram no passado ao executar a CLARIDADE?

Depois que o laboratório de Karl Deisseroth na Universidade de Stanford liberou o método em 2013, os pesquisadores começaram a tentar construir seus próprios sistemas electrophoretic caseiros. Os biólogos não são geralmente coordenadores, tão muitos foram executado em todos os tipos de problemas que aquele conduziu às amostras deficientemente canceladas ou arruinadas.

Em biosistemas dos logotipos, nós projectamos os sistemas e reagentes de X-CLARITY para o esclarecimento do tecido que permite pesquisadores tecidos a confiantemente e consistentemente claros. Isto impede que os pesquisadores arruinem sua amostra e fornece o esclarecimento reprodutível da amostra à amostra.

Que são o X-CLARITY e o que benefícios oferece sobre manualmente a execução da técnica?

A coisa a mais importante para todos: tempo.  Depois que os pesquisadores começaram a explorar a CLARIDADE, realizaram que era igualmente uma técnica realmente grande para cancelar tecidos do tecido de cérebro, mas igualmente para lipidos de cancelamento de outros tecidos e órgãos. Contudo, a falta do sucesso com muitos sistemas caseiros conduziu muitos pesquisadores de volta passiva a cancelar suas amostras, onde não actual é ajuda aplicada remove os lipidos. A edição com esta é que você está sendo executado em semanas e em semanas do tempo do esclarecimento.

Com o X-CLARITY, os pesquisadores podem esclarecer a seis cérebros inteiros em apenas 7 a 12 horas. Um pouco do que semanas aos meses para o esclarecimento passivo, com o X-CLARITY, agora toma somente horas.

Previamente, quando os povos quiseram construir uma imagem 3D ou um modelo de seu sistema, tiveram que cuidadosa cortar amostras para baixo a 20 a 30 mícrons, preparam aquelas amostras, imagem cada um separada, e costuram-nas então junto.

A CLARIDADE permite que os povos melhorem a tecnologia de secção óptica da força de alavanca, que é apenas uma maneira extravagante de descrever um microscópio confocal, um microscópio leve da folha, ou um microscópio do multiphoton. Uma vez que os lipidos foram removidos, estes sistemas podem investigar profundamente na amostra, gerando melhores imagens em uma maneira distante mais rápida.

Um outro aspecto é flexibilidade. O X-CLARITY reserva a corrente, a tensão, e a temperatura a ser modulada, segundo o tipo da amostra. Isto permite que os pesquisadores aperfeiçoem as condições para seus próprios amostra particular e sistema modelo.

Nós temos um grupo geral de directrizes que nós fornecemos para ajudar pesquisadores, mas cada amostra ou cada sistema modelo estão indo ser ligeira diferente. Nós desenvolvemos os protocolos e os parâmetros que trabalharão razoavelmente bem para tudo, com tweaking e a optimização finais que vêm dos pesquisadores eles mesmos.

Por que você o sentiu era importante desenvolver uma solução da CLARIDADE para a rotulagem do anticorpo?

Com os suportes da multi-amostra que nós desenvolvemos e velocidade do sistema de X-CLARITY, o gargalo a tempo cai agora à rotulagem do anticorpo. Com nosso jogo de etiquetas novo, nós partimos ao meio a quantidade de tempo que toma para manchar a amostra.

O anticorpo convencional que etiqueta com um rato inteiro cancelado a amostra do cérebro que pode exigir um período de incubação de 7 a 14 dias com cada anticorpo - preliminar e secundário - que significa o pode tomar em qualquer lugar entre duas a quatro semanas para fazer a rotulagem. Com o anticorpo de DeepLabel que mancha o jogo, contudo, exige somente um total de 7 dias para um cérebro inteiro do rato.

O outro benefício de nosso jogo de etiquetas é que aumenta o emperramento dos anticorpos aos alvos. Isto aplica-se para cancelar não somente, amostras de tecido grossas, mas igualmente dilui-se secções.  Assim, por exemplo, pode ajudar a aumentar o emperramento dos anticorpos aos alvos recalcitrantes tais como neurotransmissor.

Sinapse que mostra os neurotransmissor - ilustração pelo nobeastsofiercenobeastsofierce | Shutterstock

Que são os passos seguintes para sua empresa, e as tecnologias que você produz?

Sobre os próximos anos, nós gostaríamos de poder fornecer uma solução completa aos trabalhos inteiros do esclarecimento do tecido. Nosso objetivo total é fornecer pesquisadores um sistema inteiro que entregue tecidos claros, imagens, e análise.

Nossos passos seguintes imediatos incluirão o melhoramento do método do esclarecimento e do jogo de etiquetas do anticorpo que nós desenvolvemos, e então desenvolver um microscópio leve da folha que seja aperfeiçoado para o uso com CLARIDADE.

Nossa missão do núcleo é desenvolver ferramentas celulares inovativas da imagem lactente e de análise.  Actualmente, nossa linha de produtos principal é contadores de pilha automatizados junto com microscópios automatizados para estudos de exame e outros da alto-produção.

Onde podem os leitores encontrar mais informação?

Um guia passo a passo à CLARIDADE por biosistemas dos logotipos.

Sobre o Dr. Tim Estepe

Imagem do retrato do estepe de Tim, entrevistadoO estepe de Tim tem o Ph.D. em ciências marinhas do monte da UNC-Capela e tem 15 anos de experiência da indústria passados na maior parte com partidas e empresas menores nos vários papéis que incluem o suporte técnico, as vendas, e o mercado.

Em seu papel actual como um especialista da aplicação em biosistemas dos logotipos, Tim é responsável para o cliente e a educação da força de vendas e a revelação do mercado para produtos novos dos logotipos.

Sobre biosistemas dos logotipos

As biosistemas dos logotipos especializam-se em ferramentas tornando-se e em tecnologias da ciência da vida para um espectro largo das aplicações que incluem a investigação básica, o controle da qualidade, e a descoberta da droga. Desde seu fundar em 2008, as biosistemas dos logotipos têm desenvolvido uma série de sistemas e de instrumentos automatizados da imagem lactente para os laboratórios que contratam na pesquisa com uma ênfase celular e molecular.

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    Logos Biosystems. (2019, March 29). Obtendo o a maioria fora da técnica da CLARIDADE. News-Medical. Retrieved on November 19, 2019 from https://www.news-medical.net/news/20181217/Getting-the-Most-Out-of-the-CLARITY-Technique.aspx.

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